葛宇++曹劍秋++鐘利文++王甲水++林興娥++臧小平++馬蔚紅

摘 要 收集不同油梨和羊奶果資源，對(duì)油梨和羊奶果果肉粗提物進(jìn)行α-葡萄糖苷酶的體外抑制活性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明：16份油梨果肉對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制活性較弱，而9份羊奶果果肉對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制活性較強(qiáng)，其中羊奶果6號(hào)對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制活性最強(qiáng)，達(dá)到99.84%，僅次于阿卡波糖。

關(guān)鍵詞 油梨；羊奶果；α-葡萄糖苷酶；體外抑制

中圖分類號(hào) S667.9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2017.02.004

In vitro Inhibitory Effects of Crude Extracts from the Pulp of

Persea americana and Elaeagnus conferta on α-glucosidase

GE Yu1） CAO Jianqiu2） ZHONG Liwen2） WANG Jiashui1）

LIN Xinge1） ZANG Xiaoping1） MA Weihong1）

（1 Haikou Experimental Station， CATAS， Hainan， Haikou， 570102 China；

2 College of Horticulture and Landscape Architecture， Hainan University，

Hainan， Haikou， 570228 China）

Abstract Persea americana and Elaeagnus conferta germplasm resources were collected and their fruits were extracted and used to determine their inhibition of α-glucosidase in vitro. The results showed that the crude pulp extracts from 16 accessions of P. americana had a weak inhibitory activities against α-glucosidase while the crude pulp extracts from the 9 accessions of E. conferta had a high inhibitory activities against α-glucosidase. The crude pulp extract from Accession 6 of E. conferta was the highest in inhibition of α-glucosidase， with an inhibition rate of upto 99.84%， only next to that of acarbose.

Keywords Persea americana ； Elaeagnus conferta ； α-glucosidase ； Inhibition in vitro

油梨（Persea americana Mill.），又稱鱷梨、牛油果、酪梨等，屬于樟科（Lauraceae）油梨屬植物（Persea），起源于中美洲、墨西哥熱帶濕潤(rùn)地區(qū)及海拔較高的山地森林或熱帶高原，是著名的熱帶、亞熱帶果樹(shù)，同時(shí)也是木本油料樹(shù)種之一[1]。油梨在海南、廣東、廣西、貴州、云南、臺(tái)灣等地均有栽培[2]。羊奶果為胡頹子科胡頹子屬蜜花胡頹子（Elaeagnus conferta Roxb.）的成熟果實(shí)。羊奶果屬多年生常綠攀緣植物，主要分布于越南、馬來(lái)西亞、印度和中國(guó)南部，成熟果實(shí)為鮮紅色至紫紅色，可作為鮮果生食也可加工成果脯、果汁、果酒等[3]。

油梨富含脂肪酸、膳食纖維、蛋白質(zhì)等多種營(yíng)養(yǎng)及活性成分，其中每百克鮮重中多酚含量為31.9 mg，總黃酮為26.4 mg[1，4]。前人研究發(fā)現(xiàn)，油梨果實(shí)中的多酚、黃酮類物質(zhì)在降血糖方面有一定促進(jìn)作用，可以延緩葡萄糖擴(kuò)散、抑制α-葡萄糖苷酶活性，控制糖尿病患者的血糖水平[5-7]。羊奶果成熟果實(shí)含有大量的番茄紅素、β-胡蘿卜素和多酚類物質(zhì)，其中每百克干重中番茄紅含量高達(dá)105 mg，β-胡蘿卜素含量為23.2 mg，每百克鮮重中單寧為45～60 mg，其番茄紅素含量是番茄果實(shí)的7倍，而其β-胡蘿卜素含量是目前已報(bào)道植物中含量最高的物種之一[8-9]。番茄紅素、β-胡蘿卜素和單寧可以提高抗氧化酶活力，從而達(dá)到降血糖作用[10-11]。另一方面，油梨和羊奶果均屬于水果中糖成分含量較低水果，適合糖尿病病人食用[1，8，12]。阿卡波糖片是一種新型口服降糖藥，在腸道內(nèi)可降低多糖及蔗糖分解成葡萄糖，使糖的吸收相應(yīng)減緩，具有降低飯后血糖的作用，但長(zhǎng)期服用會(huì)產(chǎn)生副作用，常有胃腸脹氣和腸鳴音，偶有腹瀉，極少腹痛[13-14]。因此，開(kāi)發(fā)或篩選無(wú)毒副作用的降血糖類藥物或食品很有必要。

本實(shí)驗(yàn)選取16份油梨及9份羊奶果種質(zhì)資源，分析其果實(shí)對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制活性，旨在為今后定向選育油梨和羊奶果新品種及深入研究利用其營(yíng)養(yǎng)及功能性成分提供一定理論基礎(chǔ)和參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

油梨實(shí)驗(yàn)材料于2016年7～8月間采自海南省儋州市中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹(shù)基地、海南省白沙縣大嶺農(nóng)場(chǎng)、廣西南寧市廣西職業(yè)技術(shù)學(xué)院果樹(shù)基地及云南德宏州瑞麗市郊，共計(jì)16份（表1）。羊奶果實(shí)驗(yàn)材料于2015年3月末采自云南德宏州經(jīng)濟(jì)作物技術(shù)推廣站種植基地、云南德宏熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所種植基地及云南德宏州瑞麗市郊，共計(jì)9份（表1）。

1.2 方法

1.2.1 油梨和羊奶果果肉粗提物的制備

將油梨和羊奶果果肉置于60℃烘箱中烘24 h，烘干后的果肉被打碎成干粉。準(zhǔn)確稱取油梨和羊奶果果肉干粉10 g，加入20 mL蒸餾水，放入超聲清洗儀器超聲提取20 min，4 000 r/min離心10 min，取中層清液。再將殘?jiān)貜?fù)提取2次，合并上清液，定容至100 mL，其濃度為100 mg/mL，4℃冰箱保存，待測(cè)。

1.2.2 主要試劑的配制

α-葡萄糖苷酶磷酸緩沖液（10 mmol/L，pH=6.8），甲液（10 mmol/L K2HPO4）：準(zhǔn)確稱取2.28 g K2HPO4·3H2O溶于1 000 mL蒸餾水；乙液（10 mmol/L KH2PO4）：稱取 1.36 g KH2PO4，溶于1 000 mL蒸餾水。分別取甲液51 mL和乙液49 mL，混合，4℃常溫保存?zhèn)溆谩?/p>

α-葡萄糖苷酶酶液（20 mg/mL，酶活力2 U/mL）：取α-葡萄糖苷酶375 U溶于750 mL磷酸緩沖液（冷凍備用）。

PNPG溶液（2.5 mmol/L）：準(zhǔn)確稱取7.53 mg PNPG溶于100 mL磷酸緩沖液（10 mmol/L）中。

Na2CO3溶液（0.2 mmol/L）：2.12 g碳酸鈉溶于100 mL蒸餾水中。

阿卡波糖溶液（20 mg/mL）：將阿卡波糖標(biāo)準(zhǔn)品配制成濃度為20 mg/mL的阿卡波糖溶液。

1.2.3 抑制α-葡萄糖苷酶活性試驗(yàn)

油梨和羊奶果果肉粗提物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制實(shí)驗(yàn)參照Oboh等和Uysal等[7，15]的方法加以改進(jìn)。加入50 μL 10 mmol/L磷酸緩沖液，10 μL α-葡萄糖苷酶溶液和50 μL 20 mg/mL樣品溶液，混勻后置于96孔板中，利用酶標(biāo)儀，將混合溶液在37℃下反應(yīng)15 min。然后加入100 μL 2.5 mmol/L葡萄糖苷溶液（PNPG），在37℃下繼續(xù)反應(yīng)10 min。加入100 μL 0.2 mmol/L碳酸鈉溶液終止反應(yīng)，于405 nm處測(cè)吸光值。實(shí)驗(yàn)選用阿卡波糖標(biāo)準(zhǔn)品為油梨和羊奶果果肉粗提物陽(yáng)性對(duì)照。

酶活性抑制率/%=[1-（A1-A2）/（A3-A4）] ×100。

式中，A1：加入α-葡萄糖苷酶與樣品溶液的吸光值；A2：不加α-葡萄糖苷酶但添加樣品溶液的吸光值；A3：加α-葡萄糖苷酶但不加樣品溶液的吸光值；A4：不加α-葡萄糖苷酶也不加樣品溶液的吸光值。

2 結(jié)果與分析

不同油梨和羊奶果果肉粗提物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制活性見(jiàn)表2。

由表2可知，16份油梨果肉提取物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制活性在0.01%～10.22%，抑制活性最高的為RLW-3?？傮w來(lái)看，油梨果肉抑制α-葡萄糖苷酶活性效果不明顯。9份羊奶果果肉提取物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制活性在14.97%～99.84%，超過(guò)50%抑制率的有5號(hào)、6號(hào)、9號(hào)和13號(hào)，最高的為6號(hào)?？傮w來(lái)看，羊奶果果肉抑制α-葡萄糖苷酶活性效果較為明顯。

綜合分析，羊奶果6號(hào)果肉提取物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制活性較強(qiáng)，接近阿卡波糖100%抑制活性效果。

3 結(jié)論與討論

Gallagher等[5]對(duì)比了10種具有治療糖尿病功效的植物水提物對(duì)葡萄糖擴(kuò)散的抑制作用，發(fā)現(xiàn)油梨水提物的葡萄糖擴(kuò)散抑制率為60%，位列第二，僅次于龍牙草。Oboh等[6]分別提取油梨果實(shí)與葉片的多酚物質(zhì)，檢測(cè)其對(duì)α-葡萄糖苷酶的離體抑制作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，果實(shí)具有抑制α-葡萄糖苷酶活性作用。本實(shí)驗(yàn)所選取的16份油梨果肉粗提物對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制活性較低，這可能是由于品種原因所導(dǎo)致的。本實(shí)驗(yàn)中9份羊奶果果肉粗提物抑制α-葡萄糖苷酶活性作用遠(yuǎn)高于油梨果肉，甚至羊奶果6號(hào)果肉的抑制率接近阿卡波糖的抑制率。

目前，中國(guó)一般都在中草藥上篩選抑制α-葡萄糖苷酶活性的物質(zhì)，但這些植物中抑制酶活性物質(zhì)大多與具有毒副作用的物質(zhì)共存，必須經(jīng)過(guò)分離才能減少或除去其毒副作用，而植物中活性物質(zhì)的分離、提純又較為復(fù)雜，故很難應(yīng)用于醫(yī)學(xué)臨床治療[16-19]。水果是人們?nèi)粘Ｉ钪械某Ｓ檬澄?，從水果中開(kāi)發(fā)降血糖功能成分既方便又能克服提取難的問(wèn)題[20]。羊奶果中主要的降血糖物質(zhì)是多酚與黃酮，其分離、提純要比大多數(shù)中草藥活性物質(zhì)容易。因此，對(duì)于羊奶果降血糖的研究可以提高羊奶果附加值，對(duì)于增加果農(nóng)收入、增強(qiáng)國(guó)民體質(zhì)等都具有重要意義。

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① 基金項(xiàng)目：海南省自然科學(xué)基金（No.20163096）；農(nóng)業(yè)部物種資源保護(hù)（農(nóng)作物）項(xiàng)目（No.1251416305010）。

收稿日期：2016-09-06；責(zé)任編輯/葉慶亮；編輯部E-mail： rdnk@163.com。

② 葛 宇（1982～），助理研究員，博士，主要從事熱帶園藝植物育種與生物技術(shù)，E-mail： geyu@catas.cn。

③ 通訊作者。E-mail： zjwhma@163.com。