王小春 葉劍 童鴻斌?

多元統(tǒng)計(jì)分析性激素水平與乳腺疾病的關(guān)系

王小春 葉劍 童鴻斌?

目的 運(yùn)用多元統(tǒng)計(jì)方法分析血清性激素六項(xiàng)在乳腺疾病中的差異性。方法 收集2016年1月至3月乳腺疾病患者月經(jīng)期第3天的血清樣本，其中乳腺惡性腫瘤病例11例，乳房良性腫塊病例36例；同時(shí)采集該院健康體檢志愿者月經(jīng)期第3天的樣本30例。對(duì)上述樣本進(jìn)行性激素六項(xiàng)分析，并運(yùn)用偏最小二乘法（PLS-DA）進(jìn)行多元統(tǒng)計(jì)分析，運(yùn)用t-test檢驗(yàn)兩兩分析3類人群激素水平的差異。結(jié)果 經(jīng)過(guò)多元統(tǒng)計(jì)分析，性激素六項(xiàng)可以將乳腺良性腫塊患者從其他人群中區(qū)分。對(duì)于惡性腫瘤患者及健康人，則需要進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，進(jìn)一步對(duì)PRL、PROG及FSH/LH、E2/TEST比值進(jìn)行多元統(tǒng)計(jì)分析。在惡性腫瘤患者中，PRL及FSH/LH與其呈正相關(guān)，而PROG及E2/TEST則與其呈負(fù)相關(guān)。其中，F(xiàn)SH/LH、E2/TEST比值差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05和P＜0.001）。結(jié)論 性激素六項(xiàng)檢測(cè)對(duì)乳腺癌的篩查及乳腺疾病的區(qū)分有一定的參考價(jià)值。

多元統(tǒng)計(jì)分析 性激素六項(xiàng) 乳腺惡性腫瘤 乳房良性腫塊 偏最小二乘法

調(diào)查發(fā)現(xiàn)0.57%女性患有乳腺纖維腺瘤［1］。乳房良性腫塊占乳腺門(mén)診就診患者＞60%［2-3］。調(diào)查顯示，10%左右的乳腺良性腫塊患者誤診為乳腺癌［2］。目前，乳腺癌篩查主要通過(guò)影像學(xué)的診斷，然而研究發(fā)現(xiàn)，近50%的調(diào)查對(duì)象會(huì)接受一次假陽(yáng)性召回，7%～9%接受≥1次良性活檢［4］。乳腺癌的早期發(fā)現(xiàn)及早期診斷，能顯著降低患者的發(fā)病率和病死率。研究表明，激素在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中具有重要角色。目前，臨床檢測(cè)的性激素六項(xiàng)主要是垂體-性腺軸激素，包括促卵泡激素（FSH）、促黃體激素（LH）、泌乳素（PRL）、睪酮（TEST）、孕酮（PROG）和雌二醇（E2）。本資料中，基于多元統(tǒng)計(jì)分析手段，對(duì)臨床中的乳腺疾病監(jiān)測(cè)結(jié)果進(jìn)行深入分析，以期發(fā)現(xiàn)性激素六項(xiàng)在乳腺癌篩查中的作用。

1 臨床資料

1.1 一般資料 2016年1月至3月在本院就診的乳腺疾病患者，其中11例乳房惡性腫瘤患者［平均年齡（41.36±3.97）］及36例乳房腫塊患者［平均年齡（32.05±5.31）歲］。同時(shí)采集30例來(lái)自本院體檢志愿者［平均年齡（31.46±5.56）歲］的健康樣本。血液采集時(shí)間均為以上所選對(duì)象月經(jīng)期的第3天。參與分析的數(shù)據(jù)，排除糖尿病、多囊卵巢綜合征等引起激素變化的疾病，同時(shí)肝功能正常，無(wú)內(nèi)分泌疾病，月經(jīng)正常，無(wú)人流史、引產(chǎn)史、吸煙史、酗酒史。采集的空腹血清樣本存放于-80℃冰箱中集中檢測(cè)。

1.2 儀器和試劑 雅培公司i2000SR全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)；水平離心機(jī)（BECKMAN COULTER公司）；檢測(cè)用的專用試劑盒購(gòu)自雅培公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 多元統(tǒng)計(jì)分析采用SIMCA-P 13.0（Umetrics，Umea，Sweden）軟件，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析（PCA）、偏最小二乘法-判別分析（PLS-DA）。采用Excel2013進(jìn)行t檢驗(yàn)，考察激素在正常對(duì)照組、乳腺惡性腫瘤患者及乳腺腫塊（含乳腺良性腫瘤患者）組間差異顯著性。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺疾病患者及正常人血清激素差異分析 將性激素六項(xiàng)結(jié)果運(yùn)用測(cè)定的激素濃度組建數(shù)據(jù)矩陣，將數(shù)據(jù)進(jìn)行歸一處理后輸入SIMCA-P軟件，UV scaling條件下，PCA得分圖和載荷圖見(jiàn)圖1。PCA得分圖上主要體現(xiàn)了激素水平的變化影響，雖然乳房腫塊患者與其他人群有一定的分離趨勢(shì)，但是三類人群的區(qū)分并不明顯。進(jìn)一步采用PLS-DA單獨(dú)處理正常和乳腺癌患者數(shù)據(jù)，主成分?jǐn)?shù)為2，R2Y為0.318，Q2為0.203，交叉驗(yàn)證R2和Q2截距分別為0.0436和-0.112。上述參數(shù)表明模型未出現(xiàn)過(guò)擬合，結(jié)果是可信的，其得分圖和載荷圖見(jiàn)圖2。結(jié)果亦顯示乳房良性腫塊患者與乳房惡性腫瘤患者、健康人分離比較明顯，而乳房惡性腫瘤患者與健康人區(qū)分不明顯。載荷圖（圖2B）顯示，乳房良性腫塊患者與FSH呈負(fù)相關(guān)，與其他5項(xiàng)激素呈正相關(guān)。

圖1 乳腺惡性腫瘤（●）、乳腺腫塊（★）及正常人（▲）血清中激素PCA-X得分圖

2.2 乳腺惡性腫瘤患者及健康人血清激素分析 由于乳腺惡性腫瘤患者與健康人不能順利區(qū)分，而據(jù)報(bào)道，F(xiàn)SH/LH是評(píng)價(jià)卵巢功能的指標(biāo)，同時(shí)，由于乳腺癌可以運(yùn)用芳香化酶治療，而該酶在雄激素轉(zhuǎn)化為雌激素過(guò)程中發(fā)揮了重要作用，因此E2/TEST的比值也非常具有參考價(jià)值。進(jìn)一步采用PLS-DA單獨(dú)處理這兩類人病例數(shù)據(jù)，主成分?jǐn)?shù)為2，R2Y為0.422，Q2為0.267，交叉驗(yàn)證R2和Q2截距分別為0.0574和-0.59。上述參數(shù)表明模型未出現(xiàn)過(guò)擬合，結(jié)果是可信的，其得分圖和載荷圖見(jiàn)圖3。得分圖顯示，這兩類人得到較好的區(qū)分。從載荷圖上可以看出，在乳房惡性腫瘤患者中，E2/TEST及TEST水平與乳房惡性腫瘤患者呈負(fù)相關(guān)，而FSH/LH和PRL則呈正相關(guān)。進(jìn)一步對(duì)兩類人的相關(guān)激素比值進(jìn)行t檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)FSH/LH（P＜0.05）、E2/ TEST（P＜0.001）在兩類人中差異顯著。兩者的比較見(jiàn)圖4。

圖2 乳腺惡性腫瘤（●）、乳腺良性腫塊（★）及正常人（▲）血清中激素PLS-DA得分圖（A）和載荷圖（B）

圖3 乳房腫塊（●）患者和健康人（▲）激素水平PLS-DA分析得分圖（A）和載荷圖（B）

圖4 乳房惡性腫瘤患者與健康人激素水平（Mean±SE）比較，?P＜0.05；???P＜0.001

3 討論

本資料對(duì)臨床中廣泛應(yīng)用的性激素六項(xiàng)在乳腺疾病中的應(yīng)用做了深入的分析。結(jié)果顯示，運(yùn)用多元統(tǒng)計(jì)分析方法，性激素六項(xiàng)能夠?qū)⑷榉苛夹阅[塊與惡性腫瘤及正常人加以區(qū)分。FSH與乳房良性腫塊患者呈負(fù)相關(guān)，含量相比健康人有所降低。而在區(qū)分乳房惡性腫瘤與正常人時(shí)，需對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，進(jìn)一步運(yùn)用FSH/LH、E2/TEST、PRL、PROG進(jìn)行多元統(tǒng)計(jì)分析，乳房惡性腫瘤患者可以與正常人進(jìn)行區(qū)分。乳房惡性腫瘤患者與FSH/LH和PRL呈正相關(guān)，與E2/TEST及PROG呈負(fù)相關(guān)。在兩類人中，F(xiàn)SH/LH和E2/TEST差異性顯著。

Meta統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，良性乳腺疾病有較高的發(fā)展為惡性腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)，說(shuō)明良性乳腺疾病還需要采取額外的篩查及預(yù)防手段［5］。本資料中，當(dāng)對(duì)三組數(shù)據(jù)進(jìn)行PLS-DA分析時(shí)，乳房良性腫瘤與乳腺癌患者雖然得到了較好區(qū)分，但還是有一些良性腫瘤的病例落在惡性腫瘤較為集中區(qū)域，這些樣本可能還需要進(jìn)一步的篩查來(lái)確定是否為假陰性。

FSH/LH比值與卵巢功能有關(guān)，該比值是預(yù)測(cè)卵巢反應(yīng)性的指標(biāo)。FSH和LH的分泌受促性腺激素釋放激素的作用而產(chǎn)生，主要作用于卵巢。在圍絕經(jīng)期，F(xiàn)SH及LH的分泌量有代償性的增高，但是兩者的增高不成比例。在乳腺癌患者中，雌激素水平顯著升高。卵巢內(nèi)雌激素對(duì)卵巢具有負(fù)反饋抑制作用，從而導(dǎo)致FSH及LH分泌量的變化。本資料中，乳腺惡性腫瘤患者與正常人的FSH/LH比值差異顯著（P＜0.05）。芳香化酶在雄激素轉(zhuǎn)化為雌激素的過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。由于芳香化酶在乳腺癌組織中表達(dá)具有差異性，而目前使用芳香化酶抑制劑為乳腺癌治療的方法之一。因此，考察E2/TEST比值，對(duì)區(qū)分乳腺癌患者及正常人具有一定的意義。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該比值可以較好的區(qū)分乳腺惡性腫瘤患者及正常人，且在兩類人中的差異顯著（P＜0.001）。

本研究通過(guò)對(duì)性激素六項(xiàng)的分析，發(fā)現(xiàn)了該項(xiàng)檢測(cè)對(duì)乳腺惡性腫瘤、乳腺良性腫塊及正常人有一定的區(qū)分作用，對(duì)乳腺癌的篩查及乳腺疾病的區(qū)分有一定的參考價(jià)值。

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Objectives To analyze the difference ofsix steroid sex hormones in serum of breast diseasesviamultivariate statistical analysis. Methods Breast diseases patients at clinc were involved into the research group from January to March 2016，consisting of 11 breast cancer cases and 36 breast benign lumps cases. And 30 healthy cases were also include in this study. The six steroid sex hormoneslevels were measured，and analyzed with PLS-DA and t-test to discover the difference in three groups. Results Evaluation of six steroid sex hormones in serum can separate the patients of benign breast lumps from other people via multivariate statistical analysis. To separate the patients of breast cancer from healthy people，the data should be processed，and the data of PRL，PROG，F(xiàn)SH/LH，E2/TEST were analyzed. FSH/LH，E2/TEST in patients of breast cancer were significantly different from the ratio in healthy people（P＜0.05 and P＜0.001，respectively）. Conclusions Evaluation of six steroid sex hormones can be a referencein screening patients of breast cancerand the separation of breast diseases.

Multivariate statistical analysis Six steroid sex hormones Breast cancer Breast benign lumps PLS-DA

310006 浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院

*通信作者