■文/山東農(nóng)業(yè)大學動物科技學院 陳同煜 彭 濤 王玉超 古金元 胡東方 劉思當 秦四海

某規(guī)模化育肥豬場呼吸道疾病的診斷與防控

■文/山東農(nóng)業(yè)大學動物科技學院 陳同煜 彭 濤 王玉超 古金元 胡東方 劉思當 秦四海

冬季作為豬呼吸道疾病的高發(fā)季節(jié)，大小豬場尤其是豬舍條件簡陋或經(jīng)長途運輸?shù)呢i群患呼吸道疾病的風險顯著增加。山東某規(guī)?；守i場通過長途運輸購進某種豬公司60日齡左右的仔豬1,000多頭，進場1周豬群即出現(xiàn)咳嗽、氣喘、發(fā)熱并伴有腹瀉癥狀，發(fā)病率20%，病死率10%，是一起傳播迅速的急性呼吸道疾病。通過病死豬剖檢診斷、細菌分離鑒定、組織病理學檢查、ELISA試驗和分子生物學檢測，確診為一場由應激繼發(fā)的呼吸道細菌感染，并導致豬群對重要病毒病抵抗力下降，通過藥敏試驗選擇敏感藥物，對豬群實施了科學的藥物防治并對相關(guān)病毒性疾病進行了免疫，使該豬場疫情得以迅速控制，挽回了巨大的經(jīng)濟損失。

豬；呼吸道疾??；診斷；防控

豬呼吸道疾病是危害豬場穩(wěn)定生產(chǎn)的首要疾病，因其致病因素復雜，涉及細菌、病毒、支原體、寄生蟲、不良的環(huán)境及飼養(yǎng)管理等，往往難究其根源，因此稱其為呼吸道疾病綜合征(PRDC)。隨著疫苗制品的質(zhì)量提高和養(yǎng)殖戶免疫意識的增強，豬場病毒性疾病的防控顯著改善，但卻輕視了細菌性疾病對豬呼吸道的危害。近年來豬場PRDC頻發(fā)，尤其是許多中小規(guī)模豬場或散養(yǎng)戶由于引種或外購仔豬育肥使該病的發(fā)生風險顯著增加，多數(shù)豬場在購豬1月內(nèi)即出現(xiàn)不同程度的疫情。通過多起病例檢測發(fā)現(xiàn)，在危害豬呼吸道的細菌性疾病中，支原體、副豬嗜血桿菌、傳染性胸膜肺炎放線桿菌以及巴氏桿菌占據(jù)了主導位置，該類病菌通常條件下不會出現(xiàn)大規(guī)模暴發(fā)，以隱性感染居多，在冷熱交替、氣候突變、長途運輸或飼料改變等應激誘發(fā)狀態(tài)下易引起PRDC流行，?；彀l(fā)或并發(fā)病毒性疾病，使病情復雜化。下面介紹一起規(guī)?；瘜I(yè)育肥豬場呼吸道疫情的診斷與防治，為豬場呼吸道疾病的診斷防控提供參考借鑒。

1 背景

山東省某規(guī)模化專業(yè)育肥豬場于2016年12月1日遠距離引進某種豬公司1,600頭20～30kg保育豬育肥，進場1周后豬群即出現(xiàn)部分仔豬發(fā)燒(39.5～40.5℃)、咳嗽、氣喘，并有腹瀉病癥，有的病豬表現(xiàn)耳朵發(fā)紺、被毛粗亂、消瘦癥狀，以呼吸道病癥最為明顯，短時間內(nèi)發(fā)病率高達20%，死亡率10%，仔豬前期免疫程序不明，發(fā)病后經(jīng)緊急投服氟苯尼考、阿莫西林及中藥，效果不佳，遂前來就診。

2 綜合診斷

2.1 病豬臨床檢查

送檢病豬主要表現(xiàn)咳嗽、氣喘，呈明顯腹式呼吸，體表被毛粗亂、精神沉郁、瘦弱、耳朵發(fā)紺等癥狀。

2.2 病豬剖檢病變

下頜及肺門淋巴結(jié)腫大出血，腹股溝及腸系膜淋巴結(jié)顯著腫大(圖1-A)；肺臟硬實暗紅色腫脹，小葉間質(zhì)水腫增寬，有的被膜附有纖維蛋白滲出物(圖1-B)；有的發(fā)生纖維素性心包炎，心臟呈“絨毛心”樣變(圖1-C)；胸腔、腹腔積液(圖1-D、E)；肝臟淤血并附有纖維素；有的病豬結(jié)腸黏膜出血、潰瘍(圖1-F)。

圖1 病豬剖檢病變

2.3 組織病理學病變

對剖檢豬的淋巴結(jié)、脾臟、腎臟、心臟、肺臟、腦組織采樣，10%中性福爾馬林溶液固定，常規(guī)方法制作石蠟切片，H.E染色，鏡檢。可見淋巴結(jié)毛細血管充血、漿液滲出，呈漿液性淋巴結(jié)炎病變(圖2-A)；脾臟充血、出血，呈敗血脾病變(圖2-B)；肺間質(zhì)充血，肺泡內(nèi)大量漿液、纖維素滲出，呈大葉性肺炎病變(圖2-C)；腎間質(zhì)淤血、腎小管上皮細胞變性壞死(圖2-D)；心肌纖維呈現(xiàn)空泡變性(圖2-E)；腦血管充血，神經(jīng)元空泡變性、壞死(圖2-F)。

2.4 病原學和血清學檢查

因該場豬群發(fā)病率和死亡率均較高，首先懷疑是否有藍耳病野毒感染，除對病死豬剖檢，采集腦、脾臟、肝臟、腎臟、淋巴結(jié)及扁桃體組織液氮保存，同時隨機采集發(fā)病豬群血清18份，離心，-20℃?zhèn)浯?。將凍存于液氮中的組織病料解凍后取適量組織加入滅菌PBS液并研磨成勻漿，9,000rpm離心4min，取上清液，同時分成18份血清，每份吸出20μL折合1份樣品，使用北京全式金EasyPure Viral DNA/RNA kit(批號為K10314)提取病毒核酸。根據(jù)GenBank中公布的序列設計豬藍耳病病毒片段為372bp的特異性引物，用PCR/RT-PCR方法擴增，將擴增產(chǎn)物在1.5%的瓊脂糖凝膠中電泳，紫外凝膠成像儀下?lián)l帶位置判定病豬的病原感染狀況。

使用韓國金諾試劑盒對備存血清進行豬瘟、藍耳病、偽狂犬病毒gE、2型圓環(huán)病毒抗體水平檢測，4種病毒檢測均按照說明書步驟嚴格規(guī)范操作。判定標準及檢測結(jié)果如下：

豬瘟病毒(CSFV)：阻斷率≥40%為陽性；阻斷率＜40%為陰性。

豬藍耳病病毒(PRRSV)：S/P值≥0.40為陽性；S/P＜值0.40為陰性。

豬偽狂犬病病毒gE(PRV gE)：S/ N≤0.6為陽性；S/N＞0.6為陰性。

豬2型圓環(huán)病毒(PCV 2)：S/ P≥0.4為陽性；S/P＜0.3為陰性，之間為可疑。

圖2 病豬組織病理學變化

圖3 1.5%瓊脂糖凝膠電泳

由表1可知：部分豬只豬瘟抗體檢測陰性，且均勻度較差，豬瘟免疫狀態(tài)較差，發(fā)病風險較大。藍耳抗體全部陽性，離散度較大，豬群藍耳病病毒活躍，存在發(fā)病風險。偽狂犬gE抗體陽性率較高，雖病豬未表現(xiàn)神經(jīng)癥狀，但嚴重的呼吸道病癥與之不無關(guān)系。2型圓環(huán)病毒抗體幾乎全部陽性，由于該豬群免疫過一次圓環(huán)病毒疫苗，鑒于發(fā)病豬腹股溝及腸系膜淋巴結(jié)顯著腫大，不能排除豬群存在圓環(huán)病毒感染，導致豬只體質(zhì)下降，從而促進呼吸道疾病的發(fā)生。

2.5 細菌分離鑒定及藥物敏感試驗

采集不同病豬肺組織分別劃線接種于含新生牛血清(終濃度10%)和NAD(終濃度20g/mL)的TSA培養(yǎng)基及鮮血瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)24～48h后TSA培養(yǎng)基可見針尖大小，無色透明，光滑濕潤的菌落形態(tài)，鮮血瓊脂平板可見淡灰色、圓形、濕潤、露珠樣小菌落。革蘭氏染色鏡檢，觀察到TSA培養(yǎng)基菌體呈革蘭氏陰性細小桿菌，有多種不同形態(tài)，從單個球桿菌到細絲桿菌不等(圖4)；鮮血瓊脂平板菌體為革蘭氏陰性短桿菌或球桿菌，散在或成雙(圖5)。初步診斷疑似副豬嗜血桿菌(HPS)與巴氏桿菌(PM)混合感染。同時，挑取細小單菌落接種于含新生牛血清(終濃度10%)和NAD(終濃度20g/mL)的TSB液體培養(yǎng)基中進行增菌，37℃，12h后挑取菌液進行副豬嗜血桿菌(HPS)和巴氏桿菌(PM)特異性PCR鑒定。

分別挑取兩種細菌及培養(yǎng)基其他形態(tài)菌落均勻涂布于新鮮血瓊脂平板上，選取頭孢噻呋鈉、強力霉素、氟苯尼考、嗯喏沙星、阿莫西林、慶大霉素、丁胺卡那霉素、磺胺間甲氧嘧啶8類藥敏片，每片藥物含量10μg。無菌鑷子將藥敏片按一定間隔分別平貼于培養(yǎng)基表面，于37℃CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。根據(jù)抑菌圈直徑(?)判定細菌對藥物的敏感程度，判定標準為：?≥25mm為極度敏感；15mm≤?＜25mm為高度敏感；10mm≤?＜15mm為中度敏感；?＜10mm為低度敏感；無抑菌圈則為耐藥。結(jié)果顯示：頭孢噻呋鈉、丁胺卡那霉素極度敏感，恩諾沙星、磺胺間甲氧嘧啶高度敏感，阿莫西林、慶大霉素、強力霉素、氟苯尼考低度敏感。

表1 4種病毒血清抗體檢測結(jié)果

表2 PCR/RT-PCR引物序列

圖4 分離菌株革蘭氏染色 200X

圖5 分離菌株革蘭氏染色 200X

圖6 1.5%瓊脂糖凝膠電泳

3 疾病診斷

綜合分析實驗室檢測結(jié)果，導致本次疫情的主要原因是長途運輸應激所誘發(fā)的以副豬嗜血桿菌和巴氏桿菌為主的細菌急性感染所導致的以大葉性肺炎為主要病變特征的重癥PRDC，且不排除支原體、傳染性胸膜肺炎放線桿菌及魏氏梭菌的參與。另外，冬季寒冷、豬舍飼養(yǎng)密度大、通風不良也是引發(fā)本次疫情的重要原因。因豬群運輸應激并造成了呼吸道細菌病的暴發(fā)，進而造成對藍耳病、豬瘟、偽狂犬病免疫抵抗力下降，豬群存在暴發(fā)上述疫病的巨大風險。

4 防控

結(jié)合該豬場流行病學、病原學、血清學及藥敏試驗結(jié)果，制定以下治療方案：

4.1 隔離病豬

及時挑離發(fā)病豬只，單獨隔離飼養(yǎng)，切斷傳染源；嚴控不同圈舍飼養(yǎng)人員和外來人員交互串訪，切斷傳播媒介。

4.2 衛(wèi)生消毒

選用刺激性較小的過氧化劑類消毒液全群緊急消毒，包括豬舍所有空間，疫情期間育肥舍和病豬隔離舍每日消毒一次。

4.3 改善飼養(yǎng)環(huán)境

降低圈舍飼養(yǎng)密度，加強豬舍御寒保暖，及時清理糞污和經(jīng)常通風，保持圈舍清潔干燥及空氣新鮮。

4.4 藥物防治與疫苗加強免疫

4.4.1 對發(fā)病豬只應用頭孢噻呋鈉針劑，5mg/kg體重，肌肉注射，1次/d，連用5d。

4.4.2 全群用包被恩諾沙星和硫酸新霉素20g/100kg飼料，拌料，發(fā)病豬用量加倍，連用5d。

4.4.3 全群電解質(zhì)、維生素C或黃芪多糖飲水，增強豬只抵抗力，減少應激反應。

4.4.4 待疫情穩(wěn)定后，全群普免1次高效豬瘟細胞疫苗，間隔1周普免偽狂犬弱毒疫苗，以平衡豬群抗體均勻度，減少隱性感染豬只的排毒和臨床癥狀。

經(jīng)過實施以上防治措施，該豬場疫情得到有效控制，短時間內(nèi)恢復穩(wěn)定生產(chǎn)。■