李克斌 田波/中農(nóng)威特生物科技股份有限公司

口蹄疫免疫技術(shù)

李克斌 田波/中農(nóng)威特生物科技股份有限公司

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一種急性、熱性、高度接觸傳染性的動物疫病，可快速遠(yuǎn)距離傳播。侵染對象是豬、牛、羊等主要畜種及其它家養(yǎng)和野生偶蹄動物，易感動物多達70余種。發(fā)病動物的主要癥狀是精神沉郁、流涎、跛行、臥地，近查可見口、鼻、蹄和母畜乳頭等無毛部位發(fā)生水皰，水皰破損后形成潰瘍或斑痂?？谔阋叩陌l(fā)病率高，可造成巨大的經(jīng)濟損失和社會影響。該病是世界動物衛(wèi)生組織（OIE)法定報告的動物傳染病，我國將其列為一類動物疫病。

目前，口蹄疫仍然在世界許多地區(qū)流行，實踐證明有效的疫苗免疫能夠控制口蹄疫大范圍的暴發(fā)和流行。世界動物衛(wèi)生組織和泛美口蹄疫中心肯定滅活疫苗是防控口蹄疫的最有效手段。20世紀(jì)50年代，歐洲大部分國家開始實施計劃免疫接種，達到了消除口蹄疫的目的。一些國家也利用這種政策，成為了OIE“免疫無口蹄疫國家”成員。

我國政府對口蹄疫的防控工作從未間斷，非常重視，有比較健全的組織機構(gòu)與防控體系。堅持實施 “預(yù)防為主、免疫和撲殺相結(jié)合”的綜合防控措施，并取得了舉世公認(rèn)的成效。

一、口蹄疫疫苗及選用

1.口蹄疫疫苗的選用。免疫預(yù)防，疫苗是關(guān)鍵。人類自從發(fā)現(xiàn)了口蹄疫病毒，就開始了口蹄疫疫苗的研究?，F(xiàn)在所用的滅活疫苗是高滴度的強毒生產(chǎn)之后經(jīng)滅活處理獲得，這種生產(chǎn)方式不僅存在散毒和污染環(huán)境的風(fēng)險，還需要高效的生物安全設(shè)施和嚴(yán)格的操作規(guī)程。為此，我國政府對口蹄疫的研發(fā)和生產(chǎn)有嚴(yán)格的要求，由指定機構(gòu)進行。中國農(nóng)業(yè)部指定中農(nóng)威特生物科技股份有限公司為唯一生產(chǎn)全系列口蹄疫疫苗的廠家。公司歷史悠久，其前身是蘭州獸醫(yī)研究所的生物制品車間，從20世紀(jì)50年代開始，就開始了口蹄疫疫苗的研發(fā)和生產(chǎn)，為口蹄疫的防控發(fā)揮了舉足輕重的作用。

防治口蹄疫等于防治七種病或多種病，免疫用疫苗毒株必須與流行毒株匹配，免疫才有效。因為，口蹄疫病毒在不斷地發(fā)生著變異，有7個血清型，各血清型間無交叉免疫性，型內(nèi)各毒株間的免疫原性差異很大，有的能夠交叉保護，有的不能交叉保護。在病毒發(fā)生變異之后，原有的口蹄疫疫苗對新的流行毒株就有可能沒有保護或保護力下降，所以在選用口蹄疫疫苗時，必須需要考慮血清型的一致性、毒株的匹配性，同時，還需要考慮疫病的流行強度，流行強度越大，需要的疫苗效力越高。

2.口蹄疫疫苗簡介?？谔阋咭呙绲牟粩喔倪M和使用，為口蹄疫的有效防控發(fā)揮了決定性的作用。隨著口蹄疫疫情的變化，現(xiàn)已研制出了多種相關(guān)的疫苗，并有多種新型疫苗在研制的進程中。

（1）?？谔阋逴型、A型雙價滅活疫苗。2013年，口蹄疫的流行形勢又發(fā)生了變化。以2010年出現(xiàn)的緬甸98毒株O型為主的口蹄疫威脅還沒有減弱，又出現(xiàn)了茂名毒株的A型口蹄疫的流行。為此，中農(nóng)威特公司立即啟用了口蹄疫O型、A型雙價滅活疫苗的戰(zhàn)略應(yīng)急儲備技術(shù)。對工藝和設(shè)備等進行了升級改造，采用了最先進的和擁有自主知識產(chǎn)權(quán)的抗原濃縮和純化等技術(shù)，全面提升了抗原的免疫原性和疫苗的效力。目前正在被大型養(yǎng)殖場所普遍使用，表現(xiàn)出了很好的防控效果。

（2）口蹄疫O型、亞洲I型、A型三價滅活疫苗（O/MYA98/BY/2010株+Asial/JSL/ZK/06株+Re-A/WH/09株）。本疫苗的優(yōu)點是抗原譜廣、保護性強，選用的制苗毒株既能預(yù)防現(xiàn)行優(yōu)勢流行毒株，又能覆蓋、控制既往流行毒株。O型毒株選用2010年在廣東白云區(qū)采集分離到的與目前流行毒株最為匹 配 的O/MYA98/BY/2010株，是當(dāng)前O型口蹄疫防控的最佳制苗毒株。A型毒株為Re-A/WH/09株，通過人工改造基因，既能預(yù)防A/WH/09株，也能預(yù)防A/MM/2013株。Asial毒株選用的是Asial/JSL/ZK/06毒株，該制苗毒株所制造的疫苗為我國亞洲Ⅰ型口蹄疫的防控發(fā)揮了關(guān)鍵作用，有力地阻止了亞洲Ⅰ型口蹄疫在我國的蔓延。

（3）口蹄疫O型滅活疫苗（O/MYA98/BY/2010株）?？谔阋逴型滅活疫苗（O/MYA98/BY/2010株）是國家/OIE口蹄疫參考實驗室和中農(nóng)威特公司，為應(yīng)對2010年突發(fā)的緬甸98（MYA/98）毒株口蹄疫疫情而研制的疫苗，可以預(yù)防豬、牛、羊等多種偶蹄動物的O型口蹄疫，廣泛使用于全國口蹄疫的強制免疫接種和規(guī)?；B(yǎng)殖場口蹄疫的防控。口蹄疫O型滅活疫苗（O/MYA98/BY/2010株）對當(dāng)前流行于我國的3個遺傳譜系的5個典型O型口蹄疫代表毒株都具有很好的免疫效力，是抗原性和免疫效果優(yōu)良的制苗毒株，可以滿足我國當(dāng)前和今后一段時期內(nèi)預(yù)防O型口蹄疫的需要。

（4）口蹄疫O型、A型二價滅活疫苗（Re-O/MYA98/JSCZ/2013株+Re-A/WH/09株）?？谔阋逴型、A型二價滅活疫苗（Re-O/MYA98/JSCZ/2013株+Re-A/WH/09株）的最大特點是突破了傳統(tǒng)制苗毒株的篩選技術(shù)，對制苗毒株的基因進行了人工改造，突破了常規(guī)疫苗種毒自然屬性缺陷的限制，提升了疫苗種毒制備技術(shù)水平。大大地提高了制苗毒株的免疫原性和廣譜性，使其在細(xì)胞中的增殖能力更強，抗原的敏感性、靶向性更好。該苗以口蹄疫病毒的復(fù)制、抗原性和致病性等前沿技術(shù)理論為指導(dǎo)，利用自主發(fā)明的單質(zhì)粒口蹄疫病毒拯救技術(shù)系統(tǒng)（反向遺傳操作系統(tǒng)，專利號：ZL201310175324.4），定向設(shè)計和優(yōu)化改造疫苗種毒，構(gòu)建出病毒產(chǎn)量、抗原匹配性、抗原穩(wěn)定性等種用性能和安全性明顯優(yōu)于田間分離毒的疫苗種毒。結(jié)合中農(nóng)威特公司的懸浮培養(yǎng)、抗原濃縮純化等技術(shù)工藝，再次提升公司內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，生產(chǎn)出世界上第一個經(jīng)過反向遺傳學(xué)技術(shù)改造的口蹄疫高效滅活疫苗，具有很高的理論和技術(shù)創(chuàng)新。

（5）其他口蹄疫疫苗。目前，中農(nóng)威特公司是經(jīng)農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)生產(chǎn)全系列口蹄疫疫苗的唯一企業(yè)，公司產(chǎn)品成為國家口蹄疫疫病強制免疫和規(guī)模化養(yǎng)殖場自主免疫的主導(dǎo)疫苗，而且隨著疫情形勢的變化能夠及時推出新的疫苗。除以上具有完全自主知識產(chǎn)權(quán)的口蹄疫疫苗之外，還出品口蹄疫A型滅活疫苗（獨家生產(chǎn)），口蹄疫O型、亞洲1型二價滅活疫苗，口蹄疫O型合成肽疫苗等。

二、口蹄疫疫苗的儲運

口蹄疫疫苗對酸、堿、熱、紫外線敏感，偏酸、偏堿、過熱、凍融和陽光曝曬均可使疫苗的有效成分降解，從而使疫苗的免疫效果降低甚至喪失。因此，疫苗必須在在2℃～8℃的溫度下全程冷鏈運輸和保存才能保證其效力。

疫苗運輸時，要妥善包裝，防止運輸過程中發(fā)生損壞，使其盡快入庫和/或到達目的地。

疫苗保存時要有相應(yīng)的冷藏設(shè)施和溫度檢測設(shè)備，還要避光防潮、分類存放。

疫苗出、入庫應(yīng)有記錄，使用時采取“先入先用”的原則，即先入庫先出庫，先用失效期近的，后用失效期遠(yuǎn)的。

三、口蹄疫免疫操作技術(shù)

免疫接種口蹄疫疫苗涉及一系列操作，每步操作都存在著很多技術(shù)問題，只有掌握技術(shù)，科學(xué)操作，才能確保免疫成功。否則，不僅直接影響免疫效果，產(chǎn)生接種應(yīng)激等，而且還有可能延誤疫情的防控，給養(yǎng)殖場帶來毀滅性的打擊。

1.免疫前的準(zhǔn)備

（1）接種器具的準(zhǔn)備與消毒滅菌。應(yīng)按動物的種類和大小選用適合的接種器具，確保將疫苗打入肌肉層。要做好注射器具的清洗、消毒滅菌工作，避免污染。在消毒針頭前，應(yīng)仔細(xì)檢查，若針尖處有鉤絲、堵塞則不能使用，以減少對被免疫動物的的應(yīng)激和感染。免疫時要及時更換針頭，做到一畜一針頭。

注射器具可用濕熱方法或高壓滅菌，條件不具備時用干凈水加熱煮沸滅菌。經(jīng)滅菌的注射器和針頭要置于無菌盒內(nèi)，防止污染。

煮沸滅菌時，加水淹沒器械2cm以上，煮沸30min，待冷卻后放入滅菌器皿中備用。滅菌后的器械應(yīng)當(dāng)日使用，當(dāng)日不用打開后，需重新滅菌，方能使用。

不建議對注射器具用化學(xué)方法消毒，因為大部分化學(xué)藥物容易殘留，影響疫苗免疫效果。

使用一次性無菌塑料注射器時，要檢查其包裝是否完好和是否在有效期內(nèi)。一次性物品用過后，應(yīng)注意銷毀，防止污染環(huán)境。

（2）疫苗的檢查與回溫處理。使用前應(yīng)對疫苗進行眼觀質(zhì)量檢查，主要檢查包裝、瓶體是否完好無破損，標(biāo)簽是否與實物一致。運輸、保存不符合2℃～8℃、二維碼信息不準(zhǔn)確、瓶體破損、瓶體內(nèi)顏色異常、有異物、分層的不能使用。

使用時，將疫苗回溫到20℃～25℃進行免疫接種，可有效減少冷應(yīng)激。

（3）接種前動物檢查。免疫前要充分了解接種動物的品種、健康狀況、飼養(yǎng)情況、免疫及發(fā)病史。有病、瘦弱、剛配種10～15 d內(nèi)的母畜、臨產(chǎn)母畜（30 d內(nèi)）最好不要接種，等到病畜康復(fù)和母畜產(chǎn)后再進行補免。

（4）免疫前小范圍試驗。初次使用疫苗的地區(qū)或養(yǎng)殖場，應(yīng)先進行小范圍試驗（約30頭），無不良反應(yīng)后，方可擴大接種范圍。

2.免疫注意事項

科學(xué)免疫，減少應(yīng)激反應(yīng)，倡導(dǎo)“四打”“四不打”。

“四打”：(1)免疫接種僅對健康牲畜進行；（2）在動物處于休閑、非應(yīng)激狀態(tài)下進行免疫接種；（3）將免疫接種安排在氣候適宜的時間段，如在炎熱季節(jié)，應(yīng)選在清晨或者傍晚進行；（4）經(jīng)過長途運輸后的動物，充分休息24 h以上再進行免疫接種。

“四不打”：（1）動物在宰殺前20 d之內(nèi)不要對其進行免疫接種；（2）天氣突變、轉(zhuǎn)群、斷奶、換料、吃料、飽腹期間暫不要進行免疫接種；（3）對患病、瘦弱牲畜，及斷奶前幼畜暫不接種，待牲畜康復(fù)、恢復(fù)正常后方可免疫接種；（4）配種10～15 d內(nèi)的母畜、臨產(chǎn)母畜（30 d內(nèi)）最好不要接種，等到母畜產(chǎn)后再進行補免。

人員要求：（1）接種工作要求由經(jīng)過培訓(xùn)的專業(yè)人員嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，在更換衣服、鞋、帽和消毒之后進行。

（2）接觸過病畜人員，不應(yīng)再參加安全畜群的免疫接種，以防疫病的傳播。若必須參加，則一定要通過淋浴、洗頭、換衣、咳痰和隔離一整夜后，方可進行免疫操作。

緊急免疫接種：（1）緊急情況下，如疫病暴發(fā)時，對疫區(qū)和受威脅區(qū)尚未感染的動物應(yīng)該緊急免疫接種，以形成免疫隔離帶。（2）疫苗對安全區(qū)、受威脅區(qū)及疫區(qū)牲畜均可使用。必須依序免疫接種，先接種安全區(qū)的牲畜，然后再接種受威脅區(qū)的牲畜，最后接種疫區(qū)內(nèi)的牲畜。

剛經(jīng)過長途運輸?shù)男乱M動物，必須充分休息后方可接種疫苗，一般以休息24 h以上較為合適。緊急情況下，如疫病暴發(fā)時，對沒有感染的動物應(yīng)該迅速接種，特殊情況下應(yīng)靈活決定。

疫苗注射時，針頭應(yīng)與與體表呈90°垂直注入，確保將疫苗注入肌肉內(nèi)，不可注入脂肪層或者皮下。接種部位應(yīng)選擇在頸部和臀部肌肉比較厚的部位，接種時應(yīng)對動物的注射部位進行剪毛消毒。免疫接種口蹄疫疫苗時，不要同時接種其它疫苗。

使用前和使用過程中，應(yīng)將疫苗充分搖勻，但切不可劇烈振蕩，以防氣泡產(chǎn)生。已經(jīng)吸出的疫苗不可再回注于疫苗瓶內(nèi)。如果注射劑量大，可分點注射。禁止以“飛針”方式注射，以避免造成疫苗注射劑量不夠和注射部位不準(zhǔn)確。疫苗瓶開啟后，疫苗應(yīng)當(dāng)天用完且做好免疫記錄。注射時不能用一個注射器吸取兩種疫苗混用。

免疫是預(yù)防疫病的重要手段之一，同時，還需加強飼養(yǎng)管理、消毒和對其他疾病的防治。

3.疫苗免疫接種

疫苗接種要嚴(yán)格按照說明書規(guī)定的接種途徑、劑量、注意事項，以及科學(xué)的免疫程序進行。

免疫程序是通過大量科學(xué)試驗制定的。免疫程序的制定必須要考慮到當(dāng)?shù)匾咔闋顩r、動物的飼養(yǎng)管理（如斷奶時間、營養(yǎng)、轉(zhuǎn)群、飼養(yǎng)期等）、動物的母源抗體水平、疫苗抗原的免疫性、疫苗抗原含量、免疫次數(shù)、接種動物的反應(yīng)性等。因此，根據(jù)免疫效果，需要在實踐中不斷總結(jié)和完善。

尤其是基礎(chǔ)免疫，首先應(yīng)該考慮當(dāng)?shù)氐囊咔闋顩r，其次要考慮機體母源抗體水平或原有的抗體水平、首免時間、基礎(chǔ)免疫次數(shù)及劑量。首次免疫后，必須在一個月內(nèi)加強免疫一次，然后間隔3～4月加強免疫一次。

程序（僅供參考）：首次使用O、A雙價疫苗必須要在30 d以內(nèi)加強一次；母畜劑量2 ml為佳，一年3～4次；所產(chǎn)仔畜50日齡左右接種2 ml，30 d后再打一針，然后間隔3～4個月加免一次，每次每頭2 ml；未免疫或免疫間隔長的母畜所產(chǎn)仔畜，則提前到28～35日齡或更早開始。

四、免疫不良反應(yīng)的觀察與預(yù)防

接種疫苗后個別動物可能會產(chǎn)生不良反應(yīng)。一般的不良反應(yīng)表現(xiàn)為，個別動物注射部位輕微腫脹，體溫升高0.5℃～1℃，減食或停食1～2日，奶?？沙霈F(xiàn)一過性泌乳量減少，隨著時間延長，癥狀逐漸減輕消失。因品種、個體的差異，個別動物接種后可能會出現(xiàn)由過敏原引起的嚴(yán)重不良反應(yīng)，如焦躁不安、呼吸加快、肌肉震顫、可視黏膜充血、瘤胃鼓氣、鼻腔出血等，甚至因搶救不及時而死亡；少數(shù)懷孕母畜可能出現(xiàn)流產(chǎn)。出現(xiàn)嚴(yán)重過敏反應(yīng)時，應(yīng)及時使用腎上腺素、地塞米松等藥物進行搶救，同 時采用適當(dāng)?shù)妮o助治療措施。

五、免疫效果檢測

免疫動物的血清抗體水平與抗強毒侵襲的免疫保護有一定的正相關(guān)。因此，抗體監(jiān)測能夠間接反映免疫接種效果和水平，為制定合理免疫程序提供依據(jù)。對于已經(jīng)實施了免疫接種的動物，必需監(jiān)測免疫動物的群體抗體水平，以評估動物群體的免疫水平和抗感染能力。

接種口蹄疫疫苗時要求應(yīng)免動物100%免疫率，免疫抗體效價合格率達到70%以上。若免疫合格率較低，免疫效果不理想，未達到國家規(guī)定的抗體效價合格率水平，應(yīng)當(dāng)分析原因、采取措施、及時補免，提高免疫效果。同時，也要結(jié)合流行病學(xué)、臨床癥狀、血清學(xué)指標(biāo)、預(yù)防效果等對免疫效果做出綜合性判斷。

監(jiān)測程序（僅供參考）：

采血時間：豬免疫28d后，其他畜21 d后，進行免疫效果監(jiān)測。

監(jiān)測方法與抗體合格率判定標(biāo)準(zhǔn)：

亞洲I型口蹄疫：液相阻斷ELISA；抗體效價≥26判定為合格。

O型口蹄疫：滅活類疫苗采用正向間接血凝試驗、液相阻斷ELISA，合成肽疫苗采用VP1結(jié)構(gòu)蛋白ELISA；滅活類疫苗抗體正向間接血凝試驗的抗體效價≥25判定為合格，液相阻斷ELISA的抗體效價≥26判定為合格；合成肽疫苗VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA的抗體效價≥25判定為合格。

A型口蹄疫：液相阻斷ELISA；抗體效價≥26判定為合格。

口蹄疫疫苗的應(yīng)用，已使口蹄疫的疫情得到了有效的防控，大幅度地減輕了疫情的危害。中農(nóng)威特公司開展的《針對新傳入我國口蹄疫流行毒株的高效疫苗的研制及應(yīng)用》榮獲了國家科學(xué)技術(shù)進步二等獎，國家現(xiàn)已啟動了亞洲I型口蹄疫免疫全面退出、開展非免疫無疫建設(shè)工作，我國口蹄疫控制策略獲得世界動物衛(wèi)生組織（OIE）頒證認(rèn)可等等事實顯示，有步驟、有計劃地實施免疫接種口蹄疫疫苗，可以增強動物抵抗口蹄疫病毒的能力，有效預(yù)防和控制口蹄疫的暴發(fā)和流行，有效地保證了畜牧業(yè)的發(fā)展，使人類朝著最終消滅口蹄疫的方向前進。