宋藝君，郭濤，王昌利*，孫靜，張偉

(1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，陜西 咸陽(yáng) 712046;2.解放軍第451醫(yī)院，陜西 西安 710054)

質(zhì)量工藝

總評(píng)“歸一值”優(yōu)選陜產(chǎn)延胡索產(chǎn)地加工工藝

宋藝君1，郭濤2，王昌利1*，孫靜1，張偉1

(1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，陜西 咸陽(yáng) 712046;2.解放軍第451醫(yī)院，陜西 西安 710054)

目的:優(yōu)選陜產(chǎn)延胡索產(chǎn)地加工工藝。方法:對(duì)新鮮延胡索大小分檔，進(jìn)行蒸后切片、煮后切片、微波后切片、直接切片及傳統(tǒng)法等產(chǎn)地加工處理，測(cè)定不同處理方法對(duì)浸出物含量、有效成分含量的影響，并優(yōu)選最佳產(chǎn)地加工工藝。結(jié)果:微波后切片法總生物堿、延胡索乙素及原阿片堿含量均優(yōu)于煮后切片法、蒸后切片法、直接切片法和傳統(tǒng)加工法，而水溶性和醇溶性浸出物含量無(wú)明顯差異。結(jié)論:研究為陜產(chǎn)延胡索初加工技術(shù)提供科學(xué)依據(jù)，為其產(chǎn)地加工炮制一體化建立基礎(chǔ)。

延胡索乙素;原阿片堿;產(chǎn)地加工;延胡索;微波法

延胡索為罌粟科植物延胡索(Corydalis yanhusuo W.T.Wang)的干燥塊莖，產(chǎn)于浙江、陜西、安徽等地，近年來(lái)，陜西發(fā)展成為延胡索的主產(chǎn)區(qū)，已占到全國(guó)總產(chǎn)量的70%［1］。由于延胡索藥材自身的性質(zhì)，經(jīng)采挖后，易發(fā)霉變質(zhì)，因此藥材在炮制前應(yīng)先進(jìn)行產(chǎn)地加工。文獻(xiàn)多報(bào)道有關(guān)浙產(chǎn)延胡索的產(chǎn)地加工研究［2-5］，而陜產(chǎn)延胡索產(chǎn)地加工的系統(tǒng)研究筆者未見(jiàn)報(bào)道。且陜產(chǎn)延胡索產(chǎn)地加工無(wú)統(tǒng)一的操作標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致加工后飲片質(zhì)量差異較大。因而本實(shí)驗(yàn)通過(guò)浸出物、總生物堿、延胡索乙素和原阿片堿等不同考察指標(biāo)，比較了煮后切片法和直接切片法、傳統(tǒng)法、蒸后切片法及微波后切片法等產(chǎn)地加工方法的差異，優(yōu)選出最佳的產(chǎn)地加工方法，為延胡索產(chǎn)地加工炮制一體化建立基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

U3000高效液相分析儀(賽默飛世爾科技公司);島津UV-2550紫外可見(jiàn)分光光度儀(島津公司); ST-803中藥材切片機(jī)(瑞安市賽特機(jī)電有限公司)。

延胡索乙素對(duì)照品(批號(hào)110726-201516)、原阿片堿對(duì)照品(批號(hào)110853-201404)均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究所;乙腈、甲醇為色譜純;其余試劑為分析純。

延胡索新鮮藥材采自陜西城固縣，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院胡本祥教授鑒定為罌粟科植物延胡索(Corydalis yanhusuo W.T.Wang)的新鮮塊莖。

2 方法與結(jié)果

2.1 不同產(chǎn)地加工方法延胡索飲片的制備

將延胡索鮮品除去須根、泥沙雜質(zhì)、洗凈后攤開(kāi)瀝干水分，大小分檔，分別按表1加工方法加工處理。

表1 延胡索不同產(chǎn)地加工方法

2.2 浸出物測(cè)定

據(jù)2015版《中國(guó)藥典》四部2201(浸出物測(cè)定熱浸法)測(cè)定稀乙醇浸出物、水浸出物。

2.3 總生物堿含量測(cè)定［6］

2.3.1 對(duì)照品溶液制備

精密稱取延胡索乙素對(duì)照品適量，用95%乙醇定容于50 mL容量瓶，得到48 μg/mL的延胡索對(duì)照品溶液。

2.3.2 供試品溶液制備

精密稱取延胡索粉末約0.5 g，分別置于250 mL圓底燒瓶中，加水(100 mL，80 mL)加熱回流2次，每次保持微沸30 min。紗布過(guò)濾，合并濾液，離心，減壓濃縮至50 mL，加氨水調(diào)至pH值10以上，移入250 mL分液漏斗中，用氯仿萃取2次每次50 mL，合并萃取液，加50 mL蒸餾水洗滌，棄去水層，合并氯仿液，回收氯仿至小體積，轉(zhuǎn)入10 mL容量瓶中，用氯仿補(bǔ)充至刻度，備用。

2.3.3 最大吸收波長(zhǎng)的確定

取上述所得樣品1 mL于蒸發(fā)皿中水浴蒸干，用95%乙醇溶解定容至10 mL容量瓶中，備用。以無(wú)水乙醇溶液作為空白溶液，分別把上述對(duì)照品溶液和稀釋后的樣品溶液在紫外分光光度計(jì)進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，結(jié)果對(duì)照品溶液在280 nm處有最大吸收，樣品溶液在273 nm處有最大吸收。最終選擇檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm，并在280 nm處測(cè)量樣品的吸光度。

2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密吸取對(duì)照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，置于5 ml容量瓶中，加95%乙醇定容至刻度，從而得到濃度為9.6，19.2，28.8，38.4，48.0 μg/mL的系列對(duì)照品溶液，以95%乙醇作為空白對(duì)照，在280 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)(C)，吸光度為縱坐標(biāo)(A)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=0.019 9X+ 0.039 3，r=0.999 2，表明對(duì)照品濃度在9.6～48.0 μg/mL與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.3.5 樣品含量測(cè)定

取樣品粉末 0.5 g，各 3份，精密稱定，按照“2.3.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備供試品溶液，在280 nm測(cè)定吸收值，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.4 延胡索乙素含量測(cè)定［7］

2.4.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

Hypurity C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 um)，以甲醇 -0.1%磷酸溶液(三乙胺調(diào) pH值至6.0) (55∶45)為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量為10 μL。色譜圖見(jiàn)圖1。理論塔板數(shù)按延胡索乙素峰計(jì)算不低于3000，與其他峰的分離度均大于1.5。

2.4.2 對(duì)照品溶液制備

取經(jīng)105℃干燥至恒重的延胡索乙素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成濃度為123.6 μg/mL的對(duì)照品溶液。

圖1 對(duì)照品及延胡索飲片測(cè)定延胡索乙素HPLC圖譜

2.4.3 供試品溶液制備

取樣品粉末(過(guò)3號(hào)篩)約0.5 g，精密稱定，置平底燒瓶中，精密加入濃氨試液-甲醇(1∶20)混合溶液50 mL，稱定重量，冷浸1 h后加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用濃氨試液-甲醇(1∶20)混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液25 mL，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4.4 線性關(guān)系考察

取“2.4.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣2、4、6、8、10、20 μL，以峰面積(Y)對(duì)進(jìn)樣量(X，μg)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=7.335 2X+0.454 4，r=0.999 9 (n=6)，結(jié)果表明，延胡索乙素在進(jìn)樣量0.247 2～ 2.472 0 μg范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。

2.4.5 樣品含量測(cè)定

取樣品粉末各3份，每份0.5 g，精密稱定，按照“2.4.3”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按照“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.5 原阿片堿含量測(cè)定［8］

2.5.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

Hypurity C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-三乙胺醋酸溶液(每1 000 mL水中加入冰醋酸30 mL，三乙胺8 mL)(18∶82)為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為289 nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量為10 μL。色譜圖見(jiàn)圖2。理論塔板數(shù)按原阿片堿峰計(jì)算不低于3 000，與其他峰的分離度均大于1.5。

圖2 對(duì)照品及延胡索飲片測(cè)定原阿片堿HPLC圖譜

2.5.2 對(duì)照品溶液制備

取經(jīng)105℃干燥至恒重的原阿片堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成濃度為219.2 μg/mL的對(duì)照品溶液。

2.5.3 供試品溶液制備

取樣品粉末(過(guò)3號(hào)篩)約0.5 g，精密稱定，置平底燒瓶中，精密加入濃氨試液-甲醇(1∶20)混合溶液50 mL，稱定重量，冷浸1 h后加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用濃氨試液-甲醇(1∶20)混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液25 mL，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.5.4 線性關(guān)系考察

取“2.5.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液1 mL，置10 ml的容量瓶中，加甲醇稀釋至10 mL，同法再稀釋10倍，得到對(duì)照品溶液濃度為2.19 μg/mL，分別進(jìn)樣10、20、30、40、50 μL，以峰面積(Y)對(duì)進(jìn)樣量(X，μg)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=230.39X+0.009 6，r=0.999 4(n=5)，結(jié)果表明，原阿片堿在進(jìn)樣量0.021 9～0.109 5 μg范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。

2.5.5 樣品含量測(cè)定

取樣品粉末各3份，每份0.5 g，精密稱定，按照“2.5.3”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按照2.5.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.6 產(chǎn)地加工工藝選擇

用Hassan的方法對(duì)浸出物等5個(gè)指標(biāo)進(jìn)行歸一化處理［7］，所有指標(biāo)均為取值越大越好，計(jì)算公式為di=(Yi-Ymin)/(Ymax-Ymin)，Ymin為指標(biāo)中最小值，Ymax為指標(biāo)中最大值?？傇u(píng)歸一值OD=(d1+d2+d3 +…dk)/k(k為指標(biāo)數(shù))，見(jiàn)表2。

不同初加工方法結(jié)果表明:微波法＞煮法＞直接切片法＞傳統(tǒng)法＞蒸法，且從有效成分含量來(lái)看，微波法明顯優(yōu)于其他方法，而浸出物含量無(wú)明顯差異，綜合考慮，最終選擇微波法作為延胡索的產(chǎn)地加工方法。

表2 延胡索產(chǎn)地加工工藝實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

3 討論

延胡索的產(chǎn)地加工方法有直接切片法、蒸后切片法、煮后切片法和傳統(tǒng)切片法，其中煮法和蒸法都是常用的產(chǎn)地加工方法。近年來(lái)，有文獻(xiàn)報(bào)道用微波后切片法對(duì)延胡索進(jìn)行產(chǎn)地加工［9］，本文經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，用微波法進(jìn)行產(chǎn)地初加工，可最大程度地減少總生物堿、延胡索乙素以及原阿片堿等主要成分的損失，可作為一種陜產(chǎn)延胡索產(chǎn)地加工方法推廣使用。

對(duì)于延胡索產(chǎn)地加工工藝的篩選，本試驗(yàn)對(duì)浸出物、總生物堿、延胡索乙素以及原阿片堿含量等多個(gè)指標(biāo)采用“歸一化”法評(píng)價(jià)，對(duì)各考察指標(biāo)進(jìn)行“歸一化”處理，以O(shè)D值為綜合指標(biāo)對(duì)延胡索產(chǎn)地加工工藝進(jìn)行優(yōu)化，優(yōu)選其最佳的產(chǎn)地加工工藝。

本試驗(yàn)含量測(cè)定時(shí)，先嘗試用一種色譜條件同時(shí)測(cè)定延胡索乙素和原阿片堿，通過(guò)流動(dòng)相甲醇-水系統(tǒng)等度洗脫［7］和乙腈-水系統(tǒng)梯度洗脫［10］，結(jié)果原阿片堿色譜峰分離度較小，且延胡索乙素色譜峰對(duì)稱性差，均無(wú)法達(dá)到含量測(cè)定要求，因而分別用不同的色譜條件進(jìn)行了含量測(cè)定。

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R28

A

1002-2406(2017)02-0027-04

陜西中醫(yī)藥大學(xué)科研基金項(xiàng)目(No.2015PY12);陜西省教育廳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室科研計(jì)劃項(xiàng)目(No.14JS023)

宋藝君(1982-)，女，講師，博士，主要研究方向:中藥飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化和炮制技術(shù)研究。

王昌利*(1958-)，男，教授，主要研究方向:中藥新藥。

2016-07-19

修回日期:2016-08-10