鄧高毅，彭 宇，王遠亮

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學食品科技學院/食品科學與生物技術湖南省重點實驗室，湖南 長沙 410128；

2.湖南中煙技術中心，湖南 長沙 410014）

降煙堿融合子及其親株大田降解煙葉中煙堿的研究

鄧高毅1，彭 宇2，王遠亮1

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學食品科技學院/食品科學與生物技術湖南省重點實驗室，湖南 長沙 410128；

2.湖南中煙技術中心，湖南 長沙 410014）

為降低上部煙葉中過高的煙堿含量，使用解淀粉芽孢桿菌T11、邊緣假單胞菌和融合子A2等3種不同菌液對煙株進行葉面噴灑和根灌處理，研究不同菌液、處理次數(shù)、處理方式對煙堿降解率、菌株駐留時間及上部煙葉品質(zhì)的影響。結果表明，根灌的處理方式不能達到降解煙葉中煙堿的目的，而使用菌液進行3次葉面噴灑后其降解煙堿的效果較好，解淀粉芽孢桿菌T11、邊緣假單胞菌和融合子A2的煙堿降解率分別為17.7%、18.5%、25%，融合子A2的降解煙堿的效果最佳；綠色熒光蛋白（GFP）示蹤試驗中，使用菌液噴灑葉面后，菌株隨著時間的推移會逐漸消亡；而處理后煙葉品質(zhì)各化學成分含量在適當范圍內(nèi)，上部煙葉品質(zhì)有得到改善趨勢。在菌液噴灑煙葉條件下，煙葉中的煙堿含量顯著降低，上部煙葉品質(zhì)得到改善。

煙堿；煙葉；解淀粉芽孢桿菌T11；邊緣假單胞菌；融合子；GFP

煙堿含量是決定煙葉品質(zhì)優(yōu)劣的主要指標之一。優(yōu)質(zhì)烤煙的煙堿含量一般為1.5%～3.5%，然而我國部分地區(qū)煙葉的煙堿含量偏高，特別是上部煙葉，有的煙堿平均含量在4%以上［1-2］，不僅嚴重影響了煙葉品質(zhì)，對吸煙者的神經(jīng)也會產(chǎn)生更強的刺激作用，進而危害身心健康。傳統(tǒng)煙草種植工藝采用改善種植條件、優(yōu)化打頂技術等手段，以降低煙葉中過高的煙堿含量［3-4］。此外，還可在煙葉加工過程中通過濾嘴過濾、煙葉切薄片等物理手段來降低煙堿含量，但效果并不顯著［5-7］。

國內(nèi)外學者已從煙草生長環(huán)境中分離出多種具有降解煙堿能力的微生物，其中以細菌數(shù)量最多、真菌數(shù)量次之［8-10］。劉飛等［11］從煙草根圍的土壤中分離得到302株具有降解煙堿能力的細菌，以芽孢桿菌屬降解煙堿的能力最強。蘇玉龍等［12］在使用巨大芽孢桿菌降解煙堿后發(fā)現(xiàn)，該菌能在發(fā)酵20 d后將發(fā)酵液中的煙堿完全降解。陳德鑫等［13］使用短小芽孢桿菌MK21處理煙絲發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵5 d后煙絲煙堿降解率為26.3%，煙絲的香氣成分也得到了改善。利用微生物降解煙堿，特別是使用微生物直接處理大田時期的煙葉，既可以降低煙葉中過高的煙堿含量，還可以改善卷煙香氣的成分比例，從而提高煙葉資源的利用率，具有較強的研究開發(fā)價值。因此，本試驗使用融合子A2及其親株解淀粉芽孢桿菌T11、邊緣假單胞菌來處理大田時期的上部煙葉，以期降低上部煙葉中過高的煙堿含量，以進一步改善煙葉品質(zhì)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

融合子A2、解淀粉芽孢桿菌T11及邊緣假單胞菌均導入了綠色熒光蛋白質(zhì)粒（GFP質(zhì)粒）并成功表達綠色熒光蛋白（GFP）。

固體煙堿培養(yǎng)基：0.5 mL微量溶液（0.4 g MnSO4·7H2O，0.2 g CaC12·2H2O，0.2 g FeSO4·7H2O，用0.1 mol/L鹽酸定容至100 mL），1 g煙堿，13.3 g K2HPO4·3H20，4 g KH2PO4，0.2 g MgSO4·7H2O，蒸餾水定容至1000 mL，添加2%瓊脂粉即為固體煙堿培養(yǎng)基。

1.2 試驗方法

1.2.1 菌株田間降解煙堿試驗 （1）菌株活化：將解淀粉芽孢桿菌、邊緣假單胞菌及融合子A2分別接種到100 mL液體營養(yǎng)培養(yǎng)基中，置于37℃、120 r/min恒溫搖床中培養(yǎng)12 h。（2）菌體擴培：將活化好的菌分別接入裝有2.5 L液體營養(yǎng)培養(yǎng)基的容器中。（3）菌液前處理：將菌液離心并收集菌體，使用時用生理鹽水制成懸浮液。（4）煙株分組：選擇364株無病害且煙株長勢相對一致的煙草為試驗煙株，平均分為7組進行試驗。第1～4組分別使用解淀粉芽孢桿菌、邊緣假單胞菌及融合子A2懸浮液對煙株進行葉面噴灑處理（50 mL/株），其中第1組處理1次，第2組間隔5 d處理2次，第3組間隔5 d處理3次，第4組連續(xù)4 d處理4次。第5組使用根灌的方式處理煙株1次（100 mL/株）。第6、7組為空白對照，其中第6組用等量生理鹽水噴灑煙葉（CK1），第7組使用等量生理鹽水根灌煙株（CK2）。試驗周期為25 d。（5）煙葉取樣：在處理煙株當天早上取樣，稱量煙葉鮮重后置于烘箱中殺青、烘干，將烘干后的煙葉充分研磨，備用。（6）煙堿含量測定：準確稱取0.1 g已烘干至恒重的煙葉粉末，置于150 mL三角瓶中，加入0.2 g活性炭粉末和25 mL 0.5 mol/L鹽酸，加熱使三角瓶中的液體沸騰后保持5 min，將沸騰后的液體轉移至250 mL容量瓶中定容，過濾，棄掉最初10 mL濾液，收集約30 mL濾液進行比色，分別于波長236、259、282 nm下測定濾液的吸光度值［14-15］。

游離煙堿（mg/g）=1.059×〔A259-0.5（A236+A282）〕×V×1 000／樣品重×（1-含水率）×34.3×1000。式中，1.059為校正系數(shù)，V為定容體積，34.3為煙堿的比吸收系數(shù)。

1.2.2 菌株在煙葉上駐留時間的示蹤試驗 分別采摘第1組中處理5、10、15、20、25 d的煙葉，對其進行微生物駐留時間研究。分別剪取使用解淀粉芽孢桿菌、邊緣假單胞菌及融合子A2菌液處理后的部分煙葉，將剪取后的煙葉置于含有50 mg/L氨芐青霉素的固體煙堿培養(yǎng)基中。全部培養(yǎng)基于30℃恒溫培養(yǎng)箱中靜置3～5 d后，將長出的菌落挑取至含50 mg/L氨芐青霉素的液體營養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)24 h后離心，生理鹽水洗滌菌體3次后重新懸浮于生理鹽水中，以生理鹽水為空白對照，使用多功能酶標儀測定懸浮菌液的相對綠色熒光強度。若其相對熒光強度與對照組的比值大于3則可以認為該菌株表達了GFP［16］，說明該菌株在對應的試驗時間內(nèi)還存活于煙葉中。

另取第1組中處理5、10、15、20、25 d的部分煙葉進行熒光鏡檢。煙葉頁面切片后使用熒光倒置顯微鏡觀察各批次煙葉切片中是否有綠色熒光物質(zhì)出現(xiàn)，觀測到綠色熒光點則說明該批次煙葉上有試驗菌株存在。

1.2.3 影響煙葉品質(zhì)的主要化學物質(zhì)測定 在處理25 d采摘第3組煙株的煙葉，稱量煙葉鮮重后，使用烘箱對煙葉進行殺青，烘干后封裝送檢，檢測煙葉中總糖、還原糖、總氮、鉀、氯以及煙堿、降煙堿、假木賊堿、新煙堿的含量，分析菌株處理煙葉后煙葉品質(zhì)的變化情況。

采用Origin8.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計，并作圖分析。

2 結果與分析

2.1 菌液對大田中煙葉煙堿含量的影響

從表1可以看出，在試驗周期內(nèi)未噴灑任何菌液的煙葉其煙堿含量基本維持在4.1%。噴灑1次融合子A2、邊緣假單胞菌、解淀粉芽孢桿菌T11菌液的處理，處理25 d其煙葉煙堿含量分別為3.68%、3.82%、3.88%，比未用菌液處理前分別降低了10.89%、6.83%、7.18%。其中邊緣假單胞菌菌液處理20 d與25 d的煙堿含量分別為3.83%和3.82%，煙堿含量下降趨勢極其不顯著。處理1次的組別在處理25 d前，融合子A2及解淀粉芽孢桿菌T11處理的煙堿含量不斷下降，說明它們在試驗周期內(nèi)一直存活于煙葉中。而邊緣假單胞菌處理20 d后并未起到降解煙堿的效果，說明煙葉上的邊緣假單胞菌從處理20 d開始逐漸消亡。

表1 大田煙葉中煙堿含量（%）變化情況

使用3種不同菌液間隔5 d處理2次煙葉后，邊緣假單胞菌和解淀粉芽孢桿菌T11菌液處理的煙葉其煙堿含量由原來的4.10%、4.17%分別降至3.56%、3.69%，煙堿降解率分別為13.17%、11.51%。融合子A2的煙堿降解率最高、達到18.31%，比親株邊緣假單胞菌和解淀粉芽孢桿菌T11的煙堿降解率分別高出5.14%和6.8%，3種菌液葉面噴灑處理2次的煙堿降解率差異極顯著。

烤煙上部煙葉的煙堿含量要求控制在3.5%以下，而過高的煙堿含量會降低煙葉品質(zhì)。大田時期的煙葉經(jīng)3種不同菌液間隔5 d處理3次后，邊緣假單胞菌及解淀粉芽孢桿菌T11處理組的煙堿降解率分別為18.57%、17.7%，而融合子A2處理組的煙堿含量由4.16%降到3.12%，其煙堿降解率比親株高出5%以上。間隔5 d共處理3次煙葉后，不管是融合子還是親株處理組，處理25 d煙葉的煙堿含量均低于3.5%，符合優(yōu)質(zhì)上部煙葉煙堿含量的要求。

使用菌液連續(xù)處理煙葉4次的組別中，未經(jīng)菌液處理時煙葉的煙堿含量為4.12%、4.15%、4.11%，處理25 d的煙堿含量為3.06%、3.32%、3.30%。3種不同菌液在25 d試驗周期內(nèi)的煙堿降解率分別為25.73%、20%、19.7%。融合子A2處理25.73%煙堿降解率與間隔5 d處理3次時的25%降解率相比，差異不顯著，說明融合子A2處理煙葉3次后已取得較好的降解煙堿效果。

使用3種菌液分別根灌處理煙株1次后，其中用融合子A2處理后各階段的煙葉煙堿含量分別為4.12%、4.10%、4.11%、4.10%、4.12%、4.12%，差異不顯著，即煙葉的煙堿含量在試驗周期內(nèi)基本不變。使用邊緣假單胞菌及解淀粉芽孢桿菌T11菌液根灌處理煙株后，其煙堿含量變化與融合子A2的趨勢一致，均沒有降低煙堿含量，說明根灌處理方式并不能有效降解煙堿。

2.2 菌株在煙葉上駐留時間分析

從表2可以看出，融合子A2及解淀粉芽孢桿菌T11在煙葉上的駐留時間至少為20 d，駐留25 d沒有檢測到菌株存在，說明噴灑融合子A2及解淀粉芽孢桿菌T11菌液后，其降解煙堿的有效時間長達20 d以上。而邊緣假單胞菌在煙葉上的駐留時間至少為15 d，因此邊緣假單胞菌在煙葉上降解煙堿的時間至少為15 d以上。

表2 多功能酶標儀檢測菌株的相對綠色熒光強度

從圖1～圖3（封二）可以看出，駐留5、10、15、20 d均檢測到融合子A2和解淀粉芽孢桿菌T11的存在，其熒光強度及亮點數(shù)目隨著時間的推移而減弱、減少。而邊緣假單胞菌在駐留20 d的煙葉樣品中并未檢測到綠色熒光點，即在駐留20 d的煙葉中沒有發(fā)現(xiàn)邊緣假單胞菌。熒光顯微鏡的檢測結果與酶標儀的檢測結果一致，相互印證了融合子A2、解淀粉芽孢桿菌T11至少可以在煙葉上駐留20 d，而邊緣假單胞菌則至少可以在煙葉上駐留15 d，15 d后邊緣假單胞菌開始消亡。

2.3 不同菌液處理對煙葉品質(zhì)的影響

煙葉化學成分的協(xié)調(diào)性是生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)卷煙的化學物質(zhì)基礎，不能偏高也不能偏低，而煙葉中的總糖、還原糖、總氮、煙堿、氯、鉀等成分含量是決定煙葉品質(zhì)優(yōu)劣的重要指標。由表3可知，各處理間煙葉的總糖、還原糖、總氮、鉀及氯含量均無顯著差異，無論是葉面噴灑邊緣假單胞菌、解淀粉芽孢桿菌T11還是融合子A2菌液的處理，其總糖、還原糖等5種化學物質(zhì)的含量與沒有噴灑菌液（噴灑蒸餾水）的空白對照相比沒有較明顯差異，而噴灑菌液的煙葉煙堿含量與空白對照有極顯著差異。從表3可以看出，與空白對照相比，噴灑菌液不會對煙葉的總糖、還原糖、總氮、氯及鉀含量產(chǎn)生較大影響，但降低了煙葉中過高的煙堿含量。

烤煙煙葉的煙氣醇和度主要由總糖和還原糖含量決定，如果總糖含量過低，在吸食時煙絲會給人一種比較刺激而嗆鼻的感覺。在吸食煙絲時，糖會分解發(fā)生酸性反應，與煙絲中生物堿發(fā)生中和反應，因此可以將糖堿比作為評價煙絲吸食時的勁頭與吃味的指標。國內(nèi)優(yōu)質(zhì)烤煙的糖堿比一般控制在8～10，當比值低于5時，吸食時煙絲會產(chǎn)生一種刺激而澀苦的味。由表3可知，菌液處理后的煙葉糖堿比在8.5左右，而對照組的糖堿比為6.41，因此3種菌液均提高了煙葉中的糖堿比，有效改善了煙葉品質(zhì)。

表3 菌液處理3次后上部煙葉化學成分含量

煙葉中過高的含氮化合物不僅會對煙絲品質(zhì)造成較大影響，對人體健康也會產(chǎn)生不良影響。氮堿比一定程度上可作為反映煙葉在成熟過程中氮轉化成煙堿氮的一個指標，一般烤煙的氮堿比要求控制在0.8～1.1，而本試驗中煙葉氮堿比在0.5左右，比優(yōu)質(zhì)煙葉的氮堿比略低。但菌液處理的煙葉氮堿比比對照組的氮堿比大，因此3種菌液均能有效改善煙葉的氮堿比。

適宜的氯含量不僅能促進煙草的營養(yǎng)生長，還可賦予煙葉彈性，提高其切絲率。優(yōu)質(zhì)煙葉中的氯含量在0.4%～0.7%，實驗組的煙葉中氯含量接近0.4%，氯含量有偏低的趨勢。一定的鉀含量對煙葉有助燃性，烤煙中常用氯鉀比來判定煙葉可燃性，優(yōu)質(zhì)烤煙的氯鉀比應控制在4～10，提高煙葉的氯鉀比有利于提高可燃性。各處理煙葉氯鉀比在4.5左右，因此噴灑菌液不會對煙葉的氯鉀比產(chǎn)生顯著影響。

煙草總生物堿是影響煙葉品質(zhì)的重要化學成分，包括煙堿、降煙堿、假木賊堿及新煙堿等生物堿，而煙堿是影響煙葉品質(zhì)最重要的化學物質(zhì)。國內(nèi)優(yōu)質(zhì)烤煙的煙堿要求一般控制在1.5%～3.5%，噴灑菌液后的煙葉煙堿含量達到這一要求，基本控制在3%左右。

降煙堿、假木賊堿及新煙草堿等生物堿占煙草生物堿的比例不到5%，但其對煙葉品質(zhì)有著不可忽視的作用。降煙堿是煙堿去甲基化形成的一種煙草生物堿，其直接影響卷煙的香吃味，降煙堿含量的升高會對煙葉香味品質(zhì)產(chǎn)生負面影響，即使增加量非常小，也會極大影響煙葉的香氣品質(zhì)。由表4可知，空白對照比噴灑了菌液的煙草降煙堿含量要高，因此使用菌液處理煙葉有助于增加香氣。假木賊堿對吸食煙絲的勁頭及刺激性有間接或直接影響，對照與菌液噴灑處理煙葉的假木賊堿含量無顯著差異，表明菌液噴灑并沒有對煙葉新木賊堿含量產(chǎn)生顯著影響。新煙草堿對煙絲評吸指標（如香氣質(zhì)、香氣量、余味等）的貢獻較大，但菌液處理組的新煙草堿含量與對照相比無顯著差異。

表4 菌液處理3次后上部煙葉生物堿含量（%）

3 結論與討論

本試驗中3種不同菌液均能降低煙葉中過高的煙堿含量，煙堿降解率隨著菌液噴灑次數(shù)的增加而增大。其中間隔處理3次后，解淀粉芽孢桿菌T11處理的煙堿含量由4.2%下降到3.45%、降解率為17.7%，而邊緣假單胞菌及融合子A2分別為18.57%、25%，可見，融合子A2降解煙堿的能力比親株強。國內(nèi)優(yōu)質(zhì)烤煙的煙堿含量一般要求控制在1.5%～3.5%之間，過高的煙堿含量不僅降低煙葉品質(zhì)，而且對人體健康會產(chǎn)生更大危害。本研究中，處理3～4次后的煙堿含量均降到3.5%以下，有效改善了煙葉品質(zhì)。Uchida等［17］從以煙堿為唯一碳源的固體培養(yǎng)基分離得到爭論產(chǎn)堿菌，但該菌菌液噴灑到煙葉后，在5 d內(nèi)煙葉煙堿含量并沒有出現(xiàn)下降趨勢，與之相比，解淀粉芽孢桿菌T11、邊緣假單胞菌及融合子A2能在大田時期有效降低煙葉中煙堿含量。國內(nèi)外學者分離得到多種具有降解煙堿能力的微生物，但很少有將這些微生物應用于大田降解煙堿的報道，Tashiro等［18］從被煙堿污染的土壤和廢水中分離得到54種細菌，這些降解煙堿的細菌能在14 d內(nèi)將濃度為1 mg/mL煙堿完全降解，但該菌并未被進一步應用于降解大田時期煙葉的煙堿。菌株在煙葉上駐留時間的試驗表明，噴灑菌液后，菌株并不會一直存活于煙葉表面，而是隨著時間的推移慢慢消亡。解淀粉芽孢桿菌T11、邊緣假單胞菌及融合子A2在處理25 d后均未被檢出，因此煙葉中的煙堿含量會在解淀粉芽孢桿菌T11、邊緣假單胞菌及融合子A2消亡后而趨于穩(wěn)定。

雖然解淀粉芽孢桿菌T11、邊緣假單胞菌及融合子A2能有效降低煙堿含量，但是還應考慮

其對煙葉品質(zhì)的影響。與空白對照相比，解淀粉芽孢桿菌T11、邊緣假單胞菌及融合子A2處理組的總糖、還原糖、總氮、氯、鉀等化學成分含量沒有出現(xiàn)顯著變化，但其中的糖堿比比對照高?？梢?，菌液不僅有效降低了煙堿含量，還改善了煙葉其他品質(zhì)。國內(nèi)許多地區(qū)的烤煙煙堿含量普遍偏高，如湖南湘西部分地區(qū)的烤煙煙堿含量竟達6%［19］，過高的煙堿含量直接影響了煙葉的再加工及利用，且過高煙堿量對吸煙人士腦神經(jīng)的刺激性更強，產(chǎn)生的副作用更大，此外，廢棄煙葉的煙堿會造成煙堿污染，破壞生態(tài)環(huán)境。因此，使用菌液降解煙堿既可以提高煙葉的加工價值，還可降低對吸煙人士、生態(tài)環(huán)境的危害，這是解淀粉芽孢桿菌T11、邊緣假單胞菌及融合子A2應用價值的優(yōu)勢所在。

［1］ 包勤，張艷玲，王愛國，等. 2002—2013年間我國烤煙主要化學成分變化趨勢及原因分析［J］. 煙草科技，2015，48（7）：14-19.

［2］ 張黎明，張明發(fā)，田峰，等. 湘西州烤煙煙堿含量的區(qū)域特征及其與煙葉評吸質(zhì)量的關系［J］. 煙草科技，2014，12：57-61.

［3］ Chen C，Li X，Yang J，et al. Isolation of nicotinedegrading bacterium Pseudomonas sp. Nic22，and its potential application in tobacco processing［J］. International Biodeterioration & Biodegradation，2008，62（3）：226-231.

［4］ 許曉敬，張小全，侯冰清，等. 生態(tài)，品種和栽培措施及其互作對烤煙主要化學成分含量的影響［J］. 中國農(nóng)學通報，2015，31（13）：62-66.

［5］ 邵惠芳，焦桂珍，劉金霞，等. 煙堿含量的影響因素及其調(diào)控技術［J］. 中國農(nóng)學通報，2007，23（8）：84-88.

［6］ 王林，李健忠，許儀，等. 打頂后噴施不同生物制劑對烤煙品質(zhì)的影響［J］. 中國農(nóng)業(yè)科技導報，2015（3）：136-143.

［7］ 龍文，陳風雷，代曉燕. 抑芽劑和生長調(diào)節(jié)劑配合施用對烤煙煙葉鉀素和煙堿含量的影響［J］. 中國煙草學報，2010，16（4）：51.

［8］ Wada E. Microbial degradation of the tobacco alkaloids，and some related compounds［J］. Archives of Biochemistry and Biophysics，1957，72（1）：145-162.

［9］ 曾奧，譚周進，張華玲. 煙草有害物質(zhì)的微生物降解技術研究進展［J］. 中國微生態(tài)學雜志，2012，24（4）：370-372.

［10］ Liu J，Ma G，Chen T，et al. Nicotine-degrading microorganisms and their potential applications.［J］. Applied Microbiology and Biotechnology，2015，99（9）：3775-3785.

［11］ 劉飛，夏振遠，白江蘭，等. 土壤中降解煙堿細菌多樣性研究［J］. 中國煙草學報，2012，18（2）：58-64.

［12］ 蘇玉龍，王倩，張成省，等. 降解烤煙秸稈和煙堿菌株的篩選及其產(chǎn)酶特性［J］. 微生物學報，2015，55（12）：1543-1550.

［13］ 陳德鑫，許家來，馬志遠，等. 一株新的具有高效降低煙堿含量的短小芽孢桿菌MK21的分離篩選及作用研究［J］. 中國煙草學報，2013（1）：60-64.

［14］ 劉惠民，穆懷靜，王芳，等. 煙草中煙堿的測定［J］. 煙草科技，1995，2（11）：21-22.

［15］ 蔣光輝，張峻松. 分析煙草主流煙氣中的游離態(tài)煙堿測定［J］. 低碳世界，2015（25）：272-273.

［16］ 杜新超，賀正權，林霄，等. 基于熒光強度比值法可用于現(xiàn)場測量的低成本聚合物光纖溫度傳感器（英文）［J］. 光子學報，2015，44（4）：116-122.

［17］ Uchida S，Maeda S，Kisaki T. Conversion of nicotine into nornicotine and N-methylmyosmine by fungi［J］. Agricultural and Biological Chemistry，1983，47（9）：1949-1953.

［18］ Tashiro Y，Yuji K，Yonemura C. Pure isolation of nicotine-degrading microbes［J］. Kyushu Kyoritsu Daigaku Kenkyu Hokoku，1996，20：147-155.

［19］ 王育軍. 影響上部煙葉煙堿含量的主要農(nóng)藝措施［J］. 中國農(nóng)業(yè)文摘-農(nóng)業(yè)工程，2016，28（4）：54-61.

（責任編輯 白雪娜）

Study on degrading nicotine in tobacco leaves by nicotine-degrading fusant and its parent strains

DENG Gao-yi1，PENG Yu2，WANG Yuan-liang1
（1.Hunan Provincial Key Laboratory of Food Science and Biotechnology/ College of Food Science and Technology，Hunan Agricultural University，Changsha 410128，China；2.Technology Center of China Tobacco Hunan Industrial Co. Ltd.，Changsha 410014，China）

In order to reduce the nicotine content in upper leaves of tobacco，two different treatment ways of foliar spraying and root irrigation were designed with Bacillus amyloliquefaciens T11，Pseudomonas marginalis and fusant A2. The effects of different bacterial fluid，treatment times and treatment methods on nicotine-degrading efficiency，strain residence time and the quality of tobacco upper leaves were studied. The results showed that root irrigation could not achieve the purpose of degrading nicotine in the tobacco upper leaves. And the degradation of nicotine was better than root irrigation after 3 times of foliar spraying. The degradation rates of nicotine by B. amyloliquefaciens T11，P. marginalis and fusant A2 were 17.7%，18.5% and 25%，respectively. The effect of fusant A2 on nicotine degradation was the best. In the GFP tracer experiment，the strains would gradually extinct after spraying bacteria liquid. After treatment，the quality of tobacco upper leaves was in the appropriate range，and there was an improved tendency to the quality of tobacco upper leaves. Therefore，under foliar spraying conditions，the nicotine content in tobacco upper leaves significantly decreased，and the quality of tobacco upper leaves was improved.

nicotine；tobacco leaves；Bacillus amyloliquefaciens T11；Pseudomonas marginalis；fusant；GFP

S182

A

1004-874X（2017）01-0023-07

2016-11-15

湖南中煙工業(yè)有限責任公司項目“基于生物技術降低煙堿的關鍵技術研究”（KY2012YC0001）

鄧高毅（1989-），男，在讀碩士生，E-mail：610715556@qq.com

王遠亮（1976-），男，博士，教授，E-mail：408083310@qq.com

鄧高毅，彭宇，王遠亮. 降煙堿融合子及其親株大田降解煙葉中煙堿的研究［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學，2017，44（1）：23-29.