俞璐，曹曉華，夏明

·綜述·

大鼠局灶性腦缺血模型神經(jīng)功能缺損行為學(xué)評(píng)價(jià)工具的研究進(jìn)展

俞璐1，曹曉華2，夏明1

缺血性腦卒中是威脅人類健康的重大疾病，在大鼠腦缺血及腦缺血-再灌注損傷模型的實(shí)驗(yàn)研究中，行為學(xué)評(píng)價(jià)是判定腦缺血嚴(yán)重程度、神經(jīng)功能及學(xué)習(xí)記憶功能缺損的重要指標(biāo)。本文對(duì)大鼠腦缺血后神經(jīng)功能缺損行為學(xué)評(píng)價(jià)方法及各自特點(diǎn)做一綜述。

腦缺血；大鼠；行為學(xué)評(píng)價(jià)

目前在世界范圍內(nèi)，腦血管疾病已經(jīng)成為威脅人類健康的重要疾病，其中急性缺血性卒中約80%以上，具有高發(fā)病率、高致殘率、高致死率和高復(fù)發(fā)率的特點(diǎn)[1]。動(dòng)物腦缺血模型可以模擬人類相應(yīng)的腦缺血疾病，較常用的大鼠腦缺血模型制備方法包括：四血管阻斷法、雙血管阻斷法、三血管阻斷法、線栓阻塞大腦中動(dòng)脈法等[2]。其中，線栓法制備的可逆性大腦中動(dòng)脈阻塞（middle cerebral artery occlution，MCAO）模型創(chuàng)傷小、缺血部位固定，可控性好，動(dòng)物存活時(shí)間長(zhǎng)，是目前國(guó)內(nèi)外最常用、也是較為理想的局灶性腦缺血模型[3]。MCAO引起損傷的腦區(qū)主要包括手術(shù)側(cè)的額頂顳葉皮質(zhì)、豆?fàn)詈恕⑶鹉X及內(nèi)囊，造模成功后因腦內(nèi)血液供應(yīng)障礙導(dǎo)致相應(yīng)腦區(qū)缺血缺氧，從而出現(xiàn)肢體功能障礙、認(rèn)知損害及情感改變等一系列癥狀，測(cè)試模型動(dòng)物癥狀及體征可評(píng)估缺血損傷程度、功能恢復(fù)情況及模型穩(wěn)定情況。近年來，越來越多行為學(xué)測(cè)試被應(yīng)用于大鼠缺血模型，與各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)合，實(shí)現(xiàn)較為全面系統(tǒng)的腦缺血評(píng)價(jià)體系?，F(xiàn)對(duì)目前較常用的大鼠腦缺血后行為學(xué)評(píng)價(jià)方法綜述如下。

1 感覺運(yùn)動(dòng)功能評(píng)價(jià)

評(píng)價(jià)感覺運(yùn)動(dòng)功能的常用方法包括神經(jīng)癥狀評(píng)分、走橫木實(shí)驗(yàn)、轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、圓筒實(shí)驗(yàn)等，與感覺運(yùn)動(dòng)功能相關(guān)的腦區(qū)包括皮質(zhì)、紋狀體等，通過該類實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛟u(píng)估動(dòng)物感覺運(yùn)動(dòng)功能，從而判斷大鼠腦缺血后的損傷程度。

1.1 神經(jīng)功能評(píng)分

Bederson評(píng)分是目前國(guó)內(nèi)外引用頻率最高的神經(jīng)功能評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[4]，共分為4個(gè)功能等級(jí)，0分：無神經(jīng)損傷癥狀；1分：懸尾試驗(yàn)不能完全伸展對(duì)側(cè)前爪；2分：前肢抵抗對(duì)側(cè)推力能力下降；3分：向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈。隨著該項(xiàng)評(píng)分的應(yīng)用成熟，有學(xué)者對(duì)Bederson評(píng)分進(jìn)行改良。如Menzies評(píng)分總分為4分：0分：無神經(jīng)功能損傷，雙前肢對(duì)稱向地面伸展；1分：對(duì)側(cè)前肢持續(xù)內(nèi)收；2分：對(duì)側(cè)前肢握力下降；3分：輕微刺激大鼠尾巴，向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈；4分：自主持續(xù)轉(zhuǎn)圈[5]。Belayev評(píng)分法綜合姿勢(shì)反射實(shí)驗(yàn)和前肢放置實(shí)驗(yàn)，建立了評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[6]。Garcia JH等[7]詳細(xì)評(píng)價(jià)了大鼠的運(yùn)動(dòng)和感覺功能，建立了18分評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，分?jǐn)?shù)最低3分為損傷最嚴(yán)重。Clark評(píng)分分別從一般功能損傷和局灶性功能損傷兩個(gè)角度進(jìn)行了評(píng)分設(shè)計(jì)[8]。神經(jīng)癥狀評(píng)分法直觀、簡(jiǎn)便，無需借助其他特殊儀器設(shè)備，便可從整體角度觀察受試動(dòng)物神經(jīng)損傷程度，在行為學(xué)測(cè)試中應(yīng)用廣泛。但相對(duì)其他測(cè)試方法，此法主觀、粗糙，只能做粗略觀察和估計(jì)，無法準(zhǔn)確描述神經(jīng)損傷及恢復(fù)情況，故在應(yīng)用時(shí)常常聯(lián)合其他實(shí)驗(yàn)評(píng)估缺血?jiǎng)游锬Ｐ偷母杏X運(yùn)動(dòng)功能而不作單獨(dú)使用。

1.2 走橫木實(shí)驗(yàn)

走橫木實(shí)驗(yàn)（beam walking test）根據(jù)動(dòng)物在窄木條上運(yùn)動(dòng)能否保持平衡、觀察前后肢使用情況和失腳跌落次數(shù)進(jìn)行評(píng)分，此法能夠評(píng)價(jià)動(dòng)物缺血造模后的運(yùn)動(dòng)功能、肢體肌力、平衡功能及身體協(xié)調(diào)性。目前以Feeney等[9]的評(píng)分方法最為常用。此法取一橫木長(zhǎng)120 cm，寬2.5cm，一端為強(qiáng)光及聲音噪聲，另一端為黑盒，評(píng)分等級(jí)為1～7分。7分：能夠順利爬行橫木，癱瘓肢體完全起作用，無明顯神經(jīng)體征；6分：能夠爬過橫木，癱瘓肢體起作用＞50%；5分：能夠爬過橫木，癱瘓肢體起作用＜50%；4分：不能順利爬過橫木，跌倒幾率＜50%；3分：不能順利爬過橫木，跌倒幾率＞50%；2分：在橫木上不能行走，但可以坐在上面；1分：完全不能夠爬過橫木且無法將后肢放在水平位置，放在橫木上會(huì)掉下去。國(guó)內(nèi)王媛等[10]在用MCAO模型大鼠進(jìn)行走橫木實(shí)驗(yàn)時(shí)，發(fā)現(xiàn)其評(píng)分在與大鼠是否充分訓(xùn)練有很大關(guān)系。因?yàn)閭€(gè)體差異，大鼠在MCAO手術(shù)后無法在橫木上行走不是因?yàn)橹w障礙，而是由于前期訓(xùn)練不充分，加之造模時(shí)損傷造成的恐懼因素導(dǎo)致。所以應(yīng)加強(qiáng)大鼠術(shù)前的適應(yīng)性訓(xùn)練，使其能夠順利通過橫木，以確保術(shù)后實(shí)驗(yàn)評(píng)分的準(zhǔn)確性和客觀性。Hatinen等[11]提出，有時(shí)評(píng)分顯示大鼠運(yùn)動(dòng)功能已恢復(fù)，但實(shí)際感覺、運(yùn)動(dòng)損傷仍然存在，評(píng)分結(jié)果是由于多次訓(xùn)練后大鼠形成習(xí)慣，故而該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)仍需要結(jié)合其他測(cè)試，才能全面評(píng)估大鼠的感覺運(yùn)動(dòng)功能。

1.3 轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)

轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)（rota-rod test）最早由Dunham和Miya建立[12]。實(shí)驗(yàn)最先用于大鼠，后被改良后也可用于小鼠，在腦缺血研究中廣泛用于評(píng)估動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)技能和整合性。先將大鼠進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練，在正式實(shí)驗(yàn)中，待動(dòng)物在恒定速度轉(zhuǎn)動(dòng)的轉(zhuǎn)棒上保持平衡后，逐漸加快轉(zhuǎn)棒速度，直到大鼠從轉(zhuǎn)棒上掉落，大鼠在轉(zhuǎn)棒上停留的時(shí)間可以作為衡量其運(yùn)動(dòng)能力的指標(biāo)。Soman等[13]認(rèn)為大鼠在轉(zhuǎn)棒上的運(yùn)動(dòng)表現(xiàn)受到如運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性、學(xué)習(xí)能力及肌肉耐力等因素影響。Abhilasha等[14]將轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)作為評(píng)估缺血再灌注損傷后精神運(yùn)動(dòng)障礙行為學(xué)方面的敏感指標(biāo)，結(jié)果顯示缺血后大鼠在轉(zhuǎn)棒上停留時(shí)間明顯減少，與國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道一致。

1.4 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)

曠場(chǎng)試驗(yàn)（open field test）通過記錄大鼠在新環(huán)境中某些行為的發(fā)生頻率和持續(xù)時(shí)間，以及動(dòng)物尿便次數(shù)評(píng)價(jià)大鼠在新環(huán)境中自主行為、探索行為與緊張度。實(shí)驗(yàn)裝置由曠場(chǎng)反應(yīng)箱和數(shù)據(jù)自動(dòng)采集及處理系統(tǒng)兩部分組成，操作簡(jiǎn)便，具有無創(chuàng)、靈敏、客觀等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用。Shu-Jen Change等[15]將姿勢(shì)反射實(shí)驗(yàn)和曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)合，評(píng)估動(dòng)物的感覺運(yùn)動(dòng)功能，兩項(xiàng)實(shí)驗(yàn)共分為5個(gè)等級(jí)，分別為0分：正常；1分：大鼠前肢和身體向受損大腦對(duì)側(cè)持續(xù)彎曲；2分：大鼠可以向兩側(cè)移動(dòng)，當(dāng)尾部被抓起，它只能向受損大腦對(duì)側(cè)轉(zhuǎn)圈；3分：大鼠只能向受損大腦對(duì)側(cè)轉(zhuǎn)圈；4分：大鼠步行困難或者無法步行。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，在MCAO術(shù)后第1天，大鼠在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中能夠向受損大腦對(duì)側(cè)打圈移動(dòng)。術(shù)后7 d大鼠不再保持向受損大腦對(duì)側(cè)轉(zhuǎn)圈，術(shù)后14 d大鼠無異于正常鼠。該實(shí)驗(yàn)不但可以評(píng)價(jià)大鼠感覺運(yùn)動(dòng)功能，還能通過計(jì)算動(dòng)物排便顆粒判斷大鼠的焦慮狀態(tài)[16]。在實(shí)驗(yàn)過程中，值得注意的是，動(dòng)物在24 h內(nèi)有活動(dòng)周期，故每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)在同一時(shí)間段內(nèi)完成；保持實(shí)驗(yàn)室隔音、光強(qiáng)度溫和，濕度溫度適宜；2次實(shí)驗(yàn)之間要清理實(shí)驗(yàn)設(shè)備，以免影響下次實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1.5 圓筒實(shí)驗(yàn)

圓筒實(shí)驗(yàn)（cylinder test）主要針對(duì)不對(duì)稱中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，如帕金森病、阿爾茨海默病、腦卒中等，研究大鼠在貼壁站立過程中前肢的對(duì)稱性和使用率[17]。實(shí)驗(yàn)將大鼠置于一個(gè)透明的樹脂玻璃圓筒中3～10 min，攝像記錄其活動(dòng)情況。圓筒的形狀能夠刺激大鼠用前肢垂直探索筒壁，記錄3 min內(nèi)大鼠后肢站立時(shí)前肢最初承重觸及筒壁的次數(shù)，并分別記錄左、右側(cè)觸及和雙側(cè)觸及的次數(shù)。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，大鼠在局灶性腦缺血后，在圓筒實(shí)驗(yàn)中前肢的使用情況具有不對(duì)稱性，且在前肢垂直探索筒壁的過程中，更傾向于使用正常前肢[18]。

2 學(xué)習(xí)記憶功能評(píng)價(jià)

評(píng)價(jià)學(xué)習(xí)記憶功能的常用方法主要包括各類迷宮實(shí)驗(yàn)、主、被動(dòng)回避實(shí)驗(yàn)和跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)等，其中迷宮實(shí)驗(yàn)通過測(cè)試大鼠工作記憶、線索記憶及復(fù)雜記憶功能評(píng)估大腦缺血后以海馬為主的相關(guān)腦區(qū)受損情況。

2.1 水迷宮實(shí)驗(yàn)

Morris水迷宮（Morris water maze test）自上世紀(jì)八十年代英國(guó)心理學(xué)家Richard Morris首次使用以來，成為評(píng)估大鼠空間學(xué)習(xí)和空間記憶功能的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)[19]，后陸續(xù)有研究者將實(shí)驗(yàn)改良并用于小鼠。實(shí)驗(yàn)將測(cè)試大鼠放在一個(gè)盛著不透明的圓形水池中，利用大鼠天生游泳健將，卻厭惡水中狀態(tài)的特性，強(qiáng)迫其游泳，學(xué)習(xí)并尋找隱藏在水下的逃生平臺(tái)。根據(jù)大鼠找到平臺(tái)所需時(shí)間、所經(jīng)路線長(zhǎng)度及游過平臺(tái)次數(shù)等指標(biāo)評(píng)估大鼠對(duì)空間位置覺和方向覺的學(xué)習(xí)記憶能力。經(jīng)典的測(cè)試程序包括兩個(gè)部分，即定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)[20]。國(guó)內(nèi)有學(xué)者對(duì)實(shí)驗(yàn)鼠Morris水迷宮成績(jī)的影響因素進(jìn)行探討，認(rèn)為水溫、訓(xùn)練時(shí)間安排、實(shí)驗(yàn)程序安排及鼠的主觀因素都可影響水迷宮成績(jī)[21[22]，同時(shí)在水迷宮實(shí)驗(yàn)中腦缺血導(dǎo)致認(rèn)知缺損所表現(xiàn)出的運(yùn)動(dòng)損傷包括：肢體乏力、趨觸性游泳（不斷沿著水池壁游泳）、轉(zhuǎn)圈姿勢(shì)增多等[23]。

2.2 旋臂迷宮實(shí)驗(yàn)

旋臂迷宮實(shí)驗(yàn)（radial arm maze test）最早是由Olton及其同事設(shè)計(jì)的，利用房間內(nèi)提供的空間提示信息，促使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物找到放置食物的臂所在的部位，是一項(xiàng)由食物獎(jiǎng)勵(lì)驅(qū)使的任務(wù)，同樣用于評(píng)估動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶功能，該實(shí)驗(yàn)對(duì)海馬損傷尤為敏感[24]。正常的動(dòng)物通常會(huì)利用一切策略來完成任務(wù)，如依靠嗅覺尋找食物氣味來判斷其位置，或者在離開一個(gè)臂進(jìn)入另外一個(gè)臂時(shí)總是向右轉(zhuǎn)，從而更快速尋找到食物位置等。但目前旋臂迷宮較少用于評(píng)估腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ驼J(rèn)知功能，因?yàn)榇笫笤谀X缺血手術(shù)后體重明顯下降，無法像假手術(shù)組動(dòng)物那樣積極尋找食物[25]，并且食物的氣味可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果客觀性[26]。

2.3 Barnes迷宮實(shí)驗(yàn)

Barnes迷宮實(shí)驗(yàn)（Barnes maze test）自1976年發(fā)明以來，主要測(cè)量動(dòng)物對(duì)一個(gè)目標(biāo)的空間記憶能力，針對(duì)動(dòng)物腦缺血后運(yùn)功功能受損在Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)中可能出現(xiàn)的假陽性結(jié)果，Barnes迷宮的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中無需足底電擊、食物奪取等，對(duì)動(dòng)物的刺激更少，體能消耗要求更低。目前Barnes迷宮在高度緊張大鼠[27]、代謝綜合征大鼠[28]、全腦缺血認(rèn)知功能損害大鼠[29]、帕金森病大鼠[30]等模型中均有廣泛應(yīng)用。但這些疾病本身便可引起不同程度的情感精神異常，因此Barnes迷宮評(píng)價(jià)空間記憶功能同樣可受到情感行為因素的影響，故而在大鼠局部腦缺血模型中Barnes迷宮的應(yīng)用仍有受限。

2.4 主動(dòng)/被動(dòng)回避實(shí)驗(yàn)

主動(dòng)/被動(dòng)回避實(shí)驗(yàn)（Active/passive avoidance test）是利用大鼠的好暗避光和對(duì)厭惡刺激的恐懼記憶建立起來的。實(shí)驗(yàn)可根據(jù)設(shè)備不同分為穿梭回避實(shí)驗(yàn)、跳臺(tái)回避實(shí)驗(yàn)等[31]，但實(shí)驗(yàn)?zāi)康幕鞠嗤?，即測(cè)試大鼠腦缺血后認(rèn)知相關(guān)行為方式的改變。實(shí)驗(yàn)將大鼠放入一個(gè)分割為明暗兩箱的大箱中，當(dāng)大鼠被放入明箱后通常會(huì)在數(shù)秒內(nèi)進(jìn)入暗箱，待大鼠進(jìn)入暗箱后，關(guān)閉中門，并給予其一次引起退縮和發(fā)聲的最小電刺激，并讓大鼠在暗箱中停留10 s（訓(xùn)練階段），在電刺激訓(xùn)練后24 h后進(jìn)行記憶保持測(cè)試，將大鼠放回暗箱，但不給予電擊，大鼠進(jìn)入明箱的潛伏期縮短（主動(dòng)回避實(shí)驗(yàn)）或進(jìn)入暗箱的潛伏期延長(zhǎng)（被動(dòng)回避實(shí)驗(yàn)）即獲得了學(xué)習(xí)記憶功能的保持。由于被動(dòng)回避的假陽性率較主動(dòng)回避的假陰性率高，所以目前對(duì)于認(rèn)知功能的測(cè)試多采用被動(dòng)回避實(shí)驗(yàn)。國(guó)外學(xué)者的研究表明，大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久性結(jié)扎后由于永久性腦缺血，在被動(dòng)回避實(shí)驗(yàn)中逃避反應(yīng)明顯下降，相較于假手術(shù)組表現(xiàn)出持續(xù)性的學(xué)習(xí)記憶功能損害[32]。

2.5 跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)

跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)（step-down test）是利用大鼠喜好在空間邊緣和角落活動(dòng)的習(xí)性，測(cè)試大鼠腦缺血后短時(shí)記憶功能缺損情況。實(shí)驗(yàn)裝置是一個(gè)20×20×60 cm的暗箱，箱底鋪墊銅柵，通36 V交流電，將大鼠放置在暗箱中間高起的平臺(tái)上，大鼠跳至銅柵上就會(huì)受到電擊，正常反應(yīng)是跳回平臺(tái)躲避電刺激[33]，記錄3 min內(nèi)大鼠第1次跳下平臺(tái)的潛伏時(shí)間及跳下平臺(tái)次數(shù)作為記憶保留的評(píng)價(jià)指標(biāo)[34]。此實(shí)驗(yàn)受研究者主觀影響較小，但實(shí)驗(yàn)過程中需要受到電刺激，一般同一批鼠不與被動(dòng)回避實(shí)驗(yàn)同時(shí)測(cè)試。

2.6 物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)

物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)（object recognition test）是利用動(dòng)物先天對(duì)新物體具有探索傾向的原理，由Ennaceur和Delacour于1988年報(bào)道的一種用于檢測(cè)大鼠識(shí)別記憶的行為學(xué)測(cè)試方法[35]。實(shí)驗(yàn)分為3個(gè)階段，分別是適應(yīng)期、熟悉期和測(cè)試期[36]。適應(yīng)期時(shí)將大鼠放入沒有任何物體的實(shí)驗(yàn)裝置中，使其適應(yīng)探索環(huán)境；熟悉期時(shí)在實(shí)驗(yàn)裝置中放入2個(gè)完全相同的物體，將大鼠背對(duì)物體放入實(shí)驗(yàn)裝置中，一定時(shí)間后再將大鼠取出；測(cè)試期時(shí)將2個(gè)相同物體中的一個(gè)換成另一個(gè)不同物體，讓大鼠再次進(jìn)行探索。在測(cè)試時(shí)，為防止大鼠對(duì)某個(gè)物體或某個(gè)位置特別偏愛出現(xiàn)誤差現(xiàn)象，對(duì)大鼠依次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)的位置要互相交換。物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)中最基本的指標(biāo)是熟悉期對(duì)物體的探索時(shí)間及測(cè)試期分別對(duì)熟悉物體和新物體的探索時(shí)間。有研究報(bào)道表明，物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)對(duì)時(shí)間間隔很敏感，即經(jīng)過較長(zhǎng)時(shí)間間隔后（如24 h），動(dòng)物將無法區(qū)分新舊物體[37]。相對(duì)于其他記憶任務(wù)，物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)具有許多優(yōu)勢(shì)，包括[38]：周期較短，消耗體力較小，避免長(zhǎng)時(shí)間訓(xùn)練對(duì)動(dòng)物造成的影響；進(jìn)入結(jié)果分析的數(shù)據(jù)較全面；更加接近模擬人類的學(xué)習(xí)記憶行為，是一種精細(xì)、敏感的行為學(xué)檢測(cè)方法，常被用于研究腦功能區(qū)的分子機(jī)制及腦組織損傷研究[39,40]。

3 焦慮水平評(píng)價(jià)

嚙齒類動(dòng)物在腦缺血后會(huì)出現(xiàn)不同程度焦慮，并影響其行為學(xué)表現(xiàn)，近年來越來越多焦慮樣行為學(xué)測(cè)試用于腦缺血損傷實(shí)驗(yàn)研究中[41,42]，包括高架十字迷宮、明暗穿箱實(shí)驗(yàn)等。

3.1 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)

高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)（elevated plus maze test）是目前應(yīng)用最廣泛，最有效的焦慮樣行為評(píng)價(jià)方式，其根據(jù)嚙齒類動(dòng)物偏好探索開臂，但又因恐懼開臂高懸敞開的環(huán)境而致焦慮水平上升，故選擇黑暗封閉的閉臂進(jìn)行探索而建立。實(shí)驗(yàn)裝置由2個(gè)開臂（50×10 cm）和2個(gè)相同尺寸四面包墻的暗臂組成，開臂和暗臂距離地面50 cm，實(shí)驗(yàn)以開臂進(jìn)入次數(shù)比和開臂停留時(shí)間比為經(jīng)典指標(biāo)，可反映動(dòng)物趨近、規(guī)避沖突的結(jié)果，與焦慮程度直接相關(guān)[43]。國(guó)外研究表明，腦缺血后焦慮水平的改善表現(xiàn)在動(dòng)物對(duì)開臂的探索，其進(jìn)入開臂的次數(shù)和停留時(shí)間比上升[44]。

3.2 明暗穿箱實(shí)驗(yàn)

明暗穿箱實(shí)驗(yàn)（light-dark exploration test）最早由Crawley JN于1980年提出，作為評(píng)價(jià)抗焦慮藥物的藥理效應(yīng)，主要通過穿梭次數(shù)評(píng)價(jià)嚙齒類動(dòng)物的焦慮情緒[45]。實(shí)驗(yàn)裝置由兩個(gè)聚乙烯材質(zhì)箱子（20×20×14 cm）和一個(gè)連接通道（5×7×10 cm）組成，一個(gè)箱子內(nèi)壁涂成黑色，另一個(gè)箱子以燈照亮，將動(dòng)物放置在明箱里，計(jì)算10 min內(nèi)動(dòng)物在暗箱內(nèi)的時(shí)間和兩箱之間的穿梭 次[46]。國(guó)外研究報(bào)道，大鼠在腦缺血后呈焦慮狀態(tài)，其在暗箱停留的時(shí)間顯著增加，予安定類藥物后可降低其焦慮水平[46]。

4 總結(jié)與展望

功能性測(cè)試對(duì)評(píng)價(jià)腦卒中療效非常重要，近數(shù)十年來，建立了多種有效的大鼠腦缺血后行為學(xué)評(píng)價(jià)方法，包括感覺、運(yùn)動(dòng)、學(xué)習(xí)、記憶功能以及焦慮水平的評(píng)價(jià)。相對(duì)于小鼠，大鼠體形較大，適應(yīng)好，缺血手術(shù)后機(jī)體恢復(fù)能力強(qiáng)，智力水平更高，故而在大鼠腦缺血領(lǐng)域，行為學(xué)測(cè)試研究應(yīng)用廣泛。如上所述，每種測(cè)試方法各有側(cè)重和特點(diǎn)，有的偏向于評(píng)估肢體功能，有的偏向于測(cè)試空間記憶，有的需要反復(fù)訓(xùn)練，有的則易受到主觀影響，目前尚未有單一評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)被普遍認(rèn)同，故而仍應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮侠磉x用各類行為學(xué)測(cè)試，將其有效結(jié)合，能夠更好規(guī)避單項(xiàng)實(shí)驗(yàn)偏差，全面評(píng)估大鼠腦缺血后的功能、感覺、認(rèn)知及情緒改變。

大鼠局灶性腦缺血模型的行為學(xué)測(cè)試目前依然面臨一些共性問題，包括：腦缺血成功后2～3周的大鼠肢體運(yùn)動(dòng)與認(rèn)知功能的自愈性與臨床中的實(shí)際情況不完全符合；局灶性腦缺血模型制備后缺血程度的不一致使大鼠生存時(shí)間不統(tǒng)一，對(duì)于有些訓(xùn)練周期較長(zhǎng)、消耗體力較大的行為學(xué)測(cè)試，其脫落率較高；在測(cè)試過程中我們?nèi)孕枳⒁獯笫髿馕?、室?nèi)光線和溫度對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，并針對(duì)不同品系大鼠、卒中后不同時(shí)間窗，根據(jù)腦卒中類型選擇敏感度高、更為合理的行為學(xué)測(cè)試。將行為學(xué)評(píng)價(jià)工具不斷改良優(yōu)化的同時(shí)，與其他研究技術(shù)結(jié)合，從整體層面、分子層面、基因水平等各方面實(shí)現(xiàn)研究目的，在腦缺血及學(xué)習(xí)記憶領(lǐng)域，以期更好的將基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)服務(wù)于臨床。

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R741；R741.02；R743

A DOI 10.16780/j.cnki.sjssgncj.2017.06.020

1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬普陀醫(yī)院中醫(yī)內(nèi)科上海200062 2.華東師范大學(xué)腦功能基因組學(xué)教育部及上海市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室上海200062

國(guó)家自然科學(xué)基金（No.81503370）上海市衛(wèi)計(jì)委青年醫(yī)師培養(yǎng)計(jì)劃資助項(xiàng)目

2017-03-16

俞璐laurieyu@sohu.com

（本文編輯：唐穎馨）