秦雯，鄭敏，華敏，萬潤，文明*(.貴陽護理職業(yè)學院衛(wèi)生管理系，貴陽 55008；. 貴州大學動物疫病研究所，貴陽 55005)

貴州省部分地區(qū)H7亞型禽流感監(jiān)測與分析

秦雯1，鄭敏2，華敏2，萬潤2，文明2*
(1.貴陽護理職業(yè)學院衛(wèi)生管理系，貴陽 550081；2. 貴州大學動物疫病研究所，貴陽 550025)

為了解貴州省H7亞型禽流感感染情況，采用HI試驗對全省9個地區(qū)家禽血清樣本進行血清抗體檢測，PT-PCR方法對家禽咽-肛拭子、養(yǎng)禽場環(huán)境樣本和野鳥糞便進行病原核酸檢測。結(jié)果顯示：在1570份家禽血清樣本中，H7亞型禽流感血清抗體陽性率為0.45%(7/1570)；在350份家禽咽-肛拭子和310份養(yǎng)殖場環(huán)境樣本中，均未檢測出H7亞型禽流感病毒核酸；在160份野鳥糞便中，有1份為H7亞型禽流感病毒核酸陽性，陽性率為0.63%(1/160)。試驗提示，在貴州省養(yǎng)禽場中不存在H7亞型禽流感感染，但遷徙野禽中可能存在H7亞型禽流感隱性感染，應(yīng)當引起重視。

H7亞型禽流感；監(jiān)測；貴州省

禽流感(avian influenza，AI)是由A型流感病毒引起的一種嚴重危害禽類健康的傳染性疾病。本病于1878年在意大利首次發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)幾乎已遍布世界各地[1]。禽流感分非致病性、低致病性和高致病性三類，前兩類屬于溫和型禽流感，一般不引起家禽發(fā)病或發(fā)病癥狀較輕，而高致病性禽流感主要是由H5和H7亞型禽流感病毒引起，一旦暴發(fā)，常導致雞群全軍覆滅而造成嚴重的經(jīng)濟損失，尤其在火雞和雞中。

H7亞型禽流感屬于高致病性禽流感，近年來呈現(xiàn)擴大蔓延趨勢，疫情遍及全球各地，導致家禽死亡已達7000萬以上，現(xiàn)已引起全球養(yǎng)殖業(yè)和人類的廣泛關(guān)注[2]。2013年我國首次發(fā)現(xiàn)人感染新型H7N9亞型禽流感[3]。由于H7亞型禽流感病毒感染后，家禽常呈現(xiàn)無癥狀態(tài)勢[4-6]，因此人們對H7亞型禽流感不夠重視，這增加了H7亞型禽流感隱性感染的可能性和機會。貴州省是經(jīng)濟欠發(fā)達地區(qū)，也是我國受到禽流感侵襲次數(shù)和發(fā)病數(shù)最多的地區(qū)之一[7]。為此，筆者于2015年采集貴州省9個地區(qū)(州、市)45個縣(區(qū)、市)的養(yǎng)禽場、活禽交易市場、活禽屠宰點和自然保護區(qū)的樣本，采用HI試驗和RT-PCR方法進行了檢測分析[8-9]，以期為貴州省H7亞型禽流感的防控提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料及方法

1.1 樣本來源 采集自貴州省9個地(州、市)45個縣(區(qū)、市)定點監(jiān)測點，包括規(guī)模養(yǎng)殖場、散養(yǎng)戶、活禽交易市場、活禽屠宰點和自然保護區(qū)，其中家禽血清樣本1570份、家禽咽-肛拭子350份、環(huán)境土壤樣本310份和野鳥糞便160份。

1.2 檢測試劑 H7亞型禽流感血凝診斷抗原及陽性血清、H7亞型禽流感病毒RT-PCR檢測試劑盒等，購自中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所；RNA提取試劑盒，購自寶生物工程(大連)有限公司；1%雞紅細胞懸液，本實驗室自制。1.3 H7亞型禽流感血清抗體檢測 參照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(GB/T18936-2003)，采用血凝抑制試驗(HI)進行檢測，然后對檢測結(jié)果進行詳細記錄。

1.4 H7亞型禽流感病毒核酸檢測 取家禽咽-肛拭子、養(yǎng)禽場環(huán)境樣本和野鳥糞便樣本，按常規(guī)方法處理后，用RNA提取試劑盒提取總RNA樣本，超微量核酸蛋白儀進行RNA的質(zhì)量檢測，然后按照H7亞型禽流感病毒RT-PCR檢測試劑盒說明書步驟進行檢測，觀察和記錄結(jié)果。

2 結(jié) 果

2.1 家禽血清樣本中H7亞型禽流感抗體檢測結(jié)果 采用HI試驗對采集的1570份家禽血清樣本進行H7亞型禽流感抗體檢測，結(jié)果如表1所示：在貴州省9個地(州、市)監(jiān)測點中，有6個地(州、市)均可檢出H7亞型禽流感抗體陽性，總體陽性率為0.45%(7/1570)。

表1 貴州省H7亞型禽流感抗體檢測結(jié)果

2.2 家禽咽-肛拭子中H7亞型禽流感病毒核酸檢測結(jié)果 提取家禽咽-肛拭子中總RNA樣本，所有樣本經(jīng)檢測其OD260/280均在1.8～2.0范圍內(nèi)，說明RNA純度較高。采用熒光定量RT-PCR進行禽流感病毒核酸檢測，結(jié)果在350份家禽咽-肛拭子中均未檢出H7亞型禽流感病毒核酸。

2.3 環(huán)境樣本中H7亞型禽流感病毒核酸檢測結(jié)果 提取環(huán)境樣本中總RNA樣本，所有樣本經(jīng)檢測其OD260/280均在1.8～2.0范圍內(nèi)，說明提取的RNA純度較高。采用熒光定量RT-PCR進行禽流感病毒核酸檢測，結(jié)果在310份養(yǎng)禽場環(huán)境樣本中均未檢出H7亞型禽流感病毒核酸。

2.4 野鳥糞便中H7亞型禽流感病毒核酸檢測結(jié)果 提取野鳥糞便樣本中總RNA樣本，經(jīng)檢測所有提取樣本的OD260/280均在1.8～2.0范圍內(nèi)，說明RNA純度較高。采用熒光定量RT-PCR進行禽流感病毒核酸檢測，結(jié)果如表2所示：在160份野鳥糞便樣本中有1份檢出H7亞型禽流感病毒核酸，檢出率為0.63%(1/160)。

表2 野鳥糞便樣本H7亞型禽流感抗體檢測結(jié)果

3 討 論

H7亞型禽流感大多表現(xiàn)為高致病性，但近年來發(fā)現(xiàn)在禽類機體內(nèi)存在一些低致病性的H7亞型禽流感病毒毒株[10]。這些低致病性毒株能在家禽腸道上皮細胞進行有效的復制，并隨其糞便排泄污染周邊環(huán)境，導致其他禽類接觸受污染的環(huán)境時可能會感染，使得這些低致病性毒株在禽類中處于隱性傳播勢態(tài)。但人類感染這類低致病性毒株后，則可表現(xiàn)出嚴重的臨床癥狀，有的甚至死亡，給人類健康造成嚴重的威脅[11-12]。因此，加強禽類H7亞型禽流感的監(jiān)測是十分有必要的。

血清抗體與病原核酸檢測是開展禽類H7亞型禽流感監(jiān)測的重要手段。本次血清抗體檢測發(fā)現(xiàn)，在貴州省9個地(州、市)1570份家禽血液樣本中有7份檢出H7型禽流感抗體陽性，抗體陽性率為0.45%(7/1570)，且在6個地(州、市)家禽血液樣本中都能檢出，鑒于此，本研究組對這7份陽性樣本進行了病原核酸檢測，結(jié)果均為陰性。出現(xiàn)抗體陽性的原因可能是：(1)個別家禽存在既往隱性感染的情況；(2)在貴州省養(yǎng)禽場均強制免疫注射H5型禽流感疫苗，這些H5亞型禽流感疫苗中可能存在極少部分與H7型禽流感病毒共同的抗原；(3)在個別雞血清樣本中存在某些非特異性凝集因子。但在養(yǎng)禽場家禽咽-肛拭子和環(huán)境樣本中均未檢出H7亞型禽流感病毒核酸，這說明貴州省家禽養(yǎng)殖場中不存在H7亞型禽流感病毒感染。

禽流感的發(fā)生與流行跟野禽的遷徙活動存在密切的關(guān)系[13-15]。研究表明，野禽遷徙途經(jīng)沿線地區(qū)的家禽禽流感感染率要顯著高于其他地區(qū)，如位于密西西比野禽遷徙路線的美國明尼蘇達州，其家禽禽流感病毒感染率明顯高于沒有野禽遷徙經(jīng)過的其他州[16-17]。本次采集貴州省各個地區(qū)野鳥糞便進行禽流感病毒核酸檢測發(fā)現(xiàn)，處于野禽遷徙路線的畢節(jié)地區(qū)(即威寧草海)的野鳥糞便樣本檢出1份H7亞型禽流感病毒核酸陽性(檢出率為1.67%)，說明這些遷徙野鳥可能存在H7亞型禽流感病毒隱性感染。但隨后調(diào)查組先后2次到該地區(qū)采集野鳥糞便樣本計200份進行檢測，均未檢出H7亞型禽流感病毒核酸，說明這些遷徙的野鳥并未普遍攜帶或隱性感染H7亞型禽流感病毒。但由于貴州省特別是威寧草海是野鳥遷徙的聚居地[18]，發(fā)生H7亞型禽流感疫情的可能性較大，因此應(yīng)加強該地區(qū)禽流感疫情的監(jiān)測，以防止禽流感的發(fā)生與流行。

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(編輯：李文平)

Detection and Analysis of H7 Subtype Avian Influenza in 2015 in Guizhou Province

QIN Wen1, ZHENG Min2, HUA Min2, WAN Run2, WEN Ming2
(1.DepartmentofHealthManagement,GuiyangNursingVocationalCollege,Guiyang550081,China; 2.InstituteofAnimalDiseasesResearch,GuizhouUniversity,Guiyang550025,China)

To master the infection situation of H7 subtype avian influenza (AI-H7) in Guizhou province, the serum samples of poultry were collected to detect the AI-H7 antibodies by HI test, and the samples of swallow-anal swabs and environment and wild bird faeces were gathered to determine the pathogenic nucleic acid of AI-H7 by RT-PCR method. The results showed that the positive rate of AI-H7 antibodies was 0.45% in 1570 of poultry serum samples. And the pathogenic nucleic acid of AI-H7 were not detected in 350 of swallow-anal swabs and 310 of farm environment samples, but 1 sample in 160 of wild bird faeces which the positive rate was 0.63%. These results suggested that there were no infection of AI-H7 in poultry farm, but maybe latent infection in wild birds and should be paid attention.

H7 subtype avian influenza；detection；Guizhou province

2016-11-09

A

1002-1280 (2017) 02-0013-03

S858.3

貴州省百層次創(chuàng)新型人才項目(黔科合人才[2016]4009號)；貴州省科技創(chuàng)新人才團隊建設(shè)項目(黔科合人才團隊[2015]4016號)

秦雯，碩士，講師，從事衛(wèi)生檢疫檢驗教學與科研工作。

文明。E-mail：as.mwen@gzu.edu.cn