張忠++蘇紅寧++劉姣+++任艷青

[摘要] 目的 觀察坤舒康顆粒對大鼠棉球肉芽腫的抑制作用，初步探討其作用機制。 方法 將SD大鼠隨機分為假手術(shù)組、模型組、陽性藥地塞米松組（陽性組）及坤舒康顆粒高劑量組、中劑量組、低劑量組，每組10只。除假手術(shù)組外，其余大鼠麻醉后，于左前肢腋下植入滅菌棉球20 mg。坤舒康各劑量組大鼠分別灌胃不同劑量坤舒康混懸液（20、10、5 g/kg體重），陽性藥組大鼠灌胃地塞米松混懸液（0.08 g/kg體重），連續(xù)給藥14 d。末次給藥后麻醉，取出棉球，干燥稱重；取胸腺、脾臟，稱重，計算胸腺、脾臟指數(shù)；股動脈取血，分別檢測血漿6-酮-前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）、血栓烷B2（TXB2）及血清白介素-1β（IL-1β）、一氧化氮（NO）水平。 結(jié)果 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠的胸腺及脾臟指數(shù)明顯降低（P < 0.01），血漿6-keto-PGF1α、TXB2及血清IL-1β、NO水平均明顯升高（P < 0.01）。與模型組比較，坤舒康顆粒高劑量組棉球肉芽腫重量明顯降低（P < 0.05），胸腺、脾臟指數(shù)則無明顯變化（P > 0.05），坤舒康顆粒高劑量、中劑量組大鼠血漿6-keto-PGF1α、TXB2及血清IL-1β、NO水平均明顯降低（P < 0.01或P < 0.05）。 結(jié)論 坤舒康顆粒對慢性肉芽腫性炎癥具有抑制作用，其抗炎作用機制與抑制炎癥介質(zhì)釋放有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 坤舒康顆粒；棉球肉芽腫；6-酮前列腺素F1α；血栓素B2；白介素-1β；一氧化氮

[中圖分類號] R9 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）01（b）-0012-04

Inhibitive effect and mechanism of Kunshukang Granules on the formation of cotton ball granuloma in rats

ZHANG Zhong1 SU Hongning2 LIU Jiao3 REN Yanqing3 ZHANG Hongzhu3

1.Dispensary of Traditional Chinese Medicine， Tangshan Qianxi Traditional Chinese Medicine Hospital， Hebei Province， Qianxi 064300， China； 2.Dispensary of Traditional Chinese Medicine， the Forth Hospital of Shijiazhuang， Hebei Province， Shijiazhuang 050000， China； 3. Department of Pharmacology， School of Pharmacy， Hebei College of Traditional Chinese Medicine Hebei Traditional Chinese Medicine Dispensing Granule Engineering Technology Research Center， Hebei Province， Shijiazhuang 050200， China

[Abstract] Objective To study the inhibitive effect and possible mechanism of Kunshukang （KSK） Granules on cotton ball granuloma model. Methods Sixty SD rats were randomly divided into 6 groups： control group， model group， Dexamethasone group， high dose KSK group， middle dose KSK group and low dose KSK group. All groups except control group rats were implanted 20 mg cotton ball in left armpit. The rats in every dose KSK groups were administrated KSK suspension （20， 10， 5 g/kg）， and the rats in Dexamethasone group were administrated Dexamethasone suspension（0.08 g/kg） for 14 days. Then the cotton ball were removed， dried and weighed. All rats were fetched and weighed thymus and spleen， taken blood into analysis 6-keto-PGF1α， TXB2， IL-1β and NO. Results Compared with sham-operated group rats， the thymus and spleen index of model group rats were significantly reduced （P < 0.01）， and the level of 6-keto-PGF1α，TXB2， IL-1β and NO of model group rats were significantly raised （P < 0.01）. Compared with model group rats， the cotton ball weight of high dose KSK group rats were significantly reduced （P < 0.05）， and the level of 6-keto-PGF1α， TXB2， IL-1β and NO of high and middle dose KSK groups were significantly reduced （P < 0.01 or P < 0.05）. Conclusion Kunshukang Granules can inhibit cotton ball granuloma by inhibiting the release of inflammatory mediators.

[Key words] Kunshukang Granules； Cotton ball granuloma； 6-keto-PGF1α； TXB2； IL-1β； NO

坤舒康顆粒為石家莊第四醫(yī)院制劑，是河北省新版農(nóng)合藥品目錄品種。本品主要由丹參、蒲公英、赤芍等藥組成，具有清熱利濕、解毒活血、化瘀止痛功效，主要用于腹痛帶下、癥瘕積聚、小腹脹滿疼痛等病癥的治療[1]。本品在臨床應用多年，顯示其對慢性盆腔炎的治療效果顯著，但其作用機制不明[2]。本研究通過建立大鼠棉球肉芽腫慢性炎癥模型，觀察坤舒康顆粒的抗炎作用，并初步探討其作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

SD大鼠，清潔級，雌性，體重180～200 g，由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供，實驗動物使用許可證號SYXK（冀）2011-0047，動物合格證號1509046。動物在河北中醫(yī)學院中藥藥理實驗室分籠飼養(yǎng)，恒溫恒濕，普通飼料，自由飲水。

1.2 藥物與試劑

坤舒康顆粒（石家莊第四醫(yī)院，批號20150825）。取200 g坤舒康顆粒，加0.5% CMC-Na混勻，定容至100 mL，即得坤舒康顆粒高劑量混懸液（2 g/mL）；將坤舒康顆粒高劑量混懸液稀釋1/2，即得坤舒康顆粒中劑量混懸液（1 g/mL）；將坤舒康顆粒中劑量混懸液稀釋1/2，即得坤舒康顆粒低劑量混懸液（0.5 g/mL）。慶大霉素注射液（8萬U，河南潤弘制藥股份有限公司，批號1506172）。醋酸地塞米松（0.75 mg，天津天藥藥業(yè)股份有限公司，批號150114）。將醋酸地塞米松片研碎，精密稱取800 mg，加0.5% CMC-Na混勻，定容至100 mL。血栓烷B2（TXB2）放射免疫分析藥盒（北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司），6-酮-前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）放射免疫分析藥盒（北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司），白介素-1β（IL-1β）放射免疫分析藥盒（北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司），一氧化氮（NO）分析試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

1.3 實驗器材

ML204分析天平（瑞士Mettler toledogo公司），DHG-9023A電熱恒溫鼓風干燥箱（上海合恒儀器設(shè)備有限公司），5417R型離心機（德國Eppendorf公司），756MC型紫外-可見分光光度計（上海精密科學儀器有限公司），全自動γ放免分析儀（北京金泉水科技有限公司）等。

1.4 模型建立、分組給藥

將60只大鼠隨機分成6組，分別為坤舒康顆粒高劑量組（20 g/kg體重）、中劑量組（10 g/kg體重）、低劑量組（5 g/kg體重），陽性藥地塞米松組（陽性組）（0.08 g/kg體重），模型組，假手術(shù)組，每組10只。除假手術(shù)組外，其余各組大鼠以10%水合氯醛麻醉后，于左前肢腋下近背部位置以碘酒消毒，切開1 cm長小口。取滅菌棉球約20 mg，另加慶大霉素1 mL，從小切口植入皮下，隨即縫合皮膚，建造慢性炎癥模型。假手術(shù)組大鼠僅施以手術(shù)操作，但不植入棉球。從手術(shù)當日開始，各組大鼠灌胃給藥或蒸餾水，容量為10 mL/kg體重，連續(xù)14 d。剖開胸腔、腹腔，采集胸腺、脾臟，腹主動脈取血，用于指標的檢測。

1.5 指標檢測

1.5.1 稱取肉芽干重 末次給藥后禁食12 h，對大鼠進行麻醉，打開大鼠原手術(shù)切口，將棉球同周圍結(jié)締組織一起取出，剔除脂肪組織，放置于60℃干燥箱中烘干12 h，稱重。將稱得的重量減去棉球重量即得肉芽干重。

1.5.2 計算胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù) 迅速剖開大鼠腹腔和胸腔，切取胸腺和脾臟，稱重，并計算與體重之比，為胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)。

1.5.3 檢測血液生化指標 大鼠股動脈取血5～10 mL，置于放有0.1 mL 1%肝素生理鹽水溶液的試管中，制備血漿，檢測6-keto-PGF1α及TXB2含量；另取股動脈血，置于離心管中，靜置，待血液凝固后，將其離心分離血清（3000 r/min，10 min），小心吸出上清，檢測白介素1β（IL-1β）及一氧化氮（NO）含量。

1.6 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示。各組間采用單因素方差分析，均數(shù)間兩兩比較采用LSD-t檢驗。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 坤舒康顆粒對大鼠棉球肉芽腫的影響

坤舒康顆粒高劑量組及陽性組大鼠的肉芽干重明顯低于模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。見表1。

2.2 坤舒康顆粒對大鼠胸腺及脾臟指數(shù)的影響

與假手術(shù)組比較，坤舒康顆粒各劑量組、陽性組及模型組大鼠的胸腺、脾臟指數(shù)均顯著降低（P < 0.01）。與模型組比較，陽性組的胸腺及脾臟指數(shù)顯著降低（P < 0.01），坤舒康顆粒各劑量組則無顯著性差異（P > 0.05）。見表2。

2.3 坤舒康顆粒對大鼠血漿6-keto-PGF1α及TXB2含量的影響

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血漿6-keto-PGF1α及TXB2水平顯著升高（P < 0.01）。與模型組比較，坤舒康顆粒高劑量及中劑量組大鼠血漿6-keto-PGF1α含量明顯降低（P < 0.05），陽性組大鼠血漿6-keto-PGF1α含量顯著降低（P < 0.01），低劑量組則無明顯差異（P > 0.05）；坤舒康顆粒高劑量組、中劑量組及陽性組TXB2含量均顯著降低（P < 0.01），坤舒康顆粒低劑量組則明顯降低（P < 0.05）。見表3。

2.4 坤舒康顆粒對大鼠血清IL-1β及NO含量的影響

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清IL-1β及NO水平顯著升高（P < 0.01）。與模型組比較，坤舒康顆粒高劑量組及陽性組大鼠血清IL-1β含量均顯著降低（P < 0.01），中劑量組明顯降低（P < 0.05），低劑量組則無明顯差異（P > 0.05）；坤舒康顆粒高劑量組、中劑量組及陽性組大鼠血清NO含量均顯著降低（P < 0.01），低劑量組也明顯降低（P < 0.05）。見表4。

3 討論

慢性盆腔炎是指女性內(nèi)生殖器官及周圍的結(jié)締組織、盆腔腹膜發(fā)生的炎癥，為女性的常見病、多發(fā)病，發(fā)病率高達30%[3-4]。此病因為反復發(fā)作、纏綿難愈，可引起盆腔粘連、盆腔痛、異位妊娠、不孕等后遺癥，給患者及家屬帶來極大痛苦[5]?，F(xiàn)西醫(yī)多以抗生素進行治療，此法對盆腔炎急性發(fā)作期效果較好[6-7]。而慢性盆腔炎發(fā)展過程中已無病原體存在，其機制主要與炎性浸潤造成局部組織抗氧化能力下降，代謝減慢，血流障礙有關(guān)，患處發(fā)生粘連或水腫[8]。因此抗生素對慢性盆腔炎療效并不顯著[9]。

近年來，中醫(yī)藥治療慢性盆腔炎因療效顯著，不良反應輕微受到廣泛關(guān)注[9-10]。中醫(yī)認為，慢性盆腔炎多屬濕熱之邪侵襲沖、任、帶脈，以致沖任失調(diào)、帶脈失約。濕邪侵襲機體，多因飲食不節(jié)，過食辛辣肥甘之品，損傷脾土，脾失健運之職，水谷精微不能上輸以生血，反聚為濕。濕邪郁久化熱，流注下焦，損傷任、帶二脈而為帶下病。濕熱內(nèi)蘊，最易阻遏氣機。氣為血之帥，能夠行血，氣機不利，不能運血暢行，以致血行受阻。婦人以血為本，氣血調(diào)和則五臟安和，經(jīng)脈通暢，沖任充盈。若氣滯血瘀，則沖任胞脈不暢，經(jīng)血滯于胞宮?；驖駸嶂扒址赴麑m血海，破血妄行，沖任被擾，則行經(jīng)日久不止，造成月經(jīng)不調(diào)。濕邪停聚日久，凝聚而成痰飲，痰飲、血瘀、氣滯蘊結(jié)胞宮而成癥瘕，沖任受阻，不通則痛。治療多以用清熱、祛濕、理氣、活血為法[11]。石家莊市第四醫(yī)院院內(nèi)制劑坤舒康顆粒，是由蒲公英、當歸、赤芍、丹參、川芎、醋三棱、醋莪術(shù)、黃芩和澤瀉組方而成。其中，蒲公英清熱解毒，消腫散結(jié)；黃芩清熱燥濕，瀉火解毒；澤瀉利水消腫，滲濕，泄熱；三藥共用以清下焦?jié)駸帷．敋w補血活血，通經(jīng)活絡(luò)；赤芍能清血分實熱，散瘀血留滯；丹參活血調(diào)經(jīng)，祛瘀止痛；川芎活血行氣；四藥同用活血補血兼用。三棱為血中氣藥長于破血中之氣，莪術(shù)為氣中血藥，善破氣中止血；二藥伍用，氣血同治，活血化瘀，行氣止痛，化積消癥。全方具有清熱利濕、解毒活血、化瘀止痛功效，臨床主要用于慢性盆腔炎的治療，但其作用機制不清[12-13]?，F(xiàn)代研究顯示，坤舒康顆粒組方中包含的清熱藥、活血化瘀藥、祛風濕藥均有抗炎作用，推測本藥治療慢性盆腔炎的作用應該與抑制慢性炎癥反應過程有關(guān)[14-16]。因此，本實驗采用大鼠棉球肉芽腫模型，觀察坤舒康顆粒的抗炎作用，并分析其可能的機制。

棉球肉芽腫為常用慢性炎癥模型，是在局部植入異物（棉球）連續(xù)造成刺激，引起遲發(fā)型變態(tài)反應，形成幼稚的結(jié)締組織即肉芽腫[17]。本研究通過觀察藥物對肉芽重量的影響，以判斷其抑制慢性炎癥反應的效果。實驗結(jié)果顯示，坤舒康顆粒高劑量組大鼠棉球肉芽腫重量明顯低于模型組，可見本藥有較好的抑制慢性炎癥作用。

在慢性炎癥反應的過程中，存在著炎癥細胞和免疫細胞功能的紊亂[18]。其中，IL-β及NO的合成和釋放均會出現(xiàn)異常。IL-β能夠促進炎癥細胞的趨化和黏附，吸引并活化中性粒細胞滲出到炎癥區(qū)，還能夠增加血管壁通透性、刺激血小板活化因子和前列腺素類物質(zhì)的釋放[19]。NO是炎癥反應和免疫應答中關(guān)鍵性的調(diào)節(jié)物質(zhì)，能夠影響炎癥反應的進程。NO通過促使白細胞與血管內(nèi)皮細胞發(fā)生黏聚，產(chǎn)生過氧化物造成細胞損傷，擴張血管平滑肌，使血管通透性增加，造成組織水腫，從而加重炎癥反應。TXA2和PGE2均為花生四烯酸（AA）的代謝產(chǎn)物，同屬前列腺素類，是重要的炎癥因子。其中PGE2能夠舒張小血管，增加微血管通透性，引起水腫；PGE2還是一種重要的止痛物質(zhì)，是引起炎性疼痛的主要原因。TXA2除能引起炎癥反應外，還能促進血小板聚集，加重血管損傷。但TXA2和PGE2均不穩(wěn)定，半衰期很短，極易代謝為更為穩(wěn)定的TXB2和6-keto-PGF1α[20]。在本研究中，所復制的棉球肉芽腫大鼠模型血漿TXB2、6-keto-PGF1α及血清IL-β、NO水平明顯升高，符合慢性炎癥反應的病理改變，表示造模成功。

本研究結(jié)果顯示，坤舒康顆粒各劑量組大鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)與模型組相比，無顯著性差異，而陽性組則顯著降低，表示坤舒康顆粒應用14 d對胸腺、脾臟這兩個免疫器官沒有顯著影響，初步證實本藥的安全性高于地塞米松。以坤舒康顆粒進行治療，可使棉球肉芽腫模型大鼠血漿TXB2、6-keto-PGF1α及血清IL-β、NO水平明顯降低，證實該藥的抗炎作用機制與抑制炎癥介質(zhì)釋放有關(guān)。

[參考文獻]

[1] 馮梅梅，陳新磊，孟瑞雪.坤舒康顆粒治療慢性盆腔炎500例療效觀察[J].河北醫(yī)藥，2008，30（4）：474.

[2] 樂杰，謝幸，林仲秋.婦產(chǎn)科學[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：246-252.

[3] 樂杰，豐有吉.婦產(chǎn)科學[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2005：275-276.

[4] 陳海燕.中藥治療慢性盆腔炎的療效分析[J].中國醫(yī)藥指南，2012，10（33）：612-613.

[5] 鞠秀麗.康婦炎膠囊聯(lián)合丹紅注射液治療慢性盆腔炎的療效及對患者炎癥因子水平的影響[J].醫(yī)學臨床研究，2016，33（4）：647-649.

[6] 袁素華，廖書娟.抗生素治療慢性盆腔炎急性發(fā)作的療效觀察[J].中國醫(yī)藥指南，2013，11（24）：499-500.

[7] 楊曉麗.急性盆腔炎性疾病35例臨床治療體會[J].中國衛(wèi)生標準管理，2014，5（7）：61-62.

[8] 梁旭東，張靜，王建六.康婦炎膠囊治療盆腔炎疾病的臨床觀察[J].實用婦產(chǎn)科雜志，2013，29（4）：274-276.

[9] 吳建榮，胡仙芝.康婦消炎栓聯(lián)合抗生素治療慢性盆腔炎的臨床療效觀察[J].中國實用醫(yī)藥，2007，2（36）：151-152.

[10] 茅小穎.婦樂顆粒聯(lián)合抗生素治療慢性盆腔炎療效觀察[J].新中醫(yī)，2014，46（9）：118-119.

[11] 阮越容，范氏鳳，董莉.中醫(yī)治療慢性盆腔炎臨床研究進展[J].山東中醫(yī)藥大學學報，2016，4（3）：293-296.

[12] 陳心磊，孟瑞雪.坤舒康顆粒治療慢性盆腔炎的療效[J].中國新藥雜志，2007，16（17）：1408-1409.

[13] 陳心磊，孟瑞雪，馮梅梅.坤舒康顆粒治療慢性盆腔炎療效觀察[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，16（25）：3670.

[14] 嚴亞鋒，張恩戶，侯建明.清熱藥抗炎作用的文獻再評價[J].中藥藥理與臨床，2013，2（1）：162-164.

[15] 呂明，王泰一，田曉軒，等.網(wǎng)絡(luò)藥理學分析揭示的常用活血化瘀中藥抗炎-抗血栓作用[J].藥學學報，2015，50（9）：1135-1141.

[16] 郭潔，張恩戶.祛風濕藥抗炎作用的文獻再評價[J].中藥藥理與臨床，2012，28（3）：124-126.

[17] 李效振，賈書紅，張東升，等.中藥復方宮炎凈的乙醇提取物抗炎作用研究[J].石河子大學學報：自然科學版，2013，31（6）：688-692.

[18] 王巖，魏永祥，賈振庚.全身炎癥反應綜合征和細胞因子的關(guān)系[J].中日友好醫(yī)院學報，2001，15（2）：104-106.

[19] 王瑞國，鄭良樸，林久茂，等.余甘子抗大鼠棉球肉芽腫形成及其機制的實驗研究[J].福建中醫(yī)學院學報，2007， 17（4）：22-24.

[20] 劉賓，牛樂，黃明宜.抵當湯對大鼠慢性前列腺炎的治療作用及機制[J].中國實驗方劑學雜志，2012，18（20）：231-235.

（收稿日期：2016-09-27 本文編輯：王紅雙）