張季，李楊，楊思原，王茂華，李析胤

（云南省腫瘤醫(yī)院/昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院 1. 乳腺外科 2.內(nèi)一科，云南 昆明 650118）

乳腺癌的發(fā)生發(fā)展，能夠增加患者的病死率，導(dǎo)致患者遠(yuǎn)期生存預(yù)后的評估。流行病學(xué)研究顯示，現(xiàn)階段臨床上乳腺癌的發(fā)生率可達(dá)234～345/10萬人左右，在合并有相關(guān)乳腺疾病家族史的人群中，其發(fā)病率更高[1-2]。在探討乳腺癌的發(fā)病機(jī)制過程中，可以發(fā)現(xiàn)的是生物學(xué)因子的改變，或者基因相關(guān)水平的改變，是促進(jìn)乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞或者小葉上皮細(xì)胞惡性病變的主要原因。低親和力受體p75能夠在促進(jìn)糖蛋白配體的激活，加劇癌細(xì)胞對于基底膜組織的侵襲等方面發(fā)揮作用，促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展；神經(jīng)生長因子（nerve growth factor，NGF）不僅能夠在促進(jìn)神經(jīng)纖維的形成方面具有生理學(xué)意義，同時近年來發(fā)現(xiàn)NGF的異常表達(dá)能夠增加癌細(xì)胞異常增殖的風(fēng)險，導(dǎo)致癌細(xì)胞的侵襲或者腫瘤轉(zhuǎn)移風(fēng)險的增加[3-4]。為了進(jìn)一步探討NGF或者p75在乳腺癌發(fā)生過程中的作用，本次研究選取2016年2月—2017年5月在我院接受治療的乳腺癌患者為研究對象，探討兩者的異常表達(dá)及其與患者腫瘤標(biāo)志物的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年2月—2017年5月在我院接受治療的乳腺癌患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴ 年齡≥18周歲；⑵ 經(jīng)病理檢查確診為乳腺癌者；⑶ 無其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病者。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴ 臨床資料不全者；⑵ 合并其他部位腫瘤者。根據(jù)納入排除標(biāo)準(zhǔn)共納入病例數(shù)100例，年齡35～62歲，平均（50.34±4.25）歲，其中高分化者62例，中低分化者38例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者25例。乳腺增生組納入排除標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥18周歲；病理診斷為乳腺良性腫瘤者，共納入100例，年齡32～60歲，平均（50.30±4.12）歲。兩組患者的年齡比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），具有可比性。本項(xiàng)研究經(jīng)醫(yī)院委員會評審?fù)ㄟ^，且所有患者均知情同意。

1.2 檢測方法

所有患者均于入院24 h內(nèi)采集空腹靜脈血約5 mL并分作2份，1份自然抗凝后以3 000r/min離心10 min，取上清液采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血清中NGF、p75、CEA、CA15-3和CA125水平，檢測試劑盒購自北京中杉金橋生物有限公司，具體檢測步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作；另1份置于枸櫞酸鈉抗凝管內(nèi)，加入TGF-β1、IL-6和TNF-γ檢測試劑盒后，利用膠體金法檢測TGF-β1、IL-6和TNF-γ水平，試劑盒購自上海奧普生物醫(yī)藥有限公司。

1.3 評價指標(biāo)

觀察兩組研究對象血清NGF、低親和力受體p75、細(xì)胞因子（TGF-β1、IL-6和TNF-γ）和腫瘤標(biāo)志物（CEA、CA15-3和CA125）水平的差異，分析乳腺癌患者血清NGF、低親和力受體p75表達(dá)水平與細(xì)胞因子和腫瘤標(biāo)志物水平的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

數(shù)據(jù)錄入后，采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)和計量資料分別采用例和均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。兩組患者血清NGF、低親和力受體p75、細(xì)胞因子和腫瘤標(biāo)志物水平的比較采用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計分析，采用Pearson相關(guān)分析法分析乳腺癌患者血清NGF、低親和力受體p75表達(dá)水平與細(xì)胞因子和腫瘤標(biāo)志物水平的相關(guān)性。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者血清NGF、低親和力受體p75、細(xì)胞因子及腫瘤標(biāo)志物水平

乳腺癌組患者血清NGF、低親和力受體p75水平均明顯高于乳腺增生組，TGF-β1水平明顯低于乳腺增生組，CEA、CA15-3和CA125水平明顯高于乳腺增生組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.001）（表1）。

表1 兩組患者血清NGF、低親和力受體p75、細(xì)胞因子及腫瘤標(biāo)志物水平比較（n=100，±s）

表1 兩組患者血清NGF、低親和力受體p75、細(xì)胞因子及腫瘤標(biāo)志物水平比較（n=100，±s）

CA125（U/mL）乳腺增生組 38.15±5.21 12.02±2.15 658.25±14.03 16.75±2.21 35.12±4.22 2.13±0.86 8.79±1.45 15.63±2.46乳腺癌組 658.12±46.27 90.48±3.42 302.14±11.62 24.18±3.04 44.11±5.97 14.12±6.85 40.82±8.45 58.24±8.25 t -133.148 -194.224 195.480 -19.769 -12.297 -17.367 -37.359 -49.495 P ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001組別 NGF（pg/mL）p75（pg/mL）TGF-β1（ng/L）IL-6（mg/L）TNF-γ（ng/L）CEA（U/mL）CA15-3（U/mL）

2.2 乳腺癌患者血清NGF、p75水平與細(xì)胞因子和腫瘤標(biāo)志物水平的相關(guān)分析

相關(guān)性分析結(jié)果顯示，乳腺癌患者血清NGF、p75水平與TGF-β1水平呈明顯負(fù)相關(guān)（均P＜0.05），與IL-6、TNF-γ、CEA、CA15-3和CA125水平呈明顯正相關(guān)（均P＜0.05）（表2）。

表2 乳腺癌患者血清NGF、p75水平與細(xì)胞因子和腫瘤標(biāo)志物水平的相關(guān)性

3 討 論

乳腺癌的發(fā)病原因較為復(fù)雜，但越來越多的研究顯示，分子生物學(xué)或者基因水平的表達(dá)異常，是促進(jìn)患者乳腺癌等惡性腫瘤病情的進(jìn)展的核心因素[5-6]。相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)異常，能夠在影響到癌細(xì)胞DNA核轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)，影響到癌細(xì)胞增殖分化的障礙，加劇癌細(xì)胞的變形能力[2,7]。通過對于相關(guān)分子生物學(xué)相關(guān)指標(biāo)的變化研究，具有下列幾個方面的現(xiàn)實(shí)意義：⑴ 能夠?yàn)榕R床上乳腺癌的早期血清學(xué)篩查提供新的研究方向；⑵ 能夠?yàn)槿橄侔┑木C合性生物學(xué)治療提供理論基礎(chǔ)。

NGF蛋白是蛋白激酶家族成員，其可以通過對于患者體內(nèi)癌細(xì)胞相關(guān)信號通路的激活，促進(jìn)腫瘤相關(guān)蛋白信號通路PI3K/Akt、p53、p16等的激活，加劇多種信號通路的交聯(lián)式激活作用，促進(jìn)患者體內(nèi)上皮細(xì)胞交界性病變或者惡性病變的發(fā)生[8]。NGF蛋白同時能夠在影響到乳腺癌膜表面蛋白的糖蛋白配體的活性，降低癌細(xì)胞間的粘附能力，為惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移提供條件[9-10]；p73的表達(dá)能夠顯著促進(jìn)乳腺癌上皮細(xì)胞核的異常轉(zhuǎn)錄，增加癌細(xì)胞的持續(xù)性增殖或者異常分化的風(fēng)險，特別是p73在結(jié)合細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄調(diào)控基因的同時，抑制了細(xì)胞核內(nèi)凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，抑制程序性凋亡的發(fā)生[11]。TGF-β是體內(nèi)趨化因子調(diào)控的重要因素，其對于趨化因子或者補(bǔ)體成分的調(diào)控作用，能夠避免過度的局部炎癥因子的趨化作用導(dǎo)致的患者腫瘤微環(huán)境的改變，抑制腫瘤細(xì)胞的持續(xù)性增殖風(fēng)險。

在本次研究中可以發(fā)現(xiàn)的是，乳腺癌患者血清中的相關(guān)指標(biāo)的異常表達(dá)較為明顯，其中NGF、p75的表達(dá)濃度可明顯上升，NGF、p75表達(dá)濃度的上升，可以在下列幾個方面影響到乳腺癌患者的臨床預(yù)后：⑴ NGF的高表達(dá)，促進(jìn)了乳腺癌細(xì)胞對于臨床正常導(dǎo)管上皮或者間質(zhì)組織成分的浸潤，促進(jìn)了癌細(xì)胞的擴(kuò)散風(fēng)險；⑵ p75的表達(dá)增加，能夠在促進(jìn)腫瘤相關(guān)信號通路通路如NOTCH通路的激活，加劇癌細(xì)胞分化調(diào)控障礙。研究[12-13]在探討了117例樣本量的乳腺癌圍手術(shù)期血清學(xué)指標(biāo)的變化，發(fā)現(xiàn)NGF的表達(dá)濃度可平均上升26%～36%左右，同時患者的治療敏感性越差、生存指標(biāo)越低，相關(guān)血清學(xué)指標(biāo)的表達(dá)濃度越高。TGF-β1是調(diào)控體內(nèi)轉(zhuǎn)化生長因子的重要成員，其對于患者體內(nèi)的炎癥因子的調(diào)控作用，能夠避免過度的炎癥因子損傷導(dǎo)致的腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散，本研究中TGF-β1的表達(dá)明顯下降，失去了其對于患者體內(nèi)病灶組織癌細(xì)胞的病理性進(jìn)展過程的調(diào)控作用，同時TGF-β1的表達(dá)下降失去了其對于腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)察作用。IL-6和TNF-γ等炎癥因子指標(biāo)的高表達(dá)，主要考慮與腫瘤患者體內(nèi)的高度激活的瀑布式炎癥反應(yīng)有關(guān)，而腫瘤糖蛋白表面抗原如CEA、CA15-3和CA125等的表達(dá)上升，則主要考慮與腫瘤細(xì)胞凋亡或者增殖等過程中釋放的細(xì)胞膜配體成分進(jìn)入循環(huán)血中有關(guān)。關(guān)于NGF、p75水平的表達(dá)相關(guān)性分析可見，兩者的異常表達(dá)與患者的腫瘤生物學(xué)分子或者細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)具有密切的關(guān)系，這一方面提示了NGF、p75與乳腺癌的病情進(jìn)展具有密切的關(guān)系，同時也提示NGF、p75的表達(dá)可能通過影響到體內(nèi)炎癥反應(yīng)，進(jìn)而影響到乳腺癌的病情進(jìn)展。

本研究的創(chuàng)新性在于探討了NGF、p75的異常表達(dá)及其與患者體內(nèi)炎癥因子或者腫瘤相關(guān)糖蛋白配體的關(guān)系。綜上所述，乳腺癌患者血清NGF、低親和力受體p75表達(dá)水平較高，且與患者的細(xì)胞因子和腫瘤標(biāo)志物水平密切相關(guān)，可作為臨床監(jiān)測的重要指標(biāo)。

[1]Tomellini E, Touil Y, Lagadec C, et al. Nerve growth factor and proNGF simultaneously promote symmetric self-renewal,quiescence, and epithelial to mesenchymal transition to enlarge the breast cancer stem cell compartment[J]. Stem Cells, 2015,33(2):342–353. doi: 10.1002/stem.1849.

[2]Pundavela J, Roselli S, Faulkner S, et al. Nerve fi bers in fi ltrate the tumor microenvironment and are associated with nerve growth factor production and lymph node invasion in breast cancer[J]. Mol Oncol, 2015, 9(8):1626–1635. doi: 10.1016/j.molonc.2015.05.001.

[3]章菊, 葉書來, 張昌龍, 等. 神經(jīng)生長因子及其受體p75在乳腺癌中的表達(dá)[J]. 蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2014, 39(12):1604–1606.Zhang J, Ye SL, Zhang CL, et al. The expression of nerve growth factor and its receptor p75 in breast cancer[J]. Journal of Bengbu Medical College, 2014, 39(12):1604–1606.

[4]詹傳華, 汪宏良, 李艷, 等. 乳腺癌患者血漿神經(jīng)生長因子和神經(jīng)生長因子受體檢測的臨床意義[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床, 2016,13(4):485–486. doi:10.3969/j.issn.1672–9455.2016.04.019.Zhan CH, Wang HL, Li Y, et al. The detection of plasma nerve growth factor and nerve growth factor receptor in breast cancer patients and its significance[J]. Laboratory Medicine and Clinic,2016, 13(4):485–486. doi:10.3969/j.issn.1672–9455.2016.04.019.

[5]喬偉強(qiáng), 潘淋淋, 寇長貴, 等. 局部晚期乳腺癌新輔助化療病理完全緩解與預(yù)后相關(guān)性的Meta分析[J]. 中國老年學(xué)雜志, 2016,36(16):3982–3985. doi:10.3969/j.issn.1005–9202.2016.16.052.Qiao WQ, Pan LL, Kou CG, et al. Meta-analysis of correlation between pathologic complete remission of locally advanced breast cancer after neoadjuvant chemotherapy and prognosis[J]. Chinese Journal of Gerontology, 2016, 36(16):3982–3985. doi:10.3969/j.issn.1005–9202.2016.16.052.

[6]姜建平, 韋長元, 楊偉萍, 等. 青年女性乳腺癌病理學(xué)特點(diǎn)及預(yù)后因素分析[J]. 中華腫瘤防治雜志, 2017, 24(4):263–267.Jiang JP, Wei CY, Yang WP, et al. Pathologic characteristics and prognosis factors of breast cancer patients under 35 years of age[J]. Chinese Journal of Cancer Prevention and Treatment, 2017,24(4):263–267.

[7]Tsang JY, Wong KH, Lai MW, et al. Nerve growth factor receptor(NGFR): a potential marker for specific molecular subtypes of breast cancer [J]. J Clin Pathol, 2013, 66(4):291–296. doi: 10.1136/jclinpath-2012–201027.

[8]Zhang J. Progress in the Research on the Relationship between Infection with Human Papillomavirus and Tumorigenesis[J].Infection International(Electronic Edition), 2016, 5(4):99–104.

[9]李福喜, 邵文鳳, 唐芮, 等. 埃茲蛋白477位酪氨酸的磷酸化在神經(jīng)生長因子前體促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞侵襲中起關(guān)鍵作用[J]. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 2016, 36(7):898–903. doi:10.3969/j.issn.1673–4254.2016.07.04.Li FX, Shao WF, Tang R, et al. Phosphorylation of ezrin Tyr477 is critical in invasion of breast cancer cells stimulated by precursor of nerve growth factor[J]. Journal of Southern Medical University,2016, 36(7):898–903. doi:10.3969/j.issn.1673–4254.2016.07.04.

[10]劉宇, 王君, 鄒黎黎. 神經(jīng)生長因子及其受體作為乳腺惡性腫瘤分子標(biāo)記物的可行性[J]. 海南醫(yī)學(xué), 2017, 28(3):443–445. doi:10.3969/j.issn.1003–6350.2017.03.033.Liu Y, Wang J, Zou LL. Feasibility analysis of nerve growth factor and its receptor as molecular markers of breast malignant tumor[J].Hainan Medical Journal, 2017, 28(3):443–445. doi:10.3969/j.issn.1003–6350.2017.03.033.

[11]鐘晶敏, 曾亮. 乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)機(jī)制[J]. 國際腫瘤學(xué)雜志, 2015,42(2):141–143. doi:10.3760/cma.j.issn.1673–422X.2015.02.016.Zhong JM, Zeng L. Metastatic mechanisms of breast cancer[J].Journal of International Oncology, 2015, 42(2):141–143.doi:10.3760/cma.j.issn.1673–422X.2015.02.016.

[12]由婷婷, 李欣. 乳腺癌轉(zhuǎn)移分子機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 遼寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2016, 37(2):107–110.You TT, Li X. Research Advancement on Molecular Mechanism of Breast Cancer Metastasis[J]. Journal of Liaoning Medical University, 2016, 37(2):107–110.

[13]倪婕, 劉高翔, 廖紅. 神經(jīng)營養(yǎng)因子低親和力受體p75NTR的表達(dá)及新藥開發(fā)[J]. 中國藥科大學(xué)學(xué)報, 2015, 46(6):751–756.doi:10.11665/j.issn.1000–5048.20150620.Ni J, Liu GX, Liao H. Expression of p75 neurotrophin receptor and its role in drug development[J]. Journal of China Pharmaceutical University, 2015, 46(6):751–756. doi:10.11665/j.issn.1000–5048.20150620.