楊 洋，王海蘭

（1．陜西中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院，陜西 咸陽 712046；2．陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西 咸陽 712000）

宮頸癌在全球女性惡性腫瘤發(fā)病率中僅次于乳腺癌，位居第2位[1]。而HPV是引發(fā)宮頸癌最主要的因素[2]。所以了解咸陽市女性HPV感染情況，對(duì)防治宮頸癌是必需的。目前用PCR-反向點(diǎn)雜交法檢測(cè)HPV DNA。HPV依據(jù)其引發(fā)宮頸癌的危險(xiǎn)性分為低、中、高危型。檢測(cè)咸陽地區(qū)2541例宮頸樣本的HPV DNA，分析咸陽女性HPV的感染和型別，為臨床篩查、疫苗研制和宮頸癌早期防治提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2014年4月至2016年3月來陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院婦科門診、住院及體檢的女性2541例，年齡16～91歲。

1.2 儀器與試劑

德國Biometra系列PCR基因擴(kuò)增儀、自動(dòng)核酸分子雜交儀，核酸提取試劑、核酸擴(kuò)增試劑、反向點(diǎn)雜交試劑（廣州安必平醫(yī)藥科技有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集及保存

醫(yī)護(hù)人員用消毒棉拭子在宮頸口獲取足量的上皮細(xì)胞，取出置于生理鹽水中，編號(hào)，立即送檢。

1.3.2 DNA的提取

將待檢標(biāo)本混勻后轉(zhuǎn)至1.5 ml離心管，12000 rpm離心5 min。棄上清，加50 ulDNA提取液并震蕩混勻，100℃干浴10 min，12000 rpm離心5 min，取上清液擴(kuò)增。

1.3.3 PCR擴(kuò)增

取5ul制備好的上清液至PCR反應(yīng)體系中，循環(huán)條件：50℃3 min，95℃15 s，1個(gè)循環(huán)；94℃40 s，55℃40 s，72℃40 s，40個(gè)循環(huán)；72℃7 min，1個(gè)循環(huán)。

1.3.4 雜交、結(jié)合和顯色

雜交：將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物98℃變性8 min，然后立即加入放有雜交液和HPV分型雜交膜條的模槽中，42℃低轉(zhuǎn)速雜交1 h。結(jié)合：膜條清洗后在結(jié)合液中42℃結(jié)合10 min。顯色：清洗膜條10 min，在20℃～25℃避光顯色5 min后轉(zhuǎn)移至去離子水中終止反應(yīng)5 min，按試劑說明書進(jìn)行結(jié)果判讀。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

分析采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行分析，采用x2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 HPV的感染率

2541例標(biāo)本中HPV陽性525例，陽性率20.6 %，其中2014～2016年陽性率依次18.9%，20.9%，25.7%。年份間總體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=6.101，P＜0.05）。檢測(cè)28種HPV基因型，陽性率由高到低是高危型16（29.3%）、52（13%）和58（8%）、疑似高危型53（7.2%）及低危型44（7%）。

2.2 HPV感染率的年份變化趨勢(shì)

分析2014-2016年HPV的28種基因型的感染率，結(jié)果顯示疑似高危型26（x2=12.764，P＜0.05）和低危型81（x2=5.980，P＜0.05）的陽性率有上升趨勢(shì)。

2.3 HPV多重感染情況分析

HPV感染以單一感染為主，占72.4%（380/525）；多重感染中以二重感染為主，占18.5%（97/525）；最多混合感染為七重感染。多重感染陽性率在不同年份中無差異。

2.4 HPV感染的年齡分布

受檢者分六個(gè)年齡段，分別統(tǒng)計(jì)其陽性率。陽性率由高到低依次＜20歲33.33%（3/9），50～59歲26.86%（101/376）、20～29歲25.27%（95/376）。不同年齡女性HPV感染的有顯著差異（x2=23.158，P＜0.05）。

3 討 論

2014～2016年HPV陽性率呈增加的趨勢(shì)，應(yīng)加強(qiáng)咸陽HPV的篩查工作。流行病學(xué)調(diào)查[3]顯示，不同地區(qū)HPV分型存在差異，歐美地區(qū)以16和18為主，也是疫苗研制的主要型別。亞洲[4]卻以52和58主。本研究HPV陽性率依次是16、52、58，與智艷芳[5]的結(jié)果一致。提示咸陽疫苗應(yīng)以16、52、58型為主。研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)患者處于HPV多重感染時(shí)，其致病風(fēng)險(xiǎn)約單一感染的1.6倍，增加癌變風(fēng)險(xiǎn)[6]。本研究發(fā)現(xiàn)咸陽HPV感染以單重感染為主，多重感染以二重感染為主，不存在多重感染增加的情況。但是咸陽存在六、七重感染。因此，仍然需要加大HPV感染的調(diào)查和防治工作，為臨床治療提供方向。研究顯示HPV感染患者存在年輕化趨勢(shì)，提示需擴(kuò)大HPV篩查的年齡范圍，做到早發(fā)現(xiàn)、早治療。

[1] 杜 宏,索蘭草,劉紅賢,et al.甘肅地區(qū)女性宮頸HPV感染的現(xiàn)狀研究[J].暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版),2015,36(1):40-45.

[2] 林明暉,劉崇梅,王彩霞,et al.人乳頭瘤病毒檢測(cè)及液基細(xì)胞學(xué)檢查在宮頸癌篩查中的應(yīng)用[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2011,08(3):262-263.

[3] S D S,M D, X C,et al.Worldwide prevalence and genotype distribution of cervical human papillomavirus DNA in women with normal cytology:a meta-analysis [J].The Lancet Infectious diseases,2007,7(7):453.

[4] Bao Y P,Li N,Smith J S,et al.Human papillomavirus type distribution in women from Asia: a meta-analysis [J].International Journal of Gynecological Cancer,2008,18(1):71–79.

[5] Zhi Y F,Xiao-Fu L I,Ban Z Y,et al.Prevalence and genotype distribution of human papillomavirus infections in women of Henan province [J].Chinese Journal of Cancer Prevention &Treatment,2014,14(2):5452-5461.

[6] Bosch F X,Burchell A N,Schiffman M,et al.Epidemiology and natural history of human papillomavirus infections and typespecific implications in cervical neoplasia[J].Vaccine,2008,26 Suppl 10(26 Suppl 10):K1.