劉 斌，胡慧瓊

(1、荊州市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北荊州434020；2、湖北中醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校生免教研室，湖北荊州434020)

荊州地區(qū)女性生殖道沙眼衣原體、解脲脲原體感染情況分析

劉 斌1，胡慧瓊2

(1、荊州市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北荊州434020；2、湖北中醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校生免教研室，湖北荊州434020)

目的探討荊州地區(qū)女性生殖道分泌物沙眼衣原體（CT）、解脲脲原體（UU）感染與不孕不育及婦科炎癥之間的相關(guān)性情況分析。方法采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（FQ－PCR）對(duì)1962例不孕不育癥患者、1553例婦科炎癥患者、858例健康體檢者的生殖道分泌物進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果不孕不育組的生殖道分泌物感染UU陽(yáng)性率為26.7%，CT陽(yáng)性率為5.5%，CT+UU陽(yáng)性率3.1%，明顯高于同期健康體檢組的UU陽(yáng)性率11%，與CT陽(yáng)性率0.9%，CT+UU陽(yáng)性率0.2%，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。婦科炎癥組的生殖道分泌物感染UU陽(yáng)性率為58.1%，CT陽(yáng)性率為12%，CT+UU陽(yáng)性率11.1%遠(yuǎn)高于不孕不育組和健康體檢組，與健康體檢組相對(duì)比差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論生殖道CT、UU感染是導(dǎo)致女性不孕不育和婦科炎癥的重要因素，把CT、UU列入女性常規(guī)檢測(cè)中非常必要。

沙眼衣原體；解脲支原體；不孕不育；婦科炎癥；FQ－PCR

生殖道CT、UU通過(guò)性傳播所致的的感染日益增多，且有逐年上升趨勢(shì)[1]。它們是影響人類(lèi)生殖健康的重要病原體，其感染者是不孕不育和婦科炎癥的高發(fā)人群[2]。隨著分子生物學(xué)診斷技術(shù)的迅猛發(fā)展，檢測(cè)生殖道病原體已發(fā)展到實(shí)時(shí)FQ－PCR法。FQ－PCR具有高靈敏度、高特異性、高精確性、高效率、污染小等特點(diǎn)，為臨床及科研提供了及時(shí)、準(zhǔn)確、可靠的依據(jù)[3]。本文旨在探討不孕不育癥患者及婦科炎癥患者生殖道CT、UU的感染現(xiàn)狀，為荊州地區(qū)不孕不育癥診斷與治療提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源選擇2015年6月至2016年5月在我院生殖醫(yī)學(xué)門(mén)診就診的不孕不育癥女患者1962例作為不孕不育組，年齡25～43歲，平均年齡（30.4± 2.8）歲，分別以同期在我院婦科門(mén)診有婦科炎癥癥狀初次就診患者1553例為婦科炎癥組，年齡20～48歲，平均年齡（31.2±1.6）歲，及同期在我院婦科體檢無(wú)陰道炎陽(yáng)性體征且正常育有子女的婦女人群858例健康體檢組，年齡22～43歲，平均年齡（31.3±5.6）歲。用窺陰器顯露女性宮頸，使用無(wú)菌生理鹽水棉球洗去宮頸外口分泌物，將無(wú)菌棉拭子伸入宮頸管內(nèi)，達(dá)到鱗柱狀上皮交界處，停15－20s鐘后旋動(dòng)棉試子采集宮頸分泌物，將取樣后的棉拭子放入無(wú)菌試管中，密閉送檢。

1.2 儀器與試劑儀器為ABI 7300型全自動(dòng)熒光定量PCR儀，CT－DNA及UU－DNA檢測(cè)試劑均由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司生產(chǎn)提供。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 檢測(cè)步驟在無(wú)菌標(biāo)本試管中加入1ml無(wú)菌生理鹽水，充分震蕩搖勻，吸取液體轉(zhuǎn)至1.5ml離心管中，12000r/min離心5min，棄去上清。沉淀直接加50ul DNA提取液充分混勻，金屬浴100℃恒溫處理10min。12000r/min離心5min。FQ－PCR可對(duì)同1例標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)CT、UU兩種病原體。樣本處理及DNA提取嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)操作。

1.3.2 DNA的擴(kuò)增與結(jié)果判讀分別吸取2ul樣品DNA、質(zhì)控品DNA和陽(yáng)性定量參考品于擴(kuò)增管中，8000r/min離心數(shù)秒后上機(jī)擴(kuò)增，每次檢測(cè)均設(shè)陽(yáng)性、陰性對(duì)照和空白對(duì)照。擴(kuò)增參數(shù)為：93℃預(yù)變性120s；93℃45s→55℃60s 10個(gè)循環(huán)，作為熒光本底信號(hào)；93℃30s→55℃45s 30個(gè)循環(huán)，55℃時(shí)采集熒光。擴(kuò)增結(jié)果以Ct值表示，根據(jù)陽(yáng)性定量參考品擴(kuò)增結(jié)果分析并調(diào)節(jié)基線(xiàn)和閾值，使標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖達(dá)到最佳，線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)0.97≤r≤1。若增長(zhǎng)曲線(xiàn)不呈S型或Ct≥30，則判樣品的DNA含量小于檢測(cè)下限，結(jié)果為陰性；如果增長(zhǎng)曲線(xiàn)呈S型且Ct≤27，結(jié)果為陽(yáng)性。如果27≤Ct＜30為實(shí)驗(yàn)灰區(qū)，需重復(fù)實(shí)驗(yàn)一次，若需重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果增長(zhǎng)曲線(xiàn)呈S型且Ct＜30，則結(jié)果為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料以率表示，感染率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.01為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不孕不育組、婦科炎癥組與健康體檢組CT、UU檢測(cè)結(jié)果比較，不孕不育組CT陽(yáng)性率為5.5%，UU陽(yáng)性率為26.7%，同時(shí)感染CT+UU陽(yáng)性率為3.1%，婦科炎癥組CT陽(yáng)性率為12%，UU陽(yáng)性率為58.1%，同時(shí)感染CT+UU陽(yáng)性率為11.1%，健康體檢組CT陽(yáng)性率為0.9%，UU陽(yáng)性率11%，同時(shí)感染CT+UU陽(yáng)性率為0.2%。不孕不育組和婦科炎癥組CT陽(yáng)性率、UU陽(yáng)性率、CT+UU陽(yáng)性率均明顯高于健康體檢組，特別是婦科炎癥組UU感染率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于健康體檢組。詳細(xì)見(jiàn)表1。

表1 不孕不育組、婦科炎癥組與健康體檢組的CT、UU檢測(cè)結(jié)果[n（%）]

2.2 把不孕不育組和婦科炎癥組CT陽(yáng)性率、UU陽(yáng)性率、CT+UU陽(yáng)性率分別與健康體檢組進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，其均P＜0.01，表示差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

隨著社會(huì)交往日益頻繁，人們的性意識(shí)在逐漸發(fā)生變化，不潔性行為導(dǎo)致的各種泌尿生殖道疾病也快速蔓延。近年來(lái)，我國(guó)女性的不孕不育患者日益增多。不孕不育病因復(fù)雜，其中與生殖道有關(guān)的不孕大約占20%～60%。CT和UU是泌尿生殖道的常見(jiàn)致病菌，主要通過(guò)親密接觸、性交來(lái)傳播[4]，其中UU感染普遍比CT感染率高[5]，其感染引起的尿道炎、宮頸炎、陰道炎、流產(chǎn)和不孕越來(lái)越引起人們的關(guān)注[6]。

本文發(fā)現(xiàn)CT、UU在荊州地區(qū)不孕不育與婦科炎癥人群里均有較高感染率。婦科炎癥組UU、CT、CT+UU的陽(yáng)性率最高；不孕不育組各項(xiàng)陽(yáng)性率略低于婦科炎癥組，但明顯高于健康體檢組。不孕不育組和婦科炎癥組CT、UU、CT+UU感染率與健康體檢組對(duì)比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01），提示CT、UU與不孕不育關(guān)系和婦科炎癥密切相關(guān)。解脲支原體、沙眼衣原體感染可能是不孕不育癥和婦科炎癥的發(fā)生率增高的重要原因[7]。其發(fā)生機(jī)制可能為：CT感染生殖腔道后產(chǎn)生內(nèi)毒素物質(zhì)引發(fā)劇烈的炎癥反應(yīng)，從而導(dǎo)致黏膜細(xì)胞壞死、輸卵管纖毛運(yùn)動(dòng)停滯，生殖道黏膜受損使免疫細(xì)胞有可能直接接觸精子而產(chǎn)生抗精子抗體，引起不孕[8]。另外，本研究三個(gè)組別均顯示，UU感染率遠(yuǎn)高于CT感染率，提示女性非淋菌性炎癥里主要以UU感染為主。這與一些研究結(jié)果相一致[9]。UU感染女性后，可黏附于輸卵管黏膜上皮細(xì)胞，通過(guò)細(xì)胞免疫誘導(dǎo)機(jī)體巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞產(chǎn)生腫瘤壞死因子，因支原體分解尿素產(chǎn)生銨根離子破壞作為天然屏障的陰道黏膜，對(duì)性器官造成炎性損傷，進(jìn)而影響陰道環(huán)境，而UU還可干擾精子獲能、頂體反應(yīng)，減少精子存活率，進(jìn)而導(dǎo)致患者產(chǎn)生免疫性不孕[10]。CT和UU甚至還可以經(jīng)過(guò)宮頸管進(jìn)入子宮再逆行感染輸卵管盆腔，從而引起輸卵管炎及盆腔炎，引起輸卵管不通，造成宮外孕及不孕[11]。

綜上所述，荊州地區(qū)CT和UU感染與不孕不育和婦科炎癥密切相關(guān)。對(duì)于不孕不育和婦科炎癥人群，CT、UU感染已經(jīng)是一個(gè)不能忽視的因素。因此，CT、UU可以列為孕前體檢及早孕婦女的常規(guī)檢查項(xiàng)目，早發(fā)現(xiàn)、并盡早治愈會(huì)對(duì)優(yōu)生優(yōu)育具有非常重要的作用。

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