倪曉婷， 吳耀東， 鄭文斌,3， 馬劍鋼,3， 張曉軒,3， 孫曉林， 朱興全， 周東輝

(1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所 ， 甘肅蘭州730046 ； 2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院 ，甘肅蘭州730070 ； 3.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院 ， 吉林長春130118)

寧夏奶牛球蟲病流行病學(xué)調(diào)查與蟲種鑒定

倪曉婷1,2， 吳耀東1， 鄭文斌1,3， 馬劍鋼1,3， 張曉軒1,3， 孫曉林2， 朱興全1， 周東輝1

(1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所 ， 甘肅蘭州730046 ； 2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院 ，甘肅蘭州730070 ； 3.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院 ， 吉林長春130118)

奶牛球蟲病是由艾美耳屬和等孢屬球蟲寄生于腸道引起的一種常見疾病。該病主要發(fā)生于犢牛，呈世界性分布，丹麥的一次調(diào)查結(jié)果顯示，艾美耳球蟲在奶牛中的感染率高達(dá)96.2%，其中犢牛的感染率為60.9%[1]，給養(yǎng)牛業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。近年來，我國各地奶牛球蟲感染情況十分普遍[2-4]，報(bào)道的感染率范圍為12.3%～75.0%。但寧夏至今尚未有奶牛球蟲感染情況的報(bào)道。有鑒于此，我們調(diào)查了寧夏3個(gè)規(guī)?；膛龅那蛳x感染情況，旨在為防制該病提供科學(xué)依據(jù)。報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 奶牛糞便樣品 2015年5月從寧夏自治區(qū)3個(gè)規(guī)?；膛?NX1～NX3)采集1月齡到1歲左右的荷斯坦奶牛糞便樣品共426份，分別裝入干凈塑料自封袋帶回實(shí)驗(yàn)室，放入4 ℃冰箱中待檢。

1.2 檢測方法 采用飽和鹽水漂浮法檢測奶牛糞便中的球蟲卵囊。每份糞樣混勻后取2 g放入60 mL燒杯中，加入50 mL飽和食鹽水；輕輕攪勻靜置15～20 min后，取其漂浮液直接涂片鏡檢，觀察球蟲卵囊[5]。1.3 卵囊計(jì)數(shù)方法 取球蟲陽性糞樣2 g，放入60 mL燒杯中，加入50 mL水，60目銅篩過濾，濾液經(jīng)3 000 r/min離心10 min，棄上清；將沉淀移入燒杯，先加水5 mL，攪拌混勻后加飽和鹽水至60 mL，混勻后吸取糞液滴注于改良麥克馬斯特計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室內(nèi)，靜置5 min后，顯微鏡下計(jì)數(shù)每克糞便卵囊數(shù)(OPG)(OPG=A×100，A為改良麥?zhǔn)嫌洈?shù)板下數(shù)到的卵囊數(shù))[6-8]。1.4 卵囊的收集與培養(yǎng) 取球蟲陽性糞便2 g，加清水60 mL攪拌均勻，用60目篩網(wǎng)過濾，將濾液置于離心機(jī)中3 000 r/min離心10 min，棄上清；取沉淀物用飽和鹽水漂浮，靜置20 min，3 000 r/min離心5 min，棄上清；加10倍量的清水，3 000 r/min離心10 min，棄上清；取沉淀物放入裝有2.5%重鉻酸鉀溶液培養(yǎng)皿中，置于28 ℃恒溫箱中培養(yǎng)，至95%以上卵囊完全孢子化，置4 ℃保存[6-8]。

1.5 卵囊形態(tài)觀察與蟲種鑒定 取孢子化后的卵囊液制片后，在40×顯微鏡下觀察孢子化卵囊的結(jié)構(gòu)。根據(jù)卵囊、孢子囊和子孢子的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、大小等情況，參考文獻(xiàn)[5-10]進(jìn)行蟲種鑒定。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同奶牛場的球蟲感染率與感染強(qiáng)度 3個(gè)奶牛場均存在球蟲感染，感染率分別為40.85%、28.00%和13.58%。在檢出的117頭陽性奶牛中，感染強(qiáng)度最大OPG值為85 800，各奶牛場平均OPG值為3 496，其中NX2牧場為最高，平均OPG值為4 794(表1)。

表1 不同奶牛場的球蟲感染率與感染強(qiáng)度

2.2 球蟲卵囊鑒定 通過對孢子化球蟲卵囊進(jìn)行種類鑒定，此次調(diào)查共查出12種艾美耳屬球蟲和1種等孢屬球蟲，艾美耳屬球蟲分別是牛艾美耳球蟲(Eimeriabovis)、奧博艾美耳球蟲(Eimeriaauburnensis)、邱氏艾美耳球蟲(Eimeriazuernii)、阿拉巴艾美耳球蟲(Eimeriaalabamensis)、亞球形艾美耳球蟲(Eimeriasubspherica)、橢圓艾美耳球蟲(Eimeriaellipsoidalli)、加拿大艾美耳球蟲(Eimeriacanadensis)、圓柱狀艾美耳球蟲(Eimeriacylindrica)、懷俄明艾美耳球蟲(Eimeriawyomingensis)、巴西艾美耳球蟲(Eimeriabrasiliensis)、廣西艾美耳球蟲(Eimeriakwangsiensis)、庫斯提艾美耳球蟲(Eimeriakosti)，但調(diào)查中發(fā)現(xiàn)的1種等孢屬球蟲卵囊，檢出率低，尚未定種。

2.3 各種球蟲在奶牛場的感染率 本次調(diào)查鑒定的12種艾美耳屬球蟲和1種等孢屬球蟲在奶牛場的感染率見表2。

2.4 各奶牛場不同月齡段奶牛球蟲感染率及優(yōu)勢種 由表3可知，3個(gè)規(guī)?；翀瞿膛?歲以內(nèi)平均感染率最高的年齡段為7～12月齡，平均感染率為36.91%(55/149)；其次是1～3月齡，平均感染率為21.67%(36/83)；最低的是4～6月齡，平均感染率為17.99%(18/48)。

表2 各種球蟲在整個(gè)奶牛場的感染率

表3 各奶牛場不同月齡段奶牛球蟲感染率 / %

1～3月齡奶牛主要感染圓柱狀艾美耳球蟲、奧博艾美耳球蟲和橢圓艾美耳球蟲；4～6月齡奶牛主要感染圓柱狀艾美耳球蟲、牛艾美耳球蟲和奧博艾美耳球蟲；7～12月齡奶牛主要感染圓柱狀艾美耳球蟲、邱氏艾美耳球蟲和廣西艾美耳球蟲；大于12月齡奶牛主要感染圓柱狀艾美耳球蟲、廣西艾美耳球蟲和橢圓艾美耳球蟲。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，圓柱狀艾美耳球蟲為寧夏奶牛感染的最優(yōu)勢種。

3 討論

本研究調(diào)查發(fā)現(xiàn)，寧夏各奶牛場均存在不同程度的球蟲感染，平均感染率為27.46%，與鄭州(29.60%)[10]、新疆奎屯(34.14%)[11]、河南(37.70%)[12]等地的感染情況相近。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，大于12月齡奶牛的感染率最高(61.11%)，其次是7～12月齡奶牛(36.91%)，1～3月齡奶牛(21.67%)；4～6月齡奶牛感染率最低(17.99%)，與新疆奎屯奶牛的感染情況相似。但石冬梅等[13]發(fā)現(xiàn)球蟲病主要發(fā)生于犢牛，尤其是1～3月齡犢牛；出現(xiàn)這種差異的原因可能與采樣數(shù)量、采樣季節(jié)和奶牛場管理方式等有關(guān)，本次大于12月齡奶牛僅有11份樣品。

全世界報(bào)道的牛球蟲有23種，但公認(rèn)的有15種[13]，目前中國報(bào)道的牛球蟲確定種的有13種艾美耳屬球蟲，另有2個(gè)等孢屬未定種[10]。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，寧夏銀川地區(qū)奶牛感染艾美耳球蟲12種。其中1～3月齡奶牛主要感染圓柱狀艾美耳球蟲、奧博艾美耳球蟲和橢圓艾美耳球蟲；4～6月齡奶牛主要感染圓柱狀艾美耳球蟲、牛艾美耳球蟲和奧博艾美耳球蟲；7～12月齡奶牛主要感染圓柱狀艾美耳球蟲、邱氏艾美耳球蟲和廣西艾美耳球蟲；大于12月齡奶牛主要感染圓柱狀艾美耳球蟲、廣西艾美耳球蟲和橢圓艾美耳球蟲?？傮w來講，圓柱狀艾美耳球蟲、邱氏艾美耳球蟲和橢圓艾美耳球蟲的感染率較高，為奶牛球蟲感染的優(yōu)勢種，感染率最高的是圓柱狀艾美耳球蟲(43%)這與國外相關(guān)研究結(jié)果存在一定差異[14、25]。

此次調(diào)查發(fā)現(xiàn)了奶?；旌细腥厩蛳x的情況，在成功孵化出的107份陽性樣品中，只感染一種球蟲的有59份，發(fā)生混合感染的有48份，其中同時(shí)感染了兩種球蟲的有28份，同時(shí)感染了3種球蟲的有20份。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)1種等孢屬球蟲，但由于卵囊數(shù)極少無法確切定種。張龍現(xiàn)等[10]對鄭州地區(qū)奶牛球蟲感染情況調(diào)查時(shí)發(fā)現(xiàn)2種等孢球蟲，并報(bào)道牛體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的等孢球蟲是一種假性寄生拉氏等孢球蟲，這種球蟲主要寄生于一些野鳥，如麻雀體內(nèi)，牛糞便中會發(fā)現(xiàn)，極可能是麻雀等野鳥糞中的卵囊污染了牛飼料或飲水被牛吞人而隨牛糞排出的，但都無法肯定，有關(guān)奶牛是否真能感染等孢球蟲有待進(jìn)行進(jìn)一步研究。這是寧夏自治區(qū)奶牛球蟲感染情況的首次報(bào)道，本次研究可見，寧夏地區(qū)奶牛感染球蟲普遍存在，應(yīng)引起有關(guān)部門重視。

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2016-02-26

國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2012BAD12B07)

倪曉婷(1990-)，女，碩士，研究方向?yàn)閯游锛纳x學(xué)，E-mail：wwwnxt.126@163.com

周東輝,E-mail：zhoudonghui@caas.cn

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B 文章編號：0529-6005(2017)02-0044-03