韋獻(xiàn)雅，唐婭梅

(成都久森農(nóng)業(yè)科技有限公司，成都 新都 610500)

脫毒馬鈴薯原原種工廠化生產(chǎn)流程標(biāo)準(zhǔn)

韋獻(xiàn)雅，唐婭梅

(成都久森農(nóng)業(yè)科技有限公司，成都 新都 610500)

馬鈴薯脫毒良繁體系的建立，為馬鈴薯脫毒種薯生產(chǎn)打下了良好的基礎(chǔ)。目前，各生產(chǎn)企業(yè)和科研院所都建起了溫網(wǎng)室繁殖脫毒原原種，為馬鈴薯脫毒良種的快繁和推廣提供了很好的條件。要使脫毒原原種的生產(chǎn)達(dá)到低成本、高質(zhì)量、高效益，實(shí)現(xiàn)原原種生產(chǎn)的規(guī)模化、產(chǎn)業(yè)化，必須根據(jù)各地不同的生產(chǎn)條件，總結(jié)出自己的生產(chǎn)管理方法。本文總結(jié)了本企業(yè)在工廠化生產(chǎn)原原種過程中的一些流程和經(jīng)驗(yàn)，并形成了企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，以供同行參考和借鑒。

脫毒馬鈴薯；原原種生產(chǎn)；企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

1 組培苗脫毒及快繁生產(chǎn)程序

1.1 組培苗的啟動

1.1.1 選材 選用生產(chǎn)上主栽的或具有某種特性的優(yōu)良品種塊莖的休眠芽、或剛出土幼苗的莖尖、或田間成株上的葉芽作莖尖剝離材料。

1.1.2 材料處理 將選擇的馬鈴薯薯塊材料放在溫室或培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行催芽處理，36℃處理4～6周后制取脫毒材料，用紫外線照射脫毒材料10min。

1.1.3 培養(yǎng)基的制備 在每l000ml MS培養(yǎng)基中加GA3 0.2～0.3mg、6-BA 0.1～0.2mg、NAA 0.01～0.05mg，分裝入管(或瓶)。

1.1.4 滅菌 在0.12Mpa/cm2壓力下滅菌20～23min，冷卻備用。

1.1.5 莖尖剝離接種 待芽萌發(fā)至2～3cm長時，選取粗壯的芽，放入紗布袋，用自來水沖洗1h后，在無菌條件下，用75%酒精浸2～3s，再用0.1%升汞液消毒3～6min(或用3%次氯酸鈉液加2～4滴振蕩消毒15～20min)，取出用無菌水沖洗3～5次，用滅菌濾紙吸干材料表面水分，在體視解剖鏡下用手術(shù)刀等工具輕、準(zhǔn)、快速地剝?nèi)ビ兹~，切取帶l～2個葉原基(0.1～0.4mm大小)的生長點(diǎn)，迅速接種入裝有分化培養(yǎng)基的試管或培養(yǎng)瓶中，每管(瓶)放入1個生長點(diǎn)，并注明品種、莖尖號、接種日期。

1.1.6 培養(yǎng)條件 室溫21～25℃，光照時數(shù)l0～12h/d，光照強(qiáng)度2000～30001x條件下培養(yǎng)120～140d。當(dāng)看到明顯生長的小莖，葉原基形成可見的小葉，隨即轉(zhuǎn)入無生長調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基中。小苗繼續(xù)生長并形成根系，發(fā)育成具3～4個葉片的小植株，就可繼續(xù)擴(kuò)繁。

1.1.7 記錄 接種完成后，填寫《組培苗莖尖脫毒登記表》。

1.2 病毒檢測

采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)由本單位先進(jìn)行自檢，然后送國家法定植檢部門復(fù)檢認(rèn)定。以單株為系進(jìn)行擴(kuò)繁，苗數(shù)達(dá)150～200株時隨機(jī)抽取3～4個樣本，每個樣本10～15株，用于檢測的數(shù)量不低于總數(shù)的10%。根據(jù)檢測結(jié)果出具檢驗(yàn)結(jié)果報告單，如果脫毒苗沒有檢出PLRV、PVY、PVA、PVX、PVM或PVS和PSTVd等病毒和類病毒，則應(yīng)批準(zhǔn)進(jìn)行組培苗生產(chǎn)。不合格的脫毒苗不得用于組培快繁。脫毒苗復(fù)檢：繼代擴(kuò)繁中選留的脫毒苗，每年至少作一次病毒復(fù)檢。

1.3 脫毒基礎(chǔ)苗快繁

1.3.1 脫毒組培苗來源 經(jīng)檢測，確認(rèn)脫除了所列病毒的組培苗。

1.3.2 培養(yǎng)基 用MS培養(yǎng)基，根據(jù)不同植物的不同生長階段添加相應(yīng)濃度6-BA，NAA等激素。

1.3.3 滅菌 在0.12Mpa/cm2壓力下滅菌20～23min，冷卻備用。

1.3.4 快繁 馬鈴薯組培苗將母苗剪切成1cm左右，帶一葉一芽的莖段接種于繼代培養(yǎng)基上，每瓶培養(yǎng)基接種10～15個莖段，待莖段長成高10cm左右小苗(培養(yǎng)15～30d)，進(jìn)行切段轉(zhuǎn)接，如此循環(huán)，反復(fù)繼代培養(yǎng)繁殖。

1.3.5 培養(yǎng)條件 室溫21～25℃，光照時數(shù)l0～12h/d，光照強(qiáng)度2000～30001ux。

1.4 組培苗的保存

1.4.1 培養(yǎng)基 Ms+甘露醇20～80mg/L+卡拉膠5500mg/L+蔗糖30000mg/L，pH5.8，每瓶裝培養(yǎng)基45～70ml，滅菌同1.1.4。

1.4.2 接種 選繼代培養(yǎng)中生長健壯的組培苗，進(jìn)行接種，接種方法同3.3.3，每瓶接種4～15個莖段或健壯苗。

1.4.3 培養(yǎng) 置弱光(1000lx)和較低溫度(5～10℃)下保存。3～6個月轉(zhuǎn)接1次。3～4年更新1次，用于快繁的脫毒組培苗。

2 脫毒馬鈴薯試管苗和扦插苗種植

2.1 場地準(zhǔn)備

2.1.1 網(wǎng)室大棚 種植前檢查大棚防蟲網(wǎng)有無孔洞，設(shè)施設(shè)備有無損壞，出現(xiàn)問題及時報修，基質(zhì)鋪設(shè)及大棚維修完畢后再對大棚內(nèi)部進(jìn)行棚體消毒。

2.1.2 基質(zhì)準(zhǔn)備 種植基質(zhì)為第一次使用基質(zhì)，無需對基質(zhì)消毒，若為使用過的基質(zhì)，種植前用濃度為500～800倍液的氫氧化銅溶液對基質(zhì)進(jìn)行消毒處理，消毒后密閉網(wǎng)室大棚,15d后用清水沖洗基質(zhì)，自然晾干待用。

2.2 煉苗

根據(jù)扦插計劃任務(wù)中所需試管苗數(shù)量，要提前2～3d將試管苗從培養(yǎng)室轉(zhuǎn)運(yùn)到煉苗場按區(qū)域分品種進(jìn)行堆放，并作好標(biāo)識。

2.3 剪苗

2.3.1 組培苗剪苗

2.3.1.1 消毒 剪苗前用75%的酒精棉球擦拭手心手背、剪刀和苗盤。剪苗過程中若更換品種必須對剪刀和苗盤進(jìn)行重新消毒。

2.3.1.2 剪苗 將培養(yǎng)瓶內(nèi)的試管苗輕輕取出，用消毒的剪刀將試管苗從基部剪下，按順序放入苗盤內(nèi)。

2.3.2 扦插苗剪苗

2.3.2.1 消毒 剪苗前用75%的酒精棉球擦拭專用剪苗刀，剪苗過程中若更換品種必須對剪苗刀進(jìn)行重新消毒。

2.3.2.2 剪苗 由工人按照管理人員要求，用自制專用剪苗刀，剪取種植后長出新葉，高度高于10cm的種苗莖尖，分品種放入塑料筐內(nèi)。

2.4 打孔

種植前由工人使用專用打孔器，按照管理人員要求，對所需的苗床廂面進(jìn)行打孔處理，基質(zhì)厚度保證6～8cm，基質(zhì)含水量保持在60%～70%之間。

2.5 扦插

2.5.1 組培苗的扦插 將苗盤內(nèi)的試管苗放入0.1mol/L的NAA溶液中浸泡10min，然后按照一孔一苗的要求進(jìn)行扦插，扦插深度2～3cm。

2.5.2 扦插苗的扦插 將塑料筐內(nèi)的扦插苗放入清水中沖洗5min，保證葉片及莖部濕潤，然后按照一孔一苗的要求進(jìn)行扦插，扦插深度2～3cm。

2.6 澆水

試管苗和扦插苗扦插后需立即澆定根水，吸透為止，夏季氣溫超過30℃時，澆水后需加蓋遮陽網(wǎng)遮陰，冬季或春季溫度低于5℃時，需加蓋塑料薄膜保溫。

2.7 掛牌

每扦插完一個廂面由管理人員統(tǒng)一在苗床廂面上插入品種標(biāo)示牌，標(biāo)示牌上注明品種名稱、扦插日期、種苗類型，并填寫大棚品種分布圖。

2.8 填寫《生產(chǎn)記錄單》

完整填寫每日生產(chǎn)記錄單，記錄內(nèi)容包括扦插品種、數(shù)量、種苗類型、扦插時間。

3 馬鈴薯原原種栽培管理

3.1 灌溉

大棚內(nèi)馬鈴薯需水標(biāo)準(zhǔn)為：苗期扦插后基質(zhì)相對濕度保持95%～100%，剛扦插的苗子每天必須澆水(早上8～9時，下午5～6時)，防止萎蔫。苗子5～10d(冬季10d、夏季5d)后開始生根、長新葉。扦插15d后每隔1～3d澆1次透水。結(jié)薯期、馬鈴薯塊莖膨大期，基質(zhì)水分保持在70%～80%。收獲前10d停止?jié)菜?。一般掌握陰雨天不澆，基質(zhì)上部不干不澆，暴雨天氣還應(yīng)注意防雨。按本公司的灌溉經(jīng)驗(yàn)，每4天開1次噴灌，每次噴灑時間控制在30min左右，春馬鈴薯每開2～3次噴灌后需人工補(bǔ)水1次，秋馬鈴薯需每開4～5次噴灌后人工補(bǔ)水1次。

3.2 施肥

每周施肥1次，施肥種類及數(shù)量根據(jù)大棚內(nèi)薯苗生長情況而定。一般情況下組培苗未生根前不得施用任何化學(xué)肥料，以免燒苗。

3.2.1 幼苗期 小苗生根成活后(5～10d)要及時施肥，一般用0.2%磷酸二氫鉀液或0.2%尿素噴施，1m2噴2～3kg，每周1～2次。

3.2.2 苗期 扦插20～35d后用130g復(fù)合肥+100g尿素對水150kg澆施，1m2澆大約5kg,一般隔7d噴1次。

3.2.3 孕蕾到開花期 扦插后35～45d，用200g復(fù)合肥、200g鉀肥對水100kg噴施，1m2噴7kg左右，隔7d噴1次。

3.2.4 塊莖膨大期、成熟期 一般用200g復(fù)合肥、200g鉀肥對水100kg噴施，1m2噴施10～12kg,每7d噴施1次，每次噴施前將苗子澆濕，噴施后用水澆一下苗子，以防灼傷。收獲前15～20d停止追肥。

3.2.5 填寫施肥記錄單 記錄內(nèi)容包括施肥日期、肥料種類、數(shù)量、操作員、備注。

3.3 增溫/降溫

春馬鈴薯在每天10時左右需打開天窗，同時關(guān)閉遮陽網(wǎng)；19時左右關(guān)閉天窗，同時打開遮陽網(wǎng)(遇雨天則需保持遮陽網(wǎng)打開)。秋馬鈴薯在棚內(nèi)溫度降低到20℃以下時，需關(guān)閉大棚的側(cè)膜，同時在每天的10時左右打開天窗、18時左右關(guān)閉天窗，從而把大棚內(nèi)的溫度控制在25℃左右。

3.4 遮光/補(bǔ)光

馬鈴薯光照強(qiáng)度達(dá)40000lux時，需用遮陽網(wǎng)進(jìn)行遮光處理。

3.5 除草

在馬鈴薯各個時期都需要注意除草，除草要做到“及時，干凈”。

3.6 病蟲害防治

3.6.1 預(yù)防 馬齡薯主要病害有早、晚疫病，特別在陰雨天氣發(fā)病率最高。條件好、大棚數(shù)量多的情況下，最好把組培苗和扦插苗分棚栽植，以便管理和減少晚疫病傳染。組培苗栽后20d用800倍液殺毒礬預(yù)防晚疫病，栽后30d用殺毒礬、雷多米爾500倍液或72%霜霉疫凈500倍液防治晚疫病，藥劑交替使用，每周打1次。馬齡薯主要害蟲有蚜蟲、白粉虱、螨類及地下害蟲地老虎等。蚜蟲防治要注意檢查網(wǎng)室，及時防堵漏洞，嚴(yán)防蚜蟲侵人傳毒。溫室白粉虱可用敵敵畏1000倍稀釋液加溴氰菊酯3000倍稀釋液噴霧，每隔3～7d噴1次，連噴3次。螨類可用三氯殺螨醇800倍液防治。地老虎在有土栽培條件下容易發(fā)生，而在無土栽培條件下則很少發(fā)生。

3.6.2 治療 當(dāng)大棚內(nèi)出現(xiàn)病害發(fā)病中心則需仔細(xì)觀察其病征病狀，用相機(jī)記錄發(fā)病狀況，及時拔除病株，及時打藥治療。

3.6.3 做好防治記錄 填寫病蟲害防治記錄單。填寫的主要內(nèi)容包括打藥日期、目的、藥品名稱、施藥倍數(shù)、使用數(shù)量、使用地點(diǎn)、使用時間、操作人員、使用工具。照相記錄。

4 原原種收獲

4.1 割苗

根據(jù)各個大棚種薯生產(chǎn)日期、生育期確定割苗時間，割苗前10d停止?jié)菜７制贩N割苗，每割完一個品種，將薯苗運(yùn)出大棚，轉(zhuǎn)運(yùn)薯苗前再次清理薯苗上的種薯，清理下來的種薯放入尼龍網(wǎng)袋并掛牌，吊牌上要注明品種名稱及收獲日期。

4.2 產(chǎn)量抽樣

根據(jù)種植時間、品種、苗源類型確定抽樣點(diǎn)及數(shù)量，每個品種按300m2抽一個樣，每個樣的抽樣面積為5m2。收獲前2d內(nèi)完成所有品種抽樣，確定合格薯與不合格薯的百分比，并填寫《產(chǎn)量抽樣單》。根據(jù)產(chǎn)量抽樣結(jié)果預(yù)測產(chǎn)量。

4.3 收薯

將過篩后的種薯裝入60目尼龍網(wǎng)袋放于原苗床，每袋可裝滿。根據(jù)苗床標(biāo)示牌，填寫吊牌，掛于尼龍袋上。

4.4 攤晾

由工人將種薯分品種運(yùn)輸至攤晾地放在規(guī)定的區(qū)域內(nèi)，經(jīng)管理人員復(fù)核后，安排工人攤晾。攤晾時將所有尼龍袋上的吊牌取下放入該尼龍袋所倒出的種薯上。種薯的攤晾厚度不超過3cm。

4.5 分級

為方便銷售及估數(shù)的準(zhǔn)確性，共分7級，級數(shù)及相對應(yīng)的克數(shù)如下表示。0級：0.3g以下；1+級0.3～0.6g；1級：0.6～1g；2級：1～2g；3級：2～3g；4級：3～5g；5級：6～10g；6級：10～15g；7級：15g以上。注意，每分級完一個品種，需將篩網(wǎng)及分級機(jī)徹底清理一遍，防治遺留薯造成品種混雜。

4.6 裝袋

將薯按級別分裝于60目尼龍網(wǎng)袋內(nèi)，每個品種均按5kg/袋分裝。

4.7 掛牌

由分級人員稱量完后掛牌。要求每袋掛兩個吊牌，一個放于袋內(nèi)，一個掛于袋外。掛牌所用吊牌上要注明品種名稱、收獲日期、級別、粒數(shù)、種源類型。

4.8 入冷庫

記錄各原原種品種、級別、各級別袋數(shù)、粒數(shù)、入庫時間、入庫人員、冷庫號，填寫《冷庫入庫記錄單》。