姜莉 林霖

哈藥集團世一堂制藥廠 150000

甘草多糖提取純化工藝研究進展

姜莉 林霖

哈藥集團世一堂制藥廠 150000

目的：通過對甘草中提取甘草多糖的工藝進行研究，對其提取的最佳的工藝條件進行判斷。方法：使用單因素試驗來對甘草多糖在提取時產(chǎn)生的影響進行判斷，對實驗實施正交優(yōu)化手段。結(jié)果：甘草多糖在90攝氏度的提取溫度時，提取耗費的時間為30分鐘，料液的配比為1：30g/g，提取的次數(shù)為2次，乙醇濃度的最佳醇沉條件為82%，絮凝耗費的時間為12.5小時。結(jié)論：不同的因素對甘草多糖提取的純度的影響程度不同，影響程度最大的是溫度，其次是料液比、提取時間、提取次數(shù)對于提取的純度影響最小。

甘草多糖；提取純化工藝；進展

對甘草進行提純，提出的一種α-D-吡喃多糖就是我們所說的甘草多糖。甘草是一種比較常見的草本植物，又被稱為國老、粉草、靈通。一般外皮為紅褐色，有一些甘草也呈現(xiàn)出暗褐色，內(nèi)部為黃色，在我國的分布范圍比較廣，是一種既可食用也可用來制藥的多功能植物。我國在近幾年對于甘草多糖的研究進入了一個新的發(fā)展階段，更加重視其提取的精度。本文對從各種客觀因素對于從甘草中提取甘草多糖的純度與提取率的影響程度出發(fā)，進行試驗，希望可以給廣大制藥同行參考的價值。

1 材料與方法

1.1 材料

甘草：市售；甲醇、無水乙醇、苯酚（以上均為分析純），硫酸，甲醇

1.2 儀器與設(shè)備

YP 型電子天平、LSY 電熱恒溫水浴鍋、DG404 真空電熱干燥箱、LG16-W 離心機、QL-901 微型漩渦混合器。

1.3 方法

1.3.1 測定方法

采用苯酚-硫酸比色法測定甘草多糖。

1.3.2 測定原理

甘草多糖與濃度硫酸發(fā)生反應(yīng)，在高溫的環(huán)境中發(fā)生水解的現(xiàn)象，產(chǎn)生多糖這種物質(zhì)之后，以最快的速度脫水成為糠醛的衍生物，由于實驗中使用了濃度硫酸，使得實驗環(huán)境中酸度較大，糠醛的衍生物與苯酚也發(fā)生反應(yīng)，起到顯色的效果，產(chǎn)生了橙黃色的新物質(zhì)，糖濃度C與吸光度A值在490nm的波長處呈現(xiàn)出線性的關(guān)系，實驗人員可以通過比色法對甘草多糖的含量進行測定。

1.3.3 配置標準溶液

將實驗之前準備好的呈現(xiàn)干燥狀態(tài)的葡萄糖通過天平稱取20毫克，將稱好的葡萄糖放置在容量瓶之中，容量瓶的容量為500毫升，再將水加入到容量瓶之中，將葡萄糖稀釋，當稀釋的溶液達到刻度線的位置，再將容量瓶搖晃均勻，取得標準溶液。

1.3.4 配置苯酚溶液

使用天平稱取苯酚藥品80g，放置在容量瓶中，容量瓶的容量與配置標準溶液的容量瓶相同，加入20克水進行稀釋與溶解，保證得到的苯酚溶液為百分之八十的濃度，將苯酚溶液存放在冰箱中保存，避免光照。采取同樣的方法再配置出濃度為百分之六的溶液同樣放置在冰箱中進行隔離保存。

1.3.5 對各種客觀條件因素的測定

測定料液配比。使用天平稱取粉末狀的甘草 5份，每份的質(zhì)量為1g，將這五份甘草分別放置在容量為250毫升的燒瓶中，再依次加入35、30、25、20倍的純凈水，保持水浴的溫度為100攝氏度，回流提取的時間為一小時，浸提溶液達到100毫升時就可以對燒瓶中的水進行定容，從中取出2毫升放置在容量為10毫升的試管中，通過硫酸-苯酚法進行吸光度的測定。

提取溫度影響。稱取5份甘草粉末各1.0 g，置于250 m L 圓底燒瓶中，各加入15倍水，分別在 40、50、60、70、80、90、100 ℃水浴下，回流提取 1 h，離心分離（5 000 r/min，15min），浸提液至100mL容量瓶蒸餾水定容，取2 mL于10mL試管中用硫酸-苯酚法測其吸光度值。

稱取5份甘草粉末各1.0 g，置于250 mL 圓底燒瓶中，各加入15倍水，70℃水浴下，分別回流提取0.5、1、1.5、2、2.5、3 h，離心分離（5 000 r/min，15 min），浸提液至100mL容量瓶蒸餾水定容，取2mL于10m試管中用硫酸-苯酚法測其吸光度值。

稱取5份甘草粉末各 1.0 g，置于250 mL圓底燒瓶中，各加入 15倍水，70 ℃水浴下，分別回流提取 1、2、3、4、5、6、7、8 次，每次提取 0.5 h，離心分離（5 000 r/min，15 min），浸提液至 100 m L容量瓶蒸餾水定容，取 2 m L于 10 m L 試管中用硫酸-苯酚法測其吸光度值。

按照最佳提取工藝進行提取，然后再用醇沉最佳條件進行純化，得出甘草多糖的提取率

2 結(jié)果

取粉碎樣品，提取條件為 100 ℃、1 h、提取次數(shù)1 次，料液比分別為 1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35 g/g。甘草多糖提取量隨料液比的增大而增加。當料液比大于 1∶30 g/g 時，甘草多糖提取量緩慢降低。

取粉碎樣品，提取條件為料液比 1∶15 g/g、提取時間 1 h、提取次數(shù) 1 次，溫度分別為 40、50、60、70、80、90、100 ℃。提取溫度由 40 ℃增加到 70 ℃時，甘草多糖提取量隨溫度的提高而上升，當溫度超過 70 ℃以后，繼續(xù)提高溫度，甘草多糖的提取量緩慢下降。

取粉碎樣品，提取條件為料液比 1∶15g/g、溫度 70 ℃、提取次數(shù)為 1 次，提取時間分別為 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 h。在提取時間 1 h 時提取率較高，隨著時間的延長，提取率下降。

取粉碎樣品，提取條件為料液比 1∶15g/g、溫度 70 ℃，提取時間為 0.5 h、提取次數(shù)分別為 1、2、3、4、5、6、7、8 次。隨著提取次數(shù)的增加，提取率不斷提高，當增加到 6 次后，提取率緩慢下降。

根據(jù)甘草多糖提取正交試驗及方差分析結(jié)果，單因素對提取效果的影響順序為：溫度＞料液比＞提取時間＞提取次數(shù)，其中溫度具有顯著性，料液比和提取時間較顯著，提取次數(shù)不顯著；甘草多糖提取最佳工藝條件為，即溫度 90 ℃，料液比 1∶30 g/g，時間0.5 h，提取次數(shù)2次。按最佳條件進行驗證，甘草多糖提取率為59.80 %

根據(jù)醇沉條件正交試驗及方差分析結(jié)果，單因素對醇沉條件的影響順序為：乙醇濃度＞絮凝時間＞醇沉溫度，其中乙醇濃度具有顯著性，絮凝時間和醇沉溫度較顯著，，即乙醇濃度82 %，絮凝時間 12.5 h，室溫下醇沉。

3 討論

甘草多糖屬于一種天然性的植物多糖，能夠有效地抵抗病毒以及腫瘤，還能提高人體的免疫力，常被用于制藥之中，甘草多糖有比較好的抵抗病毒效應(yīng)，能夠抑制艾滋病毒，甚至可以達到高達百分之三十以上的抑制率，為了使甘草多糖能夠發(fā)揮出更多的藥效，對于甘草多糖的提取以及純化工作就極其重要了，本文分析了我國的提取與純化甘草多糖工藝的手段，能夠在一定程度上提升對于甘草的提純水平。甘草多糖能夠?qū)毎母鞣N生面現(xiàn)象進行調(diào)節(jié)，對于免疫細胞的調(diào)節(jié)工作有著獨特的效果，主要功能為保健，能夠加強免疫細胞之間的傳遞以及感受，不僅僅能夠作用于藥品，還能在食品以及工業(yè)等多種領(lǐng)域中發(fā)揮作用。

研究表明，甘草多糖可作為抗病毒制劑，影響病毒合胞體的形成，對牛艾滋病病毒（BIV）具有一定的抑制作用，抑制率為36.2%；對腺病毒Ⅲ型（AdVⅢ）和柯薩奇病毒（CBV3）具有明顯的抑制與直接滅活作用，可用于治療和預(yù)防病毒感染。甘草多糖具有免疫增強和腫瘤抑制作用，能促進小鼠血清溶血素IgM和IgG的生成，提高抗體生成細胞水平和胸腺、脾臟指數(shù)，增強巨噬細胞的吞噬活性，抑制腫瘤細胞S180的生長。甘草多糖對細菌有較強的抑菌作用，其最低抑菌濃度（MIC）值分別為枯草芽孢桿菌6.25μg/mL、大腸桿菌12.5μg/mL。

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R567.7+1

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1672-5018（2017）02-331-1