田春亞，王丹丹，曾令榮，王德飄，陳亦慧，孟信剛，胡德禹

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QuEChERS－超高效液相色譜法定量檢測柑橘中的吡唑醚菌酯

田春亞，王丹丹，曾令榮，王德飄，陳亦慧，孟信剛，胡德禹*

（貴州大學(xué) 精細(xì)化工研究開發(fā)中心，貴州 貴陽 550025）

建立了改進(jìn)的QuEChERS-超高效液相色譜法，定量檢測柑橘（果肉、果皮和全果）樣品中殘留的吡唑醚菌酯。樣品用乙腈提取，經(jīng)N-丙基乙二胺（PSA）和十八烷基硅烷（C18）凈化，采用甲醇和水為流動相，用UPLC-PDA進(jìn)行檢測。試驗結(jié)果表明，添加水平為0.05~5.0 mg/kg時回收率為82.34%~97.44%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.40%~5.66%。吡唑醚菌酯在貴州和湖南兩地柑橘全果中的半衰期分別為10.34 d和9.76 d。施藥劑量為180 mg a.i./m2和270 mg a.i./m2，施藥3~4次，距最后1次施藥7~28 d采樣，吡唑醚菌酯在柑橘中的殘留量為0.05~0.886 mg/kg。

超高效液相色譜（UPLC）；吡唑醚菌酯；柑橘；消解動態(tài)；最終殘留

吡唑醚菌酯是德國巴斯夫公司于1993年開發(fā)的一種新型甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，又名唑菌胺酯，英文名為pyraclostrobin，化學(xué)名為N-2-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑-3-氧甲基]苯基-(N-甲氧基)氨基甲酸甲酯[1]。吡唑醚菌酯具有殺菌譜廣、活性高、持效期長、毒性低、對非靶標(biāo)生物安全等特點，廣泛用于防治水果、蔬菜、谷物等作物中的白粉病、銹病、網(wǎng)斑病、霜霉病、稻瘟病等病害。國際食品法典委員會（CAC）和歐盟（EU）規(guī)定吡唑醚菌酯在柑橘中的最大殘留限量（MRL）為2 mg/kg，但我國尚未制定吡唑醚菌酯在柑橘上的MRL值。目前，國內(nèi)外對吡唑醚菌酯在多種農(nóng)產(chǎn)品中的殘留測定方法已有大量報道[2-6]，但已報道的氣相色譜法、液相色譜質(zhì)譜法分析柑橘中的吡唑醚菌酯[7-8]，其樣品前處理和凈化方法復(fù)雜，試劑使用量大，對環(huán)境污染大，并且尚未有吡唑醚菌酯在柑橘中的消解動態(tài)和最終殘留研究的報道。本實驗結(jié)合施藥濃度、施藥次數(shù)及施藥后的間隔時間等影響因素對吡唑醚菌酯進(jìn)行消解動態(tài)差異、殘留特點等對比分析，為吡唑醚菌酯在柑橘上的合理使用和制定《農(nóng)藥安全使用標(biāo)準(zhǔn)》提供一定的數(shù)據(jù)依據(jù)。

1 實驗部分

1.1 材料與試劑

吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)品（純度為99.0%），購于Dr.Ehrenstorfer GmbH公司；N-丙基乙二胺(PSA)、十八烷基硅烷(C18)，購于美國Bonna-Agela Technologies公司；乙腈、無水醋酸鈉、無水硫酸鎂等，分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

Waters ACQUITY UPLC-PDA(美國Waters公司)；色譜柱：ACQUITY UPLC? BEH C18 (50.0 mm×2.1 mm i.d., 1.7 μm，購于美國Waters公司)；AS-3120型超聲儀；QL-901型渦旋混合器；TGL-20B型離心機(jī)等。

1.3 田間試驗

根據(jù)《農(nóng)藥殘留實驗準(zhǔn)則》[9]設(shè)計試驗小區(qū)，分別在貴州和湖南進(jìn)行田間試驗。消解動態(tài)試驗施藥劑量為270 mg a.i./m2，于柑橘幼果生長至一半大小時施藥1次，采樣距施藥間隔期為2 h 和1、2、3、5、7、10、14、21、28 d。最終殘留試驗施藥劑量設(shè)為低劑量180 mg a.i./m2，高劑量270 mg a.i./m2，施藥3~4次。施藥時期為柑橘長至成熟果實一半大小時噴霧，距最后一次施藥14、21和28 d采樣。

1.4 樣品制備

柑橘田間樣本在采集后，8 h內(nèi)運(yùn)回實驗室，并立即按SOP FT-03-22（柑橘田間樣本采集與實驗室樣品制備標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程）的規(guī)定制備成實驗室樣品于-20 ℃冷凍保存。

1.5 檢測方法

1.5.1 色譜條件

（1） 色譜柱：ACQUITY UPLC? BEH C18 (50.0 mm×2.1 mm i.d., 1.7 μm)；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：3.0 μL；流速：0.3 mL/min；檢測波長：276 nm；流動相：甲醇∶水=58.5∶41.5（/）。此條件下，吡唑醚菌酯出峰時間約為6.3 min（圖1）。

圖1 吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液超高效液相色譜圖

1.5.2 樣品前處理

稱取10 g（精確到0.01g）柑橘樣品（果肉、全果和果皮）于50 mL離心管中，準(zhǔn)確加入20 mL乙腈，渦旋3 min，超聲5 min，加入2 g無水醋酸鈉和3 g無水硫酸鎂，渦旋3 min，6 000 r/min離心3 min，將全部上清液轉(zhuǎn)移至100 mL梨形瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀45 ℃恒溫濃縮近干，甲醇定容至1 mL，轉(zhuǎn)移至含30 mg PSA和30 mg C18的2 mL離心管中，渦旋30 s，離心1 min，過0.22 μm濾膜，待UPLC-PDA檢測。

2 結(jié)果與討論

2.1 分析方法的靈敏度和線性范圍

準(zhǔn)確稱取0.020 0 g吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于100 mL容量瓶，用甲醇溶解并定容至刻度，得到200 μg/mL儲備液。將儲備液逐級稀釋為0.1、0.5、1、5、20、50 μg/mL系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.5.1的色譜條件進(jìn)樣，以吡唑醚菌酯的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積值為縱坐標(biāo)，得到吡唑醚菌酯的線性回歸方程為：=31862-4645.3，相關(guān)系數(shù)為0.999 9。

2.2 方法的準(zhǔn)確度和精密度

吡唑醚菌酯在柑橘果肉、果皮和全果上的添加回收率試驗結(jié)果如表1。吡唑醚菌酯在三個基質(zhì)中3個添加水平下的平均回收率為82.34%~ 97.44%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.40%~ 5.66%。準(zhǔn)確度和精密度符合我國農(nóng)藥殘留試驗準(zhǔn)則。

2.3 消解動態(tài)結(jié)果

貴州和湖南兩地的消解動態(tài)試驗樣品殘留量檢測結(jié)果符合一級動力學(xué)特征(表2)，消解方程分別為：= 0.4089-0.067，= 0.3426-0.071；半衰期分別為10.34 d，9.76 d；相關(guān)系數(shù)分別為0 .946 6和 0.902 4。試驗結(jié)果表明，在貴州和湖南兩地吡唑醚菌酯在柑橘上的消解速率差異較小，并且半衰期都較短，說明吡唑醚菌酯在柑橘中比較易于降解。

表1 吡唑醚菌酯在柑橘果肉、全果和果皮上的添加回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

表2 吡唑醚菌酯在柑橘中的消解動態(tài)方程和半衰期

2.4 最終殘留結(jié)果

距末次施藥14~28 d后，果肉、全果和果皮中吡唑醚菌酯的最終殘留量如表3。

表3 距末次施藥14~28 d后吡唑醚菌酯在果肉、果皮和全果中的殘留量

結(jié)果表明，60%吡唑醚菌酯·代森錳鋅水分散粒劑按施藥劑量180~270 mg a.i./m2，施藥3~4次后，柑橘中的殘留量為0.05~0.886 mg/kg，低于國際食品法典委員會和歐盟規(guī)定的吡唑醚菌酯在柑橘中的MRL值。

3 結(jié)束語

吡唑醚菌酯在貴州和湖南兩地柑橘上的消解動態(tài)研究結(jié)果表明，吡唑醚菌酯在柑橘上的半衰期大約為10 d，降解速率較快。最終殘留研究結(jié)果顯示，距末次施藥后間隔14~28 d，柑橘中吡唑醚菌酯的含量為0.05~0.886 mg/kg，低于國際食品法典委員會（CAC）和歐盟（EU）規(guī)定的吡唑醚菌酯在柑橘中的MRL值。以此為依據(jù)，按施藥劑量為180~270 mg a.i./m2，施藥3~4次后，距末次施藥14 d收獲期的柑橘食用安全。

［1］張亦冰. 新穎甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑—唑菌胺酯[J]. 世界農(nóng)藥, 2007, 29(3): 47-48.

［2］[2]Mercader J V, Agulló C, Esteve-Turrillas F A, et al. Immunoassays for pyraclostrobin analysis in processed food products using novel monoclonal antibodies and QuEChERS-based extracts[J]. Food control, 2013, 32(1): 42-48.

［3］Dong F, Chen X, Liu X, et al. Simultaneous determination of five pyrazole fungicides in cereals, vegetables and fruits using liquid chromatography/tandem mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography A, 2012, 1262: 98-106.

［4］Zhang F, Wang L, Zhou L, et al. Residue dynamics of pyraclostrobin in peanut and field soil by QuEChERS and LC–MS/MS[J]. Ecotoxicology and environmental safety, 2012, 78: 116-122.

［5］Pan X, Dong F, Xu J, et al. Comparison of different cleanup procedures for oil crops based on the development of a trace analytical method for the determination of pyraclostrobin and epoxiconazole[J]. Journal of separation science, 2014, 37(24): 3669-3676.

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［7］吳潔珊, 馮家望, 任永霞, 等. 氣相色譜測定柑橘中多種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑的殘留量[J]. 農(nóng)藥, 2011, 50(10): 754-755.

［8］劉軍, 張仙, 沈菁, 等. 液相色譜-質(zhì)譜法對柑橘中吡唑醚菌酯殘留的檢測[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué), 2014, 53(19): 4698-4700.

［9］中華人民共和國農(nóng)業(yè)部. NY/T 788-2004.農(nóng)業(yè)殘留試驗準(zhǔn)則[S]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2004.

Determination of Pyraclostrobin Residue in Orange by UPLC Using a Modified QuEChERS

（Research and Development Center for Fine Chemicals, Guizhou University, Guiyang 550025, China）

A UPLC method was established for determination of pyraclostrobin residue in orange. The samples were extracted with acetonitrile, and the analyte was detected by UPLC with PDA with methanol-water mixed solution asmobile phase. The results showed that the recovery of pyraclostrobin was 82.34%~97.44%, with the relative standard deviation of 0.40%~5.66% at the spiking level of 0.05~5 mg/kg. The half lives of pyraclostrobin in oranges from Guizhou and Hunan were 10.34 d and 9.76 d, respectively．According to the research findings, when pyraclostrobin was applied 3 and 4 times to orange trees with dosage of 180 ~ 270 mg a.i./m2,the residue of pyraclostrobin in oranges picked after last using pyraclostrobin for 7~28 days was in the range of 0.05~0.886 mg/kg.

ultra performance liquid chromatography (UPLC); pyraclostrobin; orange; degradation; residue

2017-03-15

田春亞（1992-），女，苗族，碩士研究生，貴州銅仁人，研究方向：農(nóng)藥殘留分析。

胡德禹（1965-），女，教授，研究方向：農(nóng)藥殘留分析。

O 657

A

1004-0935（2017）05-0489-03