貴州省黔南州食品藥品檢驗(yàn)所（558000）周燦 安軍 鄧言歡

貴州省食品藥品檢驗(yàn)所（550004）茅向軍

1 儀器試劑

島津LC-2010AHT液相色譜儀，柱子Diamonsil@（鉆石）C18 5μm 250mm×4.6；科導(dǎo)超聲波清洗器；乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純）、濃氨，甲醇為分析純、水為娃哈哈純凈水；柴胡對(duì)照藥材(中國(guó)食品藥品檢定研究院，120992-201108）；柴胡皂苷a(中國(guó)藥品生物制品檢定所，110777-200507）、柴胡皂苷d（中國(guó)藥品生物制品檢定所，110778-200506）、柴胡陰性對(duì)照購(gòu)自市場(chǎng)試驗(yàn)室自制；青島海洋化工廠分廠生產(chǎn)的硅膠G預(yù)制板（批號(hào)20090406）、消乳散結(jié)膠囊樣品為山東步長(zhǎng)神州制藥有限公司提供（批號(hào)111206、120203、120204、120205）

2 柴胡TLC薄層研究[1]

2.1 供試樣制備

2.1.1 取樣品2g，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，放冷，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為點(diǎn)樣溶液①。

2.1.2 取樣品2g、陰性對(duì)照樣品2g、柴胡對(duì)照藥材0.5g，各加甲醇50ml，分別加熱回流30分鐘，放冷，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，分別制成供試溶液②、供試溶液③、供試溶液④。

2.1.3 取樣品2g、陰性對(duì)照樣品2g、柴胡對(duì)照藥材0.5g，各加入0.5%氨性甲醇溶液50ml，分別加熱回流30分鐘，放冷，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，分別制成供試溶液⑤、供試溶液⑥、供試溶液⑦。

2.1.4 取樣品2g、陰性對(duì)照樣品2g、柴胡對(duì)照藥材0.5g，各加甲醇50ml，分別加熱回流30分鐘，放冷，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)盟柡偷恼〈继崛?次，每次20ml，分取正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20ml，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，分別制成供試溶液⑧、供試溶液⑨、供試溶液⑩。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 分取柴胡皂苷a、柴胡皂苷d對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液S1、S2。

2.3 薄層展開(kāi)方法 吸取上述10種供試溶液和2種對(duì)照品溶液各5μl，點(diǎn)于硅膠G預(yù)制板上，分別以展開(kāi)劑(A)：乙酸乙酯-乙醇-水(8∶2∶1)、展開(kāi)劑(B)：二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(30∶40∶15∶3)、展開(kāi)劑(C)：三氯甲烷-甲醇-水（7∶3∶1）10℃以下放置分層的下層溶液，展開(kāi)，取出，晾干。

2.4 顯色劑條件噴以2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸乙醇溶液，在60℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。

2.5 薄層結(jié)果表明，柴胡藥材幾種提取方法均檢測(cè)出柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、而樣品與陰性對(duì)照的幾種提取方法中均未檢測(cè)出柴胡皂苷a、柴胡皂苷d。

3 柴胡HPLC的研究

3.1 色譜條件照《中國(guó)藥典》2010版一部柴胡含量項(xiàng)下方法，以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm。

3.2 對(duì)照品溶液的制備取柴胡皂苷a、柴胡皂苷d對(duì)照品，加甲醇制成每1ml各含50μg的的混合對(duì)照溶液。

3.3 供試品溶液的制備

3.3.1 方法①：取樣品1g、柴胡對(duì)照藥材0.5g、柴胡陰性對(duì)照1g，分別加甲醇25ml，超聲處理（功率300W，頻率33kHz）30分鐘，過(guò)濾，用微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液。

3.3.2 方法②：分取樣品1g、柴胡對(duì)照藥材0.5g、柴胡陰性對(duì)照1g，分別加含5%濃氨溶液的甲醇溶液25ml，超聲處理（功率300W，頻率33kHZ）30分鐘，過(guò)濾，精密吸取10ml，水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜?0ml量瓶中，用微孔濾膜過(guò)濾，作為供試品溶液。

3.4 測(cè)定法 精密吸取上述供試溶液和對(duì)照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定。

3.5 色譜結(jié)果 樣品和柴胡陰性對(duì)照用甲醇提取和用氨性甲醇提取，在圖譜中均未見(jiàn)柴胡皂苷a、柴胡皂苷d色譜峰；柴胡對(duì)照藥材兩種提取方法其色譜中有柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的色譜峰。

4 討論

4.1 研究表明，消乳散結(jié)膠囊中醋柴胡所含的柴胡皂苷a、柴胡皂苷d經(jīng)過(guò)醋制或提取工藝后，其化學(xué)成分發(fā)生了變化，未能檢測(cè)出柴胡皂苷a、柴胡皂苷d色譜峰。

4.2 含柴胡的口服制劑，由于要通過(guò)胃的吸收，其強(qiáng)酸環(huán)境對(duì)柴胡皂苷影響較大，現(xiàn)行的《中國(guó)藥典》以柴胡皂苷a、d作為指標(biāo)成分來(lái)考察柴胡藥材的質(zhì)量值得商榷。