陳玉梅

摘 要：本實驗以綠原酸為指標對金銀花提取工藝進行研究。測定方法為色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6mm×250mm，5μm）；流動相以乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87）（三乙胺調(diào)pH值至3.0）；檢測波長為327nm；流速1.0mL·min-1。最佳提取工藝為加入8倍量50%乙醇，超聲提取35分鐘，連續(xù)提取2次。本工藝穩(wěn)定、可行、收率高。

關(guān)鍵詞：金銀花；提?。还に?/p>

金銀花，又名忍冬，由于忍冬花初開為白色，后轉(zhuǎn)為黃色，因此得名金銀花。金銀花為忍冬科忍冬屬植物忍冬及同屬植物干燥花蕾或帶初開的花。金銀花自古被譽為清熱解毒的良藥，用于各種熱性病，如身熱、發(fā)斑、熱毒瘡癰、咽喉腫痛等癥?！吨貞c堂隨筆》記載：“清絡(luò)中風火濕熱，解溫疫穢惡濁邪，息肝膽浮越風陽，治痙厥癲癇諸癥。”金銀花具有抗炎、抗菌、抗病毒、保肝、利膽、降血脂降糖、止血、抗氧化等多種藥理學活性[1-5]。金銀花可用于治療高脂血癥、百日咳、銀屑病、副鼻竇炎、小兒肺炎、風濕性心臟病、鈞端螺旋體病等。綠原酸（Chlorogenic acid，以下簡稱CA），是由咖啡酸（Caffeic acid）與奎尼酸（Quinicacid，1-羥基六氫沒食子酸）生成的縮酚酸，是金銀花主要成分之一。綠原酸具有抗氧化、抑菌、抗病毒、抗炎、抗腫瘤、保肝作用、抗內(nèi)毒素等作用。綠原酸抗氧化能力要強于咖啡酸、對羥苯酸、阿魏酸、丁香酸、丁基羥基茴香醚（BHA）和生育酚等。本實驗以綠原酸為指標對金銀花提取工藝進行研究。

1 儀器與試藥

山東魯創(chuàng)LC-3000液相色譜儀（梯度）（山東魯創(chuàng)分析儀器有限公司）；PHS-550智能型臺式酸度計（杭州陸恒生物科技有限公司）；實驗室用高純水制備器（北京科譽興業(yè)科技發(fā)展有限公司）；DK-S24電熱恒溫水浴鍋（上海五相儀器儀表有限公司）；FA1204CFAC型全自動內(nèi)校電子分析天平（北京同德創(chuàng)業(yè)科技有限公司）；UV1600紫外可見分光光度計（西安華辰樂天實驗室設(shè)備有限公司）。綠原酸對照品（中國藥品生物制品檢定所提供）。乙腈（南京大唐化工有限公司）；甲醇（北京亞太龍興化工有限公司）；乙醇（濟南圣豐工貿(mào)有限公司）；磷酸（南京大唐化工有限公司）；三乙胺（北京亞太龍興化工有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 單因素考察

2.2.1 提取次數(shù)

取原藥材，除去雜質(zhì)，篩去灰屑，至于圓底燒瓶內(nèi)，分別提取四次，第一次加10倍50%乙醇，超聲提取25分鐘，過濾，合并濾液，減壓濃縮；第二次加10倍50%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)提取兩次，過濾，合并濾液，減壓濃縮；第三次加10倍50%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)提取三次，過濾，合并濾液，減壓濃縮。第四次加10倍50%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)提取四次，過濾，合并濾液，減壓濃縮。采用高效液相測定濃縮膏中綠原酸含量并計算綠原酸收率。

2.1.2 加醇倍數(shù)

取原藥材，除去雜質(zhì)，篩去灰屑，至于圓底燒瓶內(nèi)，分別提取四次，第一次加14倍50%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)四次，第二次加12倍50%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)四次，第三次加10倍50%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)四次，第四次加8倍50%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)四次，分別過濾，合并濾液，減壓濃縮。采用高效液相測定濃縮膏中綠原酸含量并計算綠原酸收率。

2.1.3 提取時間

取原藥材，除去雜質(zhì)，篩去灰屑，至于圓底燒瓶內(nèi)，分別提取三次，第一次加10倍50%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)四次，第二次加10倍50%乙醇，超聲提取35分鐘，連續(xù)四次，第三次加10倍50%乙醇，超聲提取45分鐘，連續(xù)四次，分別過濾，合并濾液，減壓濃縮。采用高效液相測定濃縮膏中綠原酸含量并計算綠原酸收率。

2.2 正交試驗設(shè)計

實驗結(jié)果表明，提取次數(shù)、加醇倍數(shù)和提取時間對綠原酸收率影響較大。選擇提取次數(shù)、加醇倍數(shù)和提取時間作為考察因素，采用正交試驗法對影響提取效率的其它工藝條件進行優(yōu)選。采用3個考察水平，用L9（34）正交表進行試驗，因素水平表見表1。

3 含量測定

3.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下。色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6mm×250mm，5μm）；流動相以乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87）（三乙胺調(diào)pH值至3.0）；檢測波長為327nm；流速1.0mL·min-1；柱溫：35℃。理論板數(shù)按綠原酸峰計算應(yīng)不得低于2000。

3.2 供試品溶液的制備

取提取膏適量，精密量取，置50mL量瓶中，加50%乙醇適量，超聲處理十分鐘，放置至室溫，加50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

3.3 對照品溶液的制備

分別精密稱取綠原酸對照品5mg，置250mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

3.4 標準曲線的制備

將濃度為5μg/ml，10μg/ml，15μg/ml，20μg/ml，25μg/ml，30μg/ml，35μg/ml的對照品溶液分別吸取20μL注入HPLC，以進樣量（μg）為橫坐標，峰面積積分值A(chǔ)為縱坐標，繪制標準曲線。試驗表明，綠原酸銨對照品在5～35μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.5 回收率試驗

取已知含量的同一批供試品各6份，分別精密添加一定量的綠原酸對照品，測定含量，計算回收率。平均回收率為97.6%，RSD為0.73%。

4 實驗結(jié)果

選擇提取次數(shù)、加醇倍數(shù)和提取時間作為考察因素，采用正交試驗法進行試驗，得到最佳提取工藝為加入8倍量50%乙醇，超聲提取35分鐘，連續(xù)提取2次。本工藝穩(wěn)定、可行、收率高；測定方法法簡便、準確，可用于金銀花膏中綠原酸的含量測定。

參考文獻

[1]宮璀璀，鄭乃剛，吳景蘭，賴澤仁，何培霞.金銀花對大鼠體內(nèi)和體外RBL細胞的抗氧化保護作用及其機制[J].吉林大學學報（醫(yī)學版），2009（06）.

[2]楊春佳，蘇德望，王躍生，張昆，馬淑霞，李麗秋，崔剛.金銀花對梗阻性黃疸大鼠菌群失調(diào)及內(nèi)毒素血癥的調(diào)整作用[J].中國微生態(tài)學雜志， 2012（08）.

[3]石遠蘋.連翹和金錢草與金銀花提取物或浸膏對幾種常見耐藥菌的體外作用研究[J].臨床合理用藥雜志，2012（15）.

[4]宮璀璀，鄭玉霞，鄭乃剛，曹陽，孟明利，吳景蘭.金銀花在體內(nèi)抗氧化作用的實驗研究[J].實用醫(yī)藥雜志，2006（05）.

[5]樊宏偉，肖大偉，余黎，朱荃.金銀花及其有機酸類化合物的體外抗血小板聚集作用[J].中國醫(yī)院藥學雜志，2006（02）.