汪忠淼

(中國醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院/遼寧省腫瘤醫(yī)院內(nèi)二科， 遼寧 沈陽 110042)

TE與TEC新輔助化療方案對乳腺癌患者外周血CTCs及TSCs的影響

汪忠淼

(中國醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院/遼寧省腫瘤醫(yī)院內(nèi)二科， 遼寧 沈陽 110042)

目的：探討多西他賽+表柔比星(TE)與多西他賽+吡柔比星+環(huán)磷酰胺(TEC)新輔助化療方案對乳腺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cells，CTCs)及腫瘤干細(xì)胞(Tumor stem cells , TSCs)的影響。方法:選取2015年1月至2016年6月收入我院的155例女性原發(fā)性乳腺癌患者，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組77例，觀察組78例。對照組接受TE方案治療；觀察組接受TEC方案治療，觀察兩組患者的療效、不良反應(yīng)、外周血CTCs及TSCs水平。結(jié)果:與對照組相比，觀察組患者的有效率為89.7%，對比后，差異不顯著(χ2=0.932，P>0.05)，與對照組相比，觀察組患者中性粒細(xì)胞較對照組顯著增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=8.923，P<0.05)，而胃腸道反應(yīng)、心臟毒性、肝功能異常、血小板減少、脫發(fā)及血蛋白方面并無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。與對照組患者相比，觀察組治療后Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者的外周血CTCs水平差異不顯著(χ2=1.293、1.441、0.992，P>0.05)，觀察組治療后Ⅰ期、Ⅱ期患者的外周血TSCs對比后，差異不顯著(χ2=1.903、1.783，P>0.05)，而Ⅲ期患者的外周血TSCs明顯更低，對比后，差異顯著(χ2=7.543，P<0.05)。結(jié)論:TE與TEC兩種新輔助化療方案對乳腺癌患者的臨床效果相近，TEC方案降低Ⅲ期乳腺癌患者的外周血TSCs的效果可能優(yōu)于TE方案。

新輔助化療方案； 乳腺癌； 腫瘤干細(xì)胞； 循環(huán)腫瘤細(xì)胞

乳腺癌嚴(yán)重威脅女性患者的健康。有研究表明，我國女性的發(fā)病率約為0.5%，位居各類腫瘤的首位[1]。對于乳腺癌的治療，臨床多采取放射治療、化學(xué)治療及手術(shù)治療等，但這些治療方式對患者均具有較大的傷害[2]。新輔助化療可降低腫瘤的臨床分期，有助于提高保乳治療，但臨床治療尚未有統(tǒng)一的化療周期及方案。有研究表明，與僅以蒽環(huán)類化療方案相比，蒽環(huán)類聯(lián)合紫衫醇類的新輔助化療方案對于乳腺癌的療效更優(yōu)[3]。乳腺癌患者早期可在外周血中檢測到循環(huán)腫瘤細(xì)胞，可能已經(jīng)出現(xiàn)潛伏的微轉(zhuǎn)移現(xiàn)象[4]。TSCs為腫瘤的早期微轉(zhuǎn)移提供了新的理論基礎(chǔ)[5]。CTCs是指從腫瘤脫落到外周血循環(huán)的腫瘤細(xì)胞中[6]。CTCs廣泛存在于多種腫瘤細(xì)胞中，與患者的臨床分期、生存、腫瘤的復(fù)發(fā)等具有緊密聯(lián)系[7]。CTCs及TSCs對于腫瘤的的預(yù)防、診斷及治療具有重要的參考意義，但目前化療方案對腫瘤患者的CTCs、TSCs的影響研究較少。為此，本次研究探討TE與TEC新輔助化療方案對乳腺癌患者的CTCs及TSCs的影響，為乳腺癌的治療方案的選擇提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料:選取2015年1月至2016年6月收入我院的155例女性原發(fā)性乳腺癌患者為研究對象。年齡28～68歲，平均年齡為(52.4±6.3)歲。根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組77例，觀察組78例，對照組接受TE方案治療；觀察組接受TEC方案治療。對兩組患者的年齡、腫瘤大小、TNM分期、閉經(jīng)狀態(tài)等基線資料對比后無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)患者及其家屬知情同意、醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

表1 兩組患者治療前基本資料比較

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn):納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者均符合采用參照NCCN《乳腺癌臨床實(shí)踐指南(中國版)》診斷及分期標(biāo)準(zhǔn)[8]；②患者經(jīng)組織病理結(jié)果確診為乳腺癌；③年齡處于18～75周歲，生存期預(yù)期超過3個月；④符合化療適應(yīng)癥，可采取化療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患者具有脾功能亢進(jìn)、甲亢、結(jié)締組織病等疾病造成白細(xì)胞減少；②患者具有原發(fā)性血液系統(tǒng)疾病，造血功能障礙；③患者具有心臟、肝、腎等重要臟器疾??；④患者具有精神障礙疾病或難以配合治療。

1.3 方法:所有患者均在化療前12h、6h時服用地塞米松(廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司, 20159543)，劑量為9.75mg。在化療前的0.5h肌肉注射地塞米松及苯海拉明(山西太原藥業(yè)有限公司，20160232)，劑量分別為10mg、20mg。對照組采用TE治療方案：多西他賽(浙江海正藥業(yè)股份有限公司，20150330)為75mg/m2，表柔比星(輝瑞制藥(無錫)有限公司，20150330)50mg/m2，1個療程為21d。觀察組患者采取TEC治療方案：患者以多西他賽、表柔比星及環(huán)磷酰胺(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，20150523)進(jìn)行治療，劑量分別為75mg/m2、50mg/m2及500mg/m2，1個療程為21d。兩組患者的化療方案均為4個療程。在化療前、化療后3d、7d和10d進(jìn)行血常規(guī)檢驗(yàn)。在化療24h后，當(dāng)白細(xì)胞低于3×109L-1時，通過重組人粒細(xì)胞集落刺激因子治療。同時當(dāng)天冬氨酸基轉(zhuǎn)移酶高于正常值2倍時，采取保肝治療措施。在每個化療周期后，觀察患者的療效及不良反應(yīng)，繼而判斷下一步化療方案。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 療效:參考WHO標(biāo)準(zhǔn)判斷患者的療效[9]，具體如下：①完全緩解：患者的乳腺癌病灶全部消失；②部分緩解：患者的瘤體體積縮小超過一半；③穩(wěn)定：患者的瘤體體積增加少于25%或者瘤體體積縮小比率少于一半；④進(jìn)展：瘤體體積增加超過25%或者出現(xiàn)新的病灶。有效率=(完全緩解+部分緩解)/總例數(shù)×100%。

1.4.2 不良反應(yīng):觀察兩組患者的不良反應(yīng)，如中性粒細(xì)胞、胃腸道反應(yīng)、心臟毒性、脫發(fā)及血蛋白等。

1.4.3 外周血CTCs：將全血5mL與1×PBS以1∶1混勻后，吸取1mL稀釋全血緩緩加入1mL的Ficoll分離液上層并進(jìn)行離心，轉(zhuǎn)速為2000rpm，時間為20min。吸取白膜層至清潔1.5mL的EP管中，并以PBS進(jìn)行清洗兩遍，離心1500rpm，時間為10min。棄去上清液后，重懸至1mL；吸取25μL的細(xì)胞懸液分別與稀釋液A、B、C的25μL混勻，靜止時間為3min，充池計數(shù)。完成外周血單個核細(xì)胞懸液制作后，再以CK19單克隆抗體標(biāo)記，免疫磁性激活細(xì)胞分選獲取CTCs。磁性分選：首先將MS分選柱放置于適當(dāng)MACS分選器的磁場，以500μL的緩沖液將分選柱進(jìn)行潤濕，并將磁性標(biāo)記后的細(xì)胞放置在分選柱上，分選細(xì)胞。收集先行流出的未標(biāo)記細(xì)胞，并以適當(dāng)?shù)木彌_液有效沖洗分選柱。在分選柱下防止合適的采集管，在分選柱中放置緩沖液，并以分選柱配置活塞將磁性標(biāo)記細(xì)胞推出。

1.4.4 外周血TSCs:外周血TSCs檢測：將提取CK19+細(xì)胞標(biāo)記單克隆抗體CD44、CD24進(jìn)行免疫熒光抗體雙染色，并以免疫熒光顯微鏡對CD44+/CD24-/low的TSCs含量進(jìn)行檢測。CD44+/CD24-/low檢測：在涂片上將CD44-FITC抗體滴入，在溫度為37℃下30min，并以0.1moL/L的PBS清洗三次，每次5min。以上述防范再次滴入CD24-FITC抗體。在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞涂片視野，并記錄陽性細(xì)胞總數(shù)。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者的療效對比:觀察組有效率為89.7%，對照組為84.4%，對比后，差異不顯著(χ2=0.932，P>0.05)，詳見表2。

表2 兩組患者的療效對比 n(%)

表3 兩組患者的不良反應(yīng)對比n(%)

2.2 兩組患者的不良反應(yīng)對比:與對照組相比，觀察組患者中性粒細(xì)胞較對照組顯著增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=8.923，P<0.05)。而胃腸道反應(yīng)、心臟毒性、肝功能異常、血小板減少、脫發(fā)及血蛋白方面并無顯著差異(P>0.05)，詳見表3。

2.3 兩組患者的外周血CTCs對比:與對照組患者相比，觀察組治療后Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者的外周血CTCs水平差異不顯著(χ2=1.293、1.441、0.992，P<0.05)，詳見表4。

表4 兩組患者的外周血CTCs對比n(%)

2.4 兩組患者的外周血TSCs對比:與對照組患者相比，觀察組治療后Ⅰ期、Ⅱ期患者的外周血TSCs，差異不顯著(χ2=1.903、1.783，P<0.05)，而Ⅲ期患者的外周血TSCs明顯更低，對比后，差異顯著(χ2=7.543，P<0.05)，見表5。

表5 兩組患者的并發(fā)癥對比n(%)

3 討 論

近幾年，新輔助化療方案逐漸被運(yùn)用于治療局部晚期乳腺癌，可發(fā)揮縮小瘤體，降低臨床分期，消滅微小轉(zhuǎn)移灶等作用。有研究表明，新輔助化療可明顯提高患者的生存期[10]。

CTCs是評價惡性腫瘤的生物學(xué)特征及轉(zhuǎn)移行為的常見窗口。腫瘤干細(xì)胞可發(fā)揮較強(qiáng)的轉(zhuǎn)移侵襲，乳腺癌患者的循環(huán)腫瘤細(xì)胞與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后具有良好的聯(lián)系。但也有研究表明，CTCs并不一定表明患者會形成轉(zhuǎn)移灶。大多數(shù)循環(huán)腫瘤細(xì)胞并無分化增殖能力，但有部分TSCs與腫瘤的發(fā)展緊密相關(guān)。同時腫瘤干細(xì)胞可形成瘤形，進(jìn)而到達(dá)人體組織器官中形成轉(zhuǎn)移灶。因此，對CTCs、TSCs的檢測與乳腺癌患者的化療效果具有重要的意義。

多西紫杉醇屬于植物類提取抗腫瘤藥物，為細(xì)胞周期特異性藥物，可抑制微管解聚，阻斷細(xì)胞M期，防止癌細(xì)胞進(jìn)行分裂，進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞死亡，穩(wěn)定微管網(wǎng)絡(luò)等作用,但患者以多西紫杉醇類治療后，常會出現(xiàn)中性粒細(xì)胞變少、胃腸道反應(yīng)等不良反應(yīng)。表柔比星是一種蒽環(huán)類藥物，是阿霉素立體異構(gòu)體。表柔比星是通過嵌入DNA雙螺旋，進(jìn)而與DNA互相結(jié)合，阻斷合成DNA、RNA，但多會出現(xiàn)中性粒細(xì)胞、胃腸道反應(yīng)、脫發(fā)等不良反應(yīng)。

在本次研究中，對照組與觀察組Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者檢測到CK19+細(xì)胞的比例均無顯著性差異(P>0.05)，治療后觀察組Ⅲ期患者檢測到CD44+/CD24-/Low細(xì)胞的例數(shù)顯著低于對照組Ⅲ期患者。因此，TEC方案降低Ⅲ期乳腺癌患者的TSCs更優(yōu)。外周血微轉(zhuǎn)移與腫瘤干細(xì)胞有著密切聯(lián)系，且腫瘤干細(xì)胞對于外周血微轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)起著重要的作用，即腫瘤干細(xì)胞的存在意味著潛在微轉(zhuǎn)移的可能。而觀察組Ⅲ期患者檢測到CD44+/CD24-/Low細(xì)胞的例數(shù)低于對照組，而Ⅰ期患者已經(jīng)檢測到CD44+/CD24-/Low，表明乳腺癌初期已經(jīng)是全身性疾病，可能存在著微轉(zhuǎn)移。CTCs的存在并不表明腫瘤干細(xì)胞一定存在，表明CTCs在外周血中大多數(shù)趨于死亡，而TSCs由于干細(xì)胞特性而在外周血中免于死亡。

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TE and TEC Neoadjuvant Chemotherapy on CTCs and TSCs in Peripheral Blood of Patients with Breast Cancer

WANGZhongmiao

(TheTumorHospitalofChinaMedicalUniversity,LiaoningShenyang110042,China)

Objective: To analyze the effect of TE and TEC neoadjuvant chemotherapy on CTCs and TSCs in peripheral blood of patients with breast cancer. Methods: 155 cases of patients with breast cancer were selected from January 2015 to June 2016 in our hospital. The patients were divided into control group (77 cases) and observation group (78 cases) according to the random number table method. The patients in control group were treated with TE regimen, the observation group received TEC regimen, the curative effect, adverse reaction, CTCs and TSCs level in the two groups were observed. Results: Compared with the control group, the effective rate of the observation group was 89.7%, the difference was not significant (χ2=0.932, P>0.05), the neutrophils in the observation group were significantly more, the difference was significant (χ2=8.923,P<0.05), but there was no significant difference in gastrointestinal tract reaction, cardiotoxicity, liver function abnormality, thrombocytopenia, alopecia and serum albumin (P>0.05). Compared with the control group, there was no significant difference in CTCs level between the observation group and the control group (χ2=1.293, 1.441, 0.992, P>0.05). There was no significant difference in TSCs between the two groups (χ2=1.903, 1.783, P>0.05), but the level of TSCs in stage Ⅲ was significantly lower than that in stage Ⅲ (χ2= 7.543, P<0.05). Conclusion: The TE and TEC neoadjuvant chemotherapy for breast cancer patients with similar clinical efficacy, TEC program to reduce stage Ⅲ breast cancer patients with peripheral blood TSCs may be better than the TE program.

Neoadjuvant chemotherapy; Breast cancer; Cancer stem cells; Circulating tumor cells

遼寧省科技廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目,(編號：A201225624CK)

1006-6233(2017)02-0204-05

A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2017.02.009