孟凡華，葛彥明，王素霞，劉長瑞

系統(tǒng)性紅斑狼瘡的磷脂酶C-γ的致病機制及靶向治療研究進展

孟凡華，葛彥明，王素霞，劉長瑞＊

磷脂酶C（PLC）是磷脂酰肌醇信號通路的關(guān)鍵酶。磷脂酰肌醇4，5二磷酸（PIP2）在活化的PLC作用下水解為二酯酰甘油（DAG）和肌醇三磷酸（IP3），這兩種第二信使傳遞細胞外信息給下游效應(yīng)分子，調(diào)節(jié)細胞的生命活動。PLC-γ是PLC的一種亞型，主要由蛋白酪氨酸激酶（PTK）激活，包括PLC-γ1與PLC-γ2兩個亞型。系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）以對核抗原耐受性缺陷為特征，這與T、B細胞受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)異常有關(guān)。SLE中PLC-γ1、γ2表達均增強。酪氨酸激酶在免疫細胞信號通路中起關(guān)鍵作用，現(xiàn)就PLC-γ的生物學(xué)功能、活化方式及其在紅斑狼瘡中的免疫機制以及SLE靶向治療研究做一綜述。

磷脂酶PLC-γ；生物學(xué)功能；活化；系統(tǒng)性紅斑狼瘡；酪氨酸激酶抑制藥；靶向治療

1PLC-γ的生物學(xué)功能

正常狀態(tài)下PLC-γ存在于細胞質(zhì)，激活后可以結(jié)合到細胞膜上，是細胞內(nèi)重要的信號分子。PLC-γ有一個獨特的XY復(fù)合體，包括2個SH2區(qū)域，1個SH3區(qū)域，1個PH區(qū)域，該結(jié)構(gòu)域通過多個酪氨酸激酶產(chǎn)生PLC-γ的特異性活化。PLC-γ1與PLC-γ2的表達有一定程度的重疊，但在共表達區(qū)域獨立行使功能。PLC-γ1無處不在，在多種組織中調(diào)節(jié)細胞功能，在TCR介導(dǎo)的TCR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及T細胞選擇中發(fā)揮作用；PLC-γ2主要表達在造血系統(tǒng)以及T細胞中，也表達在肥大細胞、單核細胞和巨噬細胞等免疫相關(guān)細胞中，并能夠通過與Fc-ε受體或Fcγ受體結(jié)合而活化，在BCR介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及B細胞的分化成熟中發(fā)揮作用［1］。PLC-γ主要生物學(xué)功能包括參與細胞周期調(diào)控、促進細胞轉(zhuǎn)化、調(diào)控肌動蛋白細胞骨架、與胚胎發(fā)育、細胞凋亡相關(guān)。如：PLC-γ1缺失的小鼠生長發(fā)育停止，并在胚胎第9天死亡；PLC-γ1在血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）依賴性乳腺癌組織中表達增強，伴隨EGFR、erbB2的表達上調(diào)，過度表達的PLC-γ1也被磷酸化，說明PLC-γ1的激活促進了乳腺癌的發(fā)生［2］。PLC-γ2缺失的小鼠B細胞、血小板、肥大細胞和自然殺傷細胞的功能缺陷［3］；PLC-γ2基因的點突變與免疫細胞中PLC-γ2快速活化導(dǎo)致的炎癥性或自身免疫性應(yīng)答有關(guān)［4］。

2 磷脂酶C-γ的活化

PLC-γ的活化主要是被蛋白酪氨酸激酶（PTK）激活、XY復(fù)合體發(fā)生酪氨酸磷酸化，參與免疫反應(yīng)、細胞分裂及卵細胞受精等過程中的信號傳遞［2］。PLC-γ也可經(jīng)非依賴蛋白酪氨酸激酶的途徑激活［5］。當(dāng)受體交聯(lián)使TCR活化，激活細胞內(nèi)蛋白和酶，引起PTK活化，這就導(dǎo)致Src、ZAP-70蛋白等活化，進而活化PLC-γ［2］。PLC-γ激活后水解PIP2生成第二信使IP3及DAG，前者誘導(dǎo)細胞內(nèi)鈣離子釋放，激活細胞內(nèi)鈣信號通路；后者作用于蛋白激酶C（PKC），觸發(fā)一系列生化反應(yīng)，從而調(diào)節(jié)細胞生長、分化和凋亡等生命活動［5］。

3 磷脂酶C-γ與系統(tǒng)性紅斑狼瘡

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種慢性自身免疫性疾病，以產(chǎn)生多種自身抗體、免疫復(fù)合物、多器官免疫性炎癥為特征，外周血單個核細胞凋亡增加，但凋亡小體清除障礙。SLE患者中T、B細胞異?；罨瘜?dǎo)致細胞因子、自身抗體持續(xù)產(chǎn)生，這對自身免疫反應(yīng)的啟動及維持至關(guān)重要［6］。

酪氨酸激酶家族在細胞生存、活化和分化的調(diào)節(jié)中發(fā)揮作用，因結(jié)構(gòu)不同，可分為受體酪氨酸激酶和非受體酪氨酸激酶。信號通路異常在自身免疫性疾病發(fā)病中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，狼瘡鼠動物模型及SLE患者的T、B細胞、漿細胞和其他免疫細胞的酪氨酸激酶活性異常［6］。PLC-γ在免疫反應(yīng)中的作用機制較為明確：抗原結(jié)合T細胞表面受體（TCR）和B細胞表面受體（BCR）后形成復(fù)合物并激活PLC-γ同工酶。PLC-γ在淋巴細胞受體調(diào)節(jié)中起重要作用，在對BCR的反應(yīng)中，Src和Syk相關(guān)激酶能夠調(diào)節(jié)部分重疊蛋白的酪氨酸磷酸化，而Src的特定底物就是PLC-γ2［4］。

PLC-γ1主要參與T細胞介導(dǎo)的免疫途徑，通常被抗原結(jié)合的TCR激活，參與細胞增殖分化、免疫反應(yīng)等。Krishnan等［7］發(fā)現(xiàn)Syk在SLE患者T細胞中的表達較在正常T細胞中高，當(dāng)LAT（linker for activation of T cell）與Syk結(jié)合時，PLC-γ1便與Syk和ZAP70結(jié)合而活化，從而進行信號傳導(dǎo)。Januchowski等［8］的研究表明LAT蛋白水平在狼瘡CD4+T細胞中的含量明顯高于正常T細胞中的含量，SLE的CD4+T細胞中ZAP70蛋白含量與狼瘡病情活動和受累器官數(shù)目有關(guān)。PLC-γ1調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)中T細胞和肥大細胞的活化，與PLC-γ2作用互補［9］。神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)是大腦多種功能特征的基礎(chǔ)，例如情緒，記憶和運動等。大腦中PLC-γ1由纖維生長因子（FGF）與Trk家族RTKs激活，調(diào)節(jié)神經(jīng)元分化和軸突增長［10］，是完整神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的一部分，與情緒雙向調(diào)節(jié)紊亂有關(guān)［11］。

PLC-γ2主要參與B細胞介導(dǎo)的免疫途徑，是重要的信號通路酶，通常被抗原結(jié)合的BCR激活，控制鈣通道應(yīng)答以及細胞的分化。當(dāng)B細胞連接蛋白（如SLP-65，BASH）被Syk磷酸化后，可激活Bruton酪氨酸激酶（Btk）、活化PLC-γ2，進行信號傳導(dǎo)［12］。Yasuyuki Kitaura等［13］發(fā)現(xiàn)SLE中Syk的酪氨酸磷酸化及PLC-γ2表達增強。PLC-γ2的活化在Fc-γ受體介導(dǎo)的皮膚免疫反應(yīng)中起到不可缺少的作用［］。

4 靶向治療

目前已有十多種作用于不同環(huán)節(jié)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制藥用于臨床治療腫瘤，主要是酪氨酸激酶抑制藥。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制藥通過下調(diào)腫瘤的增殖信號，促進細胞凋亡，而非通過細胞毒作用，因此選擇性較高、不良反應(yīng)較小［15］。由于SLE的發(fā)病與酪氨酸激酶途徑的過度激活、PLC-γ活化有關(guān)，近年酪氨酸激酶抑制藥在SLE動物模型及患者中得到應(yīng)用。

在SLE患者中，SyK（spleen tyrosine kinase）被認為是一個治療靶點，選擇性抑制SyK活性降低了TCR介導(dǎo)的鈣應(yīng)答，減慢了SLE T細胞中肌動蛋白的快速聚合作用，但在正常人T細胞中不是這樣。目前發(fā)現(xiàn)的SyK抑制藥R406，R788，在動物實驗中可延緩狼瘡鼠蛋白尿的發(fā)生，減少了腎損傷，避免了皮膚損害，延長了生存時間，有確定的治療作用，并在停藥后療效有長時間的維持［6］。

BtK（Bruton’s tyrosine kinase）是影響B(tài)細胞發(fā)育、選擇、活化和存活的BCR信號分子。在自身免疫病中BtK是B細胞活化的重要靶點。BtK抑制藥Ibrutinib（PCI-32765）可使狼瘡鼠自身抗體產(chǎn)生延遲，白細胞活化減弱，腎損傷減弱［16］。BtK抑制藥RN486抑制狼瘡鼠腎小球腎炎的進展、顯著減少抗dsDNA的產(chǎn)生［17］。

表皮生長因子（PDGF）可刺激成纖維細胞和血管平滑肌細胞增殖，在腎小球系膜增生性腎炎的發(fā)病中發(fā)揮重要作用。PDGF抑制藥甲磺酸伊馬替尼（Imatinib mesylate，商品名格列衛(wèi)Gleevec，即STI-571）使狼瘡鼠腎損傷局限、蛋白尿延期出現(xiàn)、生存期延長［6］。

酪氨酸激酶抑制藥在SLE治療中的局限性如嚴重不良反應(yīng)、特異性差、獲益率低等，尚無報道。如果可以生產(chǎn)出細胞毒性低、抑制SLE酪氨酸激酶活性充足但不過強、又不影響正常細胞活性的藥物將會有巨大的價值。

［1］Nicole Hajicek，Thomas H.Charpentier，et al.Auto-inhibition and phosphorylation-induced activation of PLC-γ isozymes［J］. Biochemistry，2013，52（28）：72.

［2］Guoping Fu，Yuhong Chen，James Schuman，et al.Phospholipase C-γ2 plays a role in T-cell receptor signal transduction and T-cell selection［J］.J Immunol，2012，189（5）：2326-2332.

［3］Aurelie Gresset，John Sondek，T.Kendall Harden，et al.The phospholipase C isozymes and their regulation［J］.Subcell Biochem，2012，58（1）：61-94.

［4］Hashimoto A，Takeda K，Inaba M，et al.Cutting edge：essential role of phospholipase C-gamma 2 in B cell development and function［J］.Immunol，2000（165）：1738-1742.

［5］Yu P.Autoimmunity and inflammation due to a gain of function mutation in phospholipase C-gamma 2 that specifically increases external Ca2＋entry［J］.Immunity，2005（22）：451-465.

［6］Wen-Hai Shao，Philip L Cohen.The role of tyrosine kinases in systemic lupuserythematosusand their potential as therapeutic targets［J］.Expert Rev Clin Immunol，2014，10（5）：573-582.

［7］Krishnan S，Warke VG，Nambiar MP，et al.The FcR gamma subunit and Syk kinase in the TCR signaling complex of human effector CD4+T cells［J］.J Immunol，2003，170（8）：4189-4195.

［8］Januchowski R，Wudarski M.Prevalence of ZAP-70，LAT，SLP-76，and DNA methyltransferase 1 expression in CD4+T cells of patients with systemic lupus erythematosus［J］.Clin Rheumatol， 2008，27（1）：21-27.

［9］Irvin BJ.Pleiotropic contributions of phospholipase C-gamma1（PLC-gamma1）to T-cell antigen receptor-mediated signaling：reconstitution studies of a PLC-gamma1-deficient Jurkat T-cell line［J］.Mol Cell Biol，2001，20（24）：9149-9161.

［10］Lin HY.Identification of the cytoplasmic regions of fibroblast growth factor（FGF）receptor 1 which play important roles in induction of neurite outgrowth in PC12 cells by FGF-1［J］. Mol Cell Biol，1998，18（7）：3762-3770.

［11］Tvorogov D.Integrin-dependent PLC-gamma1 phosphorylation mediates fibronectin-dependent adhesion［J］.J Cell Sci，2005，118（3）：601-610.

［12］白曉春，羅深秋.磷脂酶C-γ的信號傳遞研究進展［J］.國外醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)分冊，2001，23（3）：145-148.

［13］Yasuyuki Kitaura，Ihn-Kyung Jang.Conntrol of the B cellintrinsic tolerance program by c-Cbl and Cbl-b［J］.Immunity，2007，26（5）：567-578.

［14］Wen R，JouST，ChenY，et al．Phospholipase C-gamma 2 is essential for specific functions of Fc epsilon R and Fc gamma R［J］．J Immunol，2002，169（10）：6743-6752．

［15］茆勇軍，李海泓，李劍峰，等.蛋白酪氨酸激酶信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑與抗腫瘤藥物［J］.藥學(xué)學(xué)報，2008，43（4）：323-334.

［16］Hutcheson J，Vanarsa K，Bashmakov A，et al.Modulating proximal cell signaling by targeting Btk ameliorates humoral autoimmunity and end-organ disease in murine lupus［J］.Arthritis Res Ther，2012，14（6）：R243.

［17］Mina-Osorio P，LaStant J，Keirstead N，et al.Suppression of glomerulonephritis in lupus-prone NZB×NZW mice by RN486，a selective inhibitor of Bruton’s tyrosine kinase［J］.Arthritis Rheum，2013，65（9）：2380-2391.

［2016－08－14收稿，2016－09－11修回］［本文編輯：董冰媛］

ResearchprogressonthephospholipaseC-gammapathogenesismechanismofsystemiclupus erythematotus（SLE）and its targeting therapy

MENG Fan-ha，GE Yan-ming，WANG Su-qin，et al.Dept.of Blood Purification，the General Hospital of Jinan Military Region，Jinan，Shandong 250031，China

Phospholipase C（PLC）is a key enzyme in signal pathway of phosploa tidylinositol receptors for extracellular stimuli promote activation of PLC，which converts phosphatidylinositol（4，5）bisphosphate（PtdIns（4，5）P2）into the Ca2+-mobilizing second messenger，inositol（1，4，5）trisphosphate（Ins（1，4，5）P3），and the protein kinase-activating second messenger，diacylglycerol（DAG）.Two PLC-γ isozymes（PLC-γ1 and PLC-γ2）exist in mammals.PLC-γ isozymes are activated by a panoply of growth factors and immunological stimuli that signal throughreceptor and non-receptor tyrosine kinases.Among the cells in the immune system，the B cells and T cell in SLE patients have multiple abnormalities that may account for the ongoing autoantibody production and the initiation and maintenance of the autoimmune reaction.Tyrosine kinases play a central role in signaling processes in the cells known to be important in the pathogenesis of autoimmune diseases.In this article authors summarize the function of tyrosine kinases and their novel inhibitors as therapeutic targets from studies made in animal lupus models and systemic lupus erythematosus patients.

Phospholipase C-gamma（PLC-γ）；Biological function；Activation；Systemic lupus erythematosus（SLE）；Inhibitor of tyrosine kinases；Targeting treatment

R593.24

A

10.14172/j.issn1671-4008.2017.03.034

250031山東濟南，濟南軍區(qū)總醫(yī)院血液凈化科（孟凡華，葛彥明，王素霞），普外科（劉長瑞）

劉長瑞，Email：lanbingmeng001@163.com