趙成玉，黃香麗，李占全，崔 森

·論著·

1型糖尿病患者Th17細(xì)胞比例及其相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)水平的變化

趙成玉*，黃香麗，李占全，崔 森

目的 探討1型糖尿病患者輔助性T細(xì)胞17(Th17細(xì)胞)比例及其相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)水平的變化。方法 選取2012年1月—2014年10月在青海大學(xué)附屬醫(yī)院住院且符合納入標(biāo)準(zhǔn)的1型糖尿病患者20例(1型糖尿病組)、2型糖尿病患者21例(2型糖尿病組)，并選取同期本院體檢健康者22例作為對(duì)照組。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血Th17細(xì)胞比例，采用ELISA法檢測(cè)血漿白介素(IL)-17A、IL-23、IL-6、IL-1β水平。比較3組受試者一般資料〔體質(zhì)指數(shù)(BMI)、年齡、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、球蛋白(GLB)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、空腹血糖(FBG)〕，2型糖尿病組、1型糖尿病組患者臨床指標(biāo)〔尿酮、空腹C肽(FCP)、空腹胰島素(FINS)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、胰島素抗體(INS-Ab)、谷氨酸脫羧酶抗體(GAD-Ab)、病程〕，3組受試者Th17細(xì)胞比例、IL-17A水平、IL-23水平、IL-6水平、IL-1β水平；分析3組受試者Th17細(xì)胞比例和IL-17A水平、IL-23水平、IL-6水平、IL-1β水平的相關(guān)性，并采用多元線性回歸分析分析Th17細(xì)胞比例、IL-17A水平、IL-23水平、IL-6水平、IL-1β水平與一般資料和臨床指標(biāo)的關(guān)系。結(jié)果 2型糖尿病組患者BMI、FBG水平高于對(duì)照組，SBP低于對(duì)照組(P<0.05)；1型糖尿病組患者BMI、SBP、DBP、Cr水平、TC水平低于2型糖尿病組、對(duì)照組，F(xiàn)BG水平高于2型糖尿病組、對(duì)照組(P<0.05)；1型糖尿病組患者TG水平低于2型糖尿病組(P<0.05)。1型糖尿病組患者HbA1c、INS-Ab、GAD-Ab水平高于2型糖尿病組，尿酮、FCP、FINS水平低于2型糖尿病組(P<0.05)。3組受試者IL-6水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；2型糖尿病組患者Th17細(xì)胞比例、IL-17A水平高于對(duì)照組(P<0.05)；1型糖尿病組患者Th17細(xì)胞比例、IL-17A水平、IL-23水平、IL-1β水平高于2型糖尿病組、對(duì)照組(P<0.05)。1型糖尿病組患者Th17細(xì)胞比例與IL-17A水平、IL-23水平、IL-6水平呈正相關(guān)(r值分別為0.813、0.912、0.862，P<0.001)。2型糖尿病組患者Th17細(xì)胞比例與IL-17A水平呈正相關(guān)(r=0.637，P<0.05)。多元線性回歸分析結(jié)果顯示，Th17細(xì)胞比例與INS-Ab水平有線性回歸關(guān)系(B=0.121，SE=0.085，t=2.862，P=0.007)；IL-17A水平與INS-Ab水平有線性回歸關(guān)系(B=0.315，SE=0.042，t=3.696，P=0.001)；IL-23水平與GAD-Ab水平有線性回歸關(guān)系(B=20.115，SE=0.519，t=3.403，P=0.002)；IL-6水平與GAD-Ab水平有線性回歸關(guān)系(B=1.451，SE=0.478，t=3.032，P=0.004)；IL-1β水平與年齡有線性回歸關(guān)系(B=-0.037，SE=0.013，t=-2.878，P=0.006)。結(jié)論 1型糖尿病患者外周血Th17細(xì)胞比例、IL-17A水平、IL-23水平、IL-1β水平較2型糖尿病患者和健康者均升高，且外周血Th17細(xì)胞比例與IL-17A水平、IL-23水平、IL-6水平呈正相關(guān)。

糖尿病，1型；Th17細(xì)胞；細(xì)胞因子類

趙成玉，黃香麗，李占全，等.1型糖尿病患者Th17細(xì)胞比例及其相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)水平的變化[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2017，20(9)：1061-1066.[www.chinagp.net]

ZHAO C Y,HUANG X L,LI Z Q,et al.Ratio of Th17 cells and the changes of expression levels of its related cytokines in patients with type 1 diabetes mellitus[J].Chinese General Practice，2017，20(9)：1061-1066.

1型糖尿病是T細(xì)胞介導(dǎo)的器官特異性自身免疫性疾病。CD4+T細(xì)胞亞群中輔助性T細(xì)胞17(Th17細(xì)胞)參與多種自身免疫性疾病的發(fā)生，在白介素(IL)-1和IL-6誘導(dǎo)初始CD4+T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化，IL-23維持Th17細(xì)胞的穩(wěn)定。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床研究均發(fā)現(xiàn)，Th17細(xì)胞可能與1型糖尿病的發(fā)生有關(guān)[1]。本研究通過(guò)檢測(cè)1型糖尿病患者外周血Th17細(xì)胞比例及其相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)情況，旨在對(duì)Th17細(xì)胞比例及其相關(guān)細(xì)胞因子與1型糖尿病的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行初步研究，同時(shí)對(duì)糖尿病的分型診斷提供可能的檢測(cè)指標(biāo)。

1 對(duì)象與方法

1.1 糖尿病患者納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)1型糖尿病、2型糖尿病患者均符合WHO 1998年制定的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[2]；(2)受試者均自愿參加本研究，并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)急、慢性感染者；(2)肝、腎功能異常者；(3)甲狀腺功能亢進(jìn)癥或其他內(nèi)分泌疾病者；(4)自身免疫性疾病者；(5)近期使用影響免疫反應(yīng)的藥物者；(6)惡性腫瘤者；(7)妊娠期。

本研究背景：

國(guó)際糖尿病聯(lián)盟報(bào)道，2011年糖尿病的全球患病人數(shù)已達(dá)3.66億，盡管大部分為2型糖尿病，1型糖尿病所占比例較少，但1型糖尿病為兒童及青少年最常見(jiàn)的內(nèi)分泌疾病，且近年來(lái)全球患病率迅速增長(zhǎng)，嚴(yán)重影響人類的健康，因此明確發(fā)病機(jī)制、進(jìn)行有效的早期干預(yù)刻不容緩。

1.2 研究對(duì)象 選取2012年1月—2014年10月在青海大學(xué)附屬醫(yī)院住院且符合納入標(biāo)準(zhǔn)的1型糖尿病患者20例(1型糖尿病組)、2型糖尿病患者21例(2型糖尿病組)，并選取同期本院體檢健康者22例作為對(duì)照組。1型糖尿病組患者中男14例，女6例。2型糖尿病組患者中男17例，女4例。對(duì)照組受試者中男15例，女7例。

1.3 方法

1.3.1 采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血Th17細(xì)胞比例 采集3組受試者空腹靜脈血5 ml于肝素鈉抗凝管中，全血至聚蔗糖(Ficoll)密度梯度離心機(jī)中，600×g離心7 min，分離外周血單個(gè)核細(xì)胞；取500 μl外周血單個(gè)核細(xì)胞至12孔板中，加入等體積RPMI-1640培養(yǎng)液至培養(yǎng)孔中混勻，加離子霉素1 μg、佛波酯200 ng至培養(yǎng)孔中混勻后置于37 ℃ 5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)；1 h后再加入莫能霉素2 μg混勻后繼續(xù)置于37 ℃ 5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)3 h。加入PBS 1 ml混勻后，600×g離心7 min，棄上清液，標(biāo)記胞外抗體(后均避光操作)：對(duì)照管中加入異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的鼠抗人IgG抗體1.5 μl，藻紅蛋白-花青素-5復(fù)合物(PE-cy5)標(biāo)記的鼠抗人IgG抗體1.5 μl；測(cè)定管加入FITC標(biāo)記的鼠抗人CD8單抗3 μl，PE-cy5標(biāo)記的鼠抗人CD3單抗1.5 μl，渦旋細(xì)胞后避光孵育30 min；PBS 2 ml洗滌2次，加4%多聚甲醛500 μl室溫固定10 min固定表面抗體。PBS 2 ml洗滌2次，加0.1% Saponin緩沖液2 ml破膜，渦旋細(xì)胞后600×g離心7 min，棄上清液，留0.1% Saponin緩沖液200 μl懸浮細(xì)胞，標(biāo)記胞內(nèi)抗體：分別加藻紅蛋白(PE)標(biāo)記的鼠抗人IgG抗體1.5 μl，和PE標(biāo)記的抗人IL-17A 3 μl，渦旋細(xì)胞后避光孵育30 min；加0.1% Saponin緩沖液2 ml，渦旋細(xì)胞后以600×g離心7 min；棄上清液，加PBS 500 μl，渦旋細(xì)胞后過(guò)濾；采用COMLTER Epics XL流式細(xì)胞儀檢測(cè)Th17細(xì)胞比例。

1.3.2 采用ELISA法檢測(cè)血漿IL-17A、IL-23、IL-6、IL-1β水平 采集3組空腹靜脈血5 ml于肝素鈉抗凝管中，按人IL-17A、IL-1β、IL-6、IL-23 ELISA試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作(試劑盒均購(gòu)自eBioscience公司)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品及樣本450 nm處光密度(OD)值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算血漿IL-17A、IL-23、IL-6、IL-1β水平。

1.4 觀察指標(biāo) 比較3組受試者一般資料〔體質(zhì)指數(shù)(BMI)、年齡、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、球蛋白(GLB)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、空腹血糖(FBG)〕，1型糖尿病組、2型糖尿病組患者臨床指標(biāo)〔尿酮、空腹C肽(FCP)、空腹胰島素(FINS)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、胰島素抗體(INS-Ab)、谷氨酸脫羧酶抗體(GAD-Ab)、病程〕，3組受試者Th17細(xì)胞比例、IL-17A水平、IL-23水平、IL-6水平、IL-1β水平；分析3組受試者Th17細(xì)胞比例與IL-17A水平、IL-23水平、IL-6水平、IL-1β水平的相關(guān)性，并采用多元線性回歸分析分析Th17細(xì)胞比例、IL-17A水平、IL-23水平、IL-6水平、IL-1β水平與一般資料和臨床指標(biāo)的關(guān)系。

2 結(jié)果

2.1 3組受試者一般資料比較 3組受試者GLB水平、WBC、ALT水平、AST水平、BUN水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；3組受試者BMI、年齡、SBP、DBP、Cr水平、TC水平、TG水平、FBG水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中2型糖尿病組患者BMI、FBG水平高于對(duì)照組，SBP低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；1型糖尿病組患者BMI、SBP、DBP、Cr水平、TC水平低于2型糖尿病組、對(duì)照組，F(xiàn)BG水平高于2型糖尿病組、對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；1型糖尿病組患者TG水平低于2型糖尿病組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表1)。

2.2 2型糖尿病組、1型糖尿病組患者臨床指標(biāo)比較 1型糖尿病組患者HbA1c、INS-Ab、GAD-Ab水平高于2型糖尿病組，尿酮、FCP、FINS水平低于2型糖尿病組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；兩組患者病程比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05，見(jiàn)表2)。

2.3 3組受試者Th17細(xì)胞比例、IL-17A水平、IL-23水平、IL-1β水平、IL-6水平比較 3組受試者IL-6水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；3組受試者Th17細(xì)胞比例、IL-17A水平、IL-23水平、IL-1β水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中2型糖尿病組患者Th17細(xì)胞比例、IL-17A水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；1型糖尿病組患者Th17細(xì)胞比例、IL-17A水平、IL-23水平、IL-1β水平高于2型糖尿病組、對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表3)。

2.4 3組受試者Th17細(xì)胞比例與IL-17A水平、IL-23水平、IL-6水平、IL-1β水平的相關(guān)性分析 1型糖尿病組患者Th17細(xì)胞比例與IL-17A水平、IL-23水平、IL-6水平呈正相關(guān)(r值分別為0.813、0.912、0.862，P<0.001)，與IL-1β水平無(wú)直線相關(guān)關(guān)系(r=0.257,P=0.275)。2型糖尿病組患者Th17細(xì)胞比例與IL-17A水平呈正相關(guān)(r=0.637，P<0.05)，與IL-23水平、IL-6水平、IL-1β水平無(wú)直線相關(guān)關(guān)系(r值分別為0.047、0.052、0.224,P值分別為0.841、0.824、0.330)。對(duì)照組受試者Th17細(xì)胞比例與IL-17A水平、IL-23水平、IL-6水平、IL-1β水平均無(wú)直線相關(guān)關(guān)系(r值分別為-0.160、-0.057、-0.272、0.226，P值分別為0.478、0.800、0.221、0.312)。

2.5 Th17細(xì)胞比例、IL-17A水平、IL-23水平、IL-6水平、IL-1β水平分別與一般資料和臨床指標(biāo)的多元線性回歸分析 分別以Th17細(xì)胞比例、IL-17A水平、IL-23水平、IL-6水平、IL-1β水平為因變量，以一般資料和臨床指標(biāo)為自變量行多元線性回歸分析，結(jié)果顯示，Th17細(xì)胞比例與INS-Ab水平有線性回歸關(guān)系(B=0.121，SE=0.085，t=2.862，P=0.007)；IL-17A水平與INS-Ab水平有線性回歸關(guān)系(B=0.315，SE=0.042，t=3.696，P=0.001)；IL-23水平與GAD-Ab水平有線性回歸關(guān)系(B=20.115，SE=0.519，t=3.403，P=0.002)；IL-6水平與GAD-Ab水平有線性回歸關(guān)系(B=1.451，SE=0.478，t=3.032，P=0.004)；IL-1β水平與年齡有線性回歸關(guān)系(B=-0.037，SE=0.013，t=-2.878，P=0.006)。

表1 3組受試者一般資料比較

注：BMI=體質(zhì)指數(shù)，SBP=收縮壓，DBP=舒張壓，GLB=球蛋白，WBC=白細(xì)胞計(jì)數(shù)，ALT=丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，AST=天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，BUN=尿素氮，Cr=肌酐，TC=總膽固醇，TG=三酰甘油，F(xiàn)BG=空腹血糖，1 mm Hg=0.133 kPa；與對(duì)照組比較，aP<0.05；與2型糖尿病組比較，bP<0.05

表2 兩組患者臨床指標(biāo)比較

注：a為u值；FCP=空腹C肽，F(xiàn)INS=空腹胰島素，HbA1c=糖化血紅蛋白，INS-Ab=胰島素抗體，GAD-Ab=谷氨酸脫羧酶抗體

表3 3組受試者Th17細(xì)胞比例、IL-17A水平、IL-23水平、IL-1β水平、IL-6水平比較

注：Th17細(xì)胞=輔助性T細(xì)胞17，IL=白介素；與對(duì)照組比較，aP<0.05；與2型糖尿病組比較，bP<0.05

3 討論

1型糖尿病為T細(xì)胞介導(dǎo)的器官特異性自身免疫性疾病，是遺傳易感個(gè)體在環(huán)境因素影響下導(dǎo)致的輔助性T細(xì)胞1(Th1細(xì)胞)活動(dòng)增強(qiáng)、輔助性T細(xì)胞2(Th2細(xì)胞)活動(dòng)減弱、胰島B細(xì)胞損害的自身免疫性疾病。胰島B細(xì)胞損傷過(guò)程中免疫細(xì)胞與細(xì)胞因子等炎性遞質(zhì)發(fā)揮重要作用[3]，主要表現(xiàn)為1型糖尿病患者IL-1β、IL-6、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、C反應(yīng)蛋白(CRP)等炎性因子水平的升高[4-5]。CD4+T細(xì)胞亞群中Th17細(xì)胞分泌IL-17，IL-1、IL-6可誘導(dǎo)初始CD4+T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化[6-7]，從而抑制調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)的產(chǎn)生[8]。IL-23則可維持Th17細(xì)胞的穩(wěn)定，同時(shí)參與自身免疫性疾病的發(fā)生、發(fā)展。動(dòng)物模型及1型糖尿病研究發(fā)現(xiàn)，Th17細(xì)胞比例、IL-17水平可能與1型糖尿病相關(guān)[1]。本研究對(duì)20例1型糖尿病患者Th17細(xì)胞比例、IL-17A水平，以及CD4+T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化和維持過(guò)程中主要的細(xì)胞因子IL-23水平、IL-6水平、IL-1β水平進(jìn)行了研究，并比較其與2型糖尿病、健康者表達(dá)水平間的差異，以了解Th17細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子與1型糖尿病的關(guān)系。

本研究結(jié)果顯示，1型糖尿病組患者Th17細(xì)胞比例、IL-17A水平、IL-23水平、IL-1β水平高于2型糖尿病組和對(duì)照組，同時(shí)1型糖尿病組患者Th17細(xì)胞比例與IL-17A水平、IL-23水平、IL-6水平呈正相關(guān)；多元線性回歸分析結(jié)果顯示，Th17細(xì)胞比例、IL-17A水平與INS-Ab水平有線性回歸關(guān)系，IL-23水平、IL-6水平與GAD-Ab水平有線性回歸關(guān)系；提示Th17細(xì)胞比例及其相關(guān)細(xì)胞因子可能參與胰島B細(xì)胞的自身免疫反應(yīng)。動(dòng)物模型研究顯示，NOD小鼠的胰島炎性病變部位IL-17水平較高，分析血清IL-17水平的升高與NOD小鼠糖尿病惡化有關(guān)[9]。研究發(fā)現(xiàn)，1型糖尿病患兒活化的外周血單個(gè)核細(xì)胞和記憶Th細(xì)胞中Th17細(xì)胞比例上調(diào)，IL-17A水平明顯升高[10-11]。新發(fā)1型糖尿病患者給予胰島抗原刺激外周血CD4+T細(xì)胞后，Th17細(xì)胞比例增加，胰島細(xì)胞IL-17RA、IL-17RC表達(dá)增加，胰腺引流的淋巴結(jié)中Th17細(xì)胞比例上調(diào)[12]。而Treg功能缺陷、自身抗體陽(yáng)性的兒童與自身抗體陰性的兒童相比，血漿IL-17水平更高[9]。體外研究發(fā)現(xiàn)，IL-17水平升高促進(jìn)IL-1β、γ干擾素(INF-γ)、TNF-α水平升高而誘導(dǎo)胰島B細(xì)胞凋亡[13]。IL-17水平升高能誘導(dǎo)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶的產(chǎn)生，誘導(dǎo)型一氧化氮合酶和線粒體超氧化物歧化酶的增多會(huì)導(dǎo)致自由基的產(chǎn)生，從而干擾胰島B細(xì)胞功能并導(dǎo)致其損害[14-15]。1型糖尿病患者Th17細(xì)胞比例上調(diào)及IL-17水平增加促進(jìn)胰島上調(diào)應(yīng)激反應(yīng)基因和促炎趨化因子(IL-1β、INF-γ、TNF-α)的表達(dá)，從而促進(jìn)胰島B細(xì)胞凋亡[16]。

本研究中2型糖尿病組患者Th17細(xì)胞比例、IL-17A水平高于對(duì)照組，Th17細(xì)胞比例與IL-17A水平呈正相關(guān)，提示在2型糖尿病患者機(jī)體內(nèi)存在免疫細(xì)胞異常情況。研究發(fā)現(xiàn)，肥胖和2型糖尿病存在機(jī)體低度系統(tǒng)性炎癥，這種炎癥可能與胰島素抵抗和糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生有關(guān)[17]。2型糖尿病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞持續(xù)性及誘導(dǎo)性分泌高水平的IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β[18-19]，同時(shí)2型糖尿病患者胰島B細(xì)胞中IL-8分泌增加，而抗炎細(xì)胞因子IL-10分泌減少[20]，通過(guò)抑制相關(guān)細(xì)胞因子可以保護(hù)嚙齒類動(dòng)物的胰島素抵抗[21-22]。在嚙齒類肥胖/2型糖尿病模型和2型糖尿病患者中發(fā)現(xiàn)促炎性Th細(xì)胞發(fā)生紊亂，即Th1細(xì)胞和Th17細(xì)胞增多，而Treg減少[23-24]。T細(xì)胞亞群的分布不平衡與肥胖和2型糖尿病的發(fā)生有關(guān)[24]。因此目前提出2型糖尿病為免疫細(xì)胞功能改變所致的慢性炎性疾病[25]，Th17細(xì)胞可能參與2型糖尿病的發(fā)病。

綜上所述，1型糖尿病患者外周血Th17細(xì)胞比例、IL-17A水平、IL-23水平、IL-1β水平較2型糖尿病患者和健康者均升高，且外周血Th17細(xì)胞比例與IL-17A水平、IL-23水平、IL-6水平呈正相關(guān)，而Th17細(xì)胞比例及細(xì)胞因子IL-17水平、IL-23水平的改變可能與胰島B細(xì)胞自身抗體水平升高有關(guān)。

作者貢獻(xiàn)：趙成玉進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)與實(shí)施、資料收集整理、撰寫論文并對(duì)文章負(fù)責(zé)；黃香麗進(jìn)行試驗(yàn)實(shí)施、評(píng)估、資料收集；李占全進(jìn)行試驗(yàn)指導(dǎo)及工作協(xié)調(diào)；崔森進(jìn)行質(zhì)量控制及校審。

本文無(wú)利益沖突。

本研究不足之處：

本研究對(duì)1型糖尿病患者外周血輔助性T細(xì)胞17(Th17細(xì)胞)比例及其相關(guān)細(xì)胞因子的變化進(jìn)行了初步研究，然而仍然存在一定的局限性，如樣本量較少，在研究過(guò)程中各組年齡存在一定的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但檢索相關(guān)文獻(xiàn)時(shí)未發(fā)現(xiàn)年齡與Th17細(xì)胞比例有相關(guān)性。

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(本文編輯：毛亞敏)

Ratio of Th17 Cells and the Changes of Expression Levels of Its Related Cytokines in Patients with Type 1 Diabetes Mellitus

ZHAOCheng-yu*,HUANGXiang-li,LIZhan-quan,CUISen

QinghaiUniversityAffiliatedHospital,Xining810001,China

*Correspondingauthor:ZHAOCheng-yu,Associatechiefphysician;E-mail:xnzhcy@126.com

Objective To investigate the ratio of helper T cells 17(Th17 cells) and the changes of the expression levels of its related cytokines in patients with type 1 diabetes mellitus(T1DM).Methods According to the inclusion criteria,20 patients with T1DM(T1DM group) and 21 patients with type 2 diabetes mellitus(T2DM group) hospitalized in Qinghai University Affiliated Hospital from January 2012 to October 2014 were selected,and 22 healthy people underwent physical examination in this hospital at the same period were enrolled as the control group.The proportion of Th17 cells in peripheral blood was detected by flow cytometry,the serum concentrations of interleukin 17A(IL-17A),IL-23,IL-6,IL-1β were measured by Enzyme-linked immunosorbentassay(ELISA).The general information 〔the body mass index(BMI),age,systolic blood pressure(SBP),diastolic blood pressure(DBP),globulin(GLB),white blood cell count(WBC),alanine aminotransferase(ALT),aspartate aminotransferase(AST),blood urea nitrogen(BUN),creatinine(Cr),total cholesterol(TC),triacylglycerol(TG),fasting plasma glucose(FBG)〕 of subjects in the three groups,clinical indicators of patients in T1DM group and T2DM group 〔the urine ketone body,fasting C-peptide(FCP),fasting insulin(FINS),glycosylated hemoglobin(HbA1c),insulin antibody(INS-Ab),glutamate acid decarboxylase antibody(GAD-Ab)，course of disease〕,the ratio of Th17 cells and levels of IL-17A,IL-23,IL-6 and IL-1β of subjects in the three groups were compared.The correlation between the ratio of Th17 cells and the levels of IL-17A,IL-23,IL-6,IL-1β of subjects in the three groups were analyzed.Multiple linear regression analysis was used to analyze the relationship of Th17 cells ratio,levels of IL-17A,IL-23,IL-6,and IL-1β with the general information and the clinical indicators.Results The BMI and FBG of patients in T2DM group were higher than those in control group,while SBP was lower than that in control group(P<0.05).The BMI,SBP,DBP,Cr,TC of patients in T1DM group were lower than those in T2DM group and control group,while FBG were higher than that in T2DM group and control group(P<0.05).The TG in T1DM group was lower than that in T2DM group(P<0.05).The HbA1c,INS-Ab,GAD-Ab in T1DM group were higher than those in T2DM group,while urine ketone body,FCP,FINS were lower than those in T2DM group(P<0.05).There was no significant difference in IL-6 level of subjects in the three groups(P0.05).The ratio of Th17 cells and IL-17A in T2DM group were higher than those in control group(P<0.05).The ratio of Th17 cells and levels of IL-17A,IL-23 and IL-1β in T1DM group were higher than those in T2DM and control group(P<0.05).The ratio of Th17 cells was positively correlated with the levels of IL-17A,IL-23 and IL-6 in T1DM group(r=0.813,0.912,and 0.862 respectively,P<0.001).The ratio of Th17 cells was positively correlated with the level of IL-17A in the T2DM group(r=0.637,P<0.05).The multiple linear regression analysis showed that Th17 cells ratio was linearly correlated with INS-Ab level(B=0.121,SE=0.085,t=2.862,P=0.007);there was a linear regression relationship between IL-17A level and INS-Ab level(B=0.315,SE=0.042,t=3.696,P=0.001);there was a linear regression relationship between IL-23 level and GAD-Ab level(B=20.115,SE=0.519,t=3.403,P=0.002);IL-6 level was linearly related to GAD-Ab level(B=1.451,SE=0.478,t=3.032,P=0.004);there was a linear regression relationship between IL-1β level and age(B=-0.037,SE=0.013,t=-2.878,P=0.006).Conclusion Compared with patients with T2DM and healthy people,the ratio of Th17 cells in peripheral blood,and the levels of IL-17A,IL-23 and IL-1β are increased in patients with T1DM,and the ratio of Th17 cells in peripheral blood are positively correlated with the levels of IL-17A,IL-23 and IL-6.

Diabetes mellitus,type 1;Th17 cells;Cytokines

青海大學(xué)附屬醫(yī)院中青年科研基金項(xiàng)目(ASRF-2010-18)

R 587.1

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2017.09.008

2016-10-23；

2017-01-06)

810001青海省西寧市，青海大學(xué)附屬醫(yī)院

*通信作者：趙成玉，副主任醫(yī)師；E-mail:xnzhcy@126.com