丁 麗，朱 恒，張海宏，楊 洋，韓冬梅，王志東，鄭曉麗，董 磊， 閆洪敏，劉 靜，朱 玲，薛 梅，郭子寬，王恒湘

(1. 中國人民解放軍空軍總醫(yī)院血液科，北京 100142；2. 軍事醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所，北京 100850；3. 中國人民解放軍空軍總醫(yī)院普外科，北京 100142； 4. 軍事醫(yī)學科學院放射與輻射醫(yī)學研究所，北京 100850)

研究報告

小鼠脾臟間充質(zhì)干細胞調(diào)節(jié)T淋巴細胞的增殖與活化

丁 麗1，朱 恒2，張海宏3，楊 洋1，韓冬梅1，王志東1，鄭曉麗1，董 磊1， 閆洪敏1，劉 靜1，朱 玲1，薛 梅1，郭子寬4，王恒湘1

(1. 中國人民解放軍空軍總醫(yī)院血液科，北京 100142；2. 軍事醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所，北京 100850；3. 中國人民解放軍空軍總醫(yī)院普外科，北京 100142； 4. 軍事醫(yī)學科學院放射與輻射醫(yī)學研究所，北京 100850)

目的 研究小鼠脾臟間充質(zhì)干細胞(Sp-MSCs)對T淋巴細胞增殖與活化的調(diào)節(jié)作用。方法 采用組織塊法從小鼠脾臟中分離培養(yǎng)出Sp-MSCs，并做多向誘導分化實驗。分離小鼠T淋巴細胞，開展淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗和混合淋巴細胞反應，分別檢測Sp-MSCs對于非特異抗原和同種異體抗原活化的T淋巴細胞的影響。以CFSE流式法檢測Sp-MSCs對活化的T淋巴細胞增殖的影響。采用定量PCR分析Sp-MSCs對T淋巴細胞表達的炎性細胞因子的影響。結果 流式檢測結果顯示Sp-MSsC可以抑制非特異抗原和同種異體抗原引起的T淋巴細胞增殖。Sp-MSCs能夠有效抑制淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗和混合淋巴細胞反應引起的細胞活化。進一步分析發(fā)現(xiàn)，Sp-MSCs抑制T淋巴細胞表達干擾素γ，腫瘤壞死因子α和白細胞介素17A。結論 Sp-MSCs能夠抑制T淋巴細胞增殖與活化，抑制T淋巴細胞表達多種炎性細胞因子。

脾臟間充質(zhì)干細胞；T淋巴細胞；增殖；活化；炎性細胞因子

間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells, MSCs)是一種最早在骨髓中發(fā)現(xiàn)的非造血譜系的干細胞[1,2]，隨后亦在骨、臍帶和脂肪等組織中有發(fā)現(xiàn)。MSCs不僅具有干細胞的共性，同時也具有自身的特性。MSCs像大多數(shù)干細胞一樣，具有多向分化和自我更新能力。更重要的是，MSCs是目前已知的多種干細胞中，較為確定地具有免疫調(diào)節(jié)能力的一類干細胞[3]。相關研究表明， MSCs可以調(diào)節(jié)多種免疫細胞如巨噬細胞、T淋巴細胞、B淋巴細胞、樹突狀細胞和中性粒細胞等發(fā)育分化和凋亡，有助于維持機體免疫反應和免疫穩(wěn)態(tài)[3]。此外，MSCs還調(diào)節(jié)多種免疫細胞的功能，避免過度的機體免疫應答[3]。目前的研究結果表明，MSCs主要通過表達細胞間粘附分子(如細胞間粘附分子1和內(nèi)皮細胞粘附分子1)、釋放一些重要的細胞因子和活性物質(zhì)以及釋放膜微粒等形式來發(fā)揮免疫調(diào)控作用。

脾臟是人和動物體內(nèi)最大的外周免疫器官[4,5]。脾臟內(nèi)含有多種免疫細胞如巨噬細胞、T淋巴細胞、B淋巴細胞、樹突狀細胞和中性粒細胞等，是免疫細胞發(fā)育和成熟的重要器官之一，更是機體的體液免疫中心和細胞免疫。脾臟內(nèi)免疫細胞的發(fā)育功能要受到脾臟微環(huán)境的調(diào)控。多種基質(zhì)細胞混合組成的脾臟基質(zhì)組織既為免疫細胞發(fā)育提供了空間依托，又表達多種活性分子調(diào)節(jié)免疫細胞功能，是脾臟微環(huán)境的重要組成部分[4,5]。因此，脾臟基質(zhì)組織內(nèi)細胞對于免疫細胞發(fā)育和功能的調(diào)控一直是免疫學研究的熱點之一[6,7]。但是，以往的研究多關注于脾臟內(nèi)皮源性基質(zhì)細胞和成纖維細胞等成體細胞的作用，對于處于發(fā)育源頭的脾臟間充質(zhì)干細胞(spleen mesenchymal stem cells, Sp-MSCs)是否參與免疫調(diào)控，國內(nèi)外文獻報道不多?；诖耍覀円揽壳捌诠ぷ鹘⒌哪z原酶消化聯(lián)合組織塊培養(yǎng)法(待發(fā)表數(shù)據(jù))，分離獲得了大量細胞純凈度較高的小鼠Sp-MSCs。在此可靠的細胞模型基礎之上，本研究著重關注了Sp-MSCs對非特異抗原和同種異體抗原活化的T淋巴細胞增殖和活化的影響。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

健康BALB/cl和C57BL/6 小鼠，雌雄不限，6～8周齡，購自維通利華實驗動物技術有限公司(北京)(動物生產(chǎn)許可證號SCXK: 京2012-0001)。

1.2 主要試劑與儀器

干細胞培養(yǎng)專用胎牛血清，磷酸鹽緩沖液(PBS)，高糖DMEM培養(yǎng)基以及α-MEM 培養(yǎng)基均為美國Gibco公司產(chǎn)品；II型膠原酶，胰酶，磷酸化維生素C，β-磷酸甘油，地塞米松，3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(IBMX)，胰島素，堿性磷酸酶試劑盒，油紅O 染液，熒光染料CFSE，刀豆蛋白A(Con A)，定量PCR試劑盒為美國Sigma 公司產(chǎn)品；RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄試劑購自大連寶生物公司；尼龍毛，細胞培養(yǎng)板和培養(yǎng)瓶為美國康寧公司產(chǎn)品；流式細胞儀為美國Becton Dickinson 公司產(chǎn)品；細胞培養(yǎng)箱為英國 Thermo 公司產(chǎn)品；倒置顯微鏡為日本Olympus 公司產(chǎn)品。

1.3 Sp-MSCs的分離培養(yǎng)

無菌條件下以注射器柄將脾臟碾碎，以0.1%的II型膠原酶液消化獲得的基質(zhì)組織1 h，將消化后的基質(zhì)組織種入Sp-MSCs培養(yǎng)體系內(nèi)(含有10%血清的α-MEM)，3 d首次換液。待Sp-MSCs 爬滿培養(yǎng)瓶后，以胰酶消化傳代，取第3～6 代細胞用于相關實驗。

1.4 Sp-MSCs的分化能力鑒定

參照以往建立的方法進行[8]。取第4 代Sp-MSCs，種于24孔培養(yǎng)板中(5× 104/cm2)，加入成骨誘導體系：含有10%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基，地塞米松( 10-7mol /L)，β 磷酸甘油( 10 mmol /L)和維生素C 磷酸鹽( 50 μmol /L)。誘導7 d進行堿性磷酸酶染色。取第4 代Sp-MSCs，種于24孔培養(yǎng)板中(3× 104/cm2)，加入成脂肪誘導體系：含有10%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基，IBMX ( 0.5 μmol /L)，地塞米松( 10- 6mol /L)和胰島素( 10 ng/mL)。誘導7 d后進行油紅染色。

1.5 小鼠T淋巴細胞分離

參照以往發(fā)表的方法進行[9]。無菌條件下以注射器柄碾磨鼠脾臟，將獲得的粗制細胞懸液過200目鋼篩去除團塊，再以Ficoll分離液以800 g離心20 min，從而得到混合的脾臟免疫細胞；以PBS洗凈，將脾臟免疫細胞過填充有尼龍毛的50 mL注射器，收獲的不貼附的細胞即為T淋巴細胞，流式檢測CD3細胞比例高于于80%后用于下一步實驗。

1.6 CSFE法標記T淋巴細胞

用于流式分析的T淋巴細胞需要用熒光染料CFSE標記。簡言之，小鼠T淋巴細胞以含有2%胎牛血清的PBS調(diào)整為1× 107mL，加入CFSE (10 μM)，避光染色20分鐘，以大量含有血清的PBS重懸，洗滌，終止染色。 標記過的T淋巴細胞用于后繼實驗。1.7 淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗(lymphocyte transformation test，LTT)和混合淋巴細胞反應(mixed lymphocyte reaction，MLR)

進行流式分析的T淋巴細胞需預先進行CFSE標記。LTT參照以往的方法開展[2]。T淋巴細胞的密度調(diào)整為1 × 106ml，加入Con A (2 μg/mL)，不同的實驗組添加或者不添加Sp-MSCs共培養(yǎng)，48 h后拍照。收集懸浮的T淋巴細胞上流式分析。MLR則是把小鼠T淋巴細胞加入照射過的同種異基因的小鼠T淋巴細胞混合培養(yǎng)(如BALB/cl小鼠和C57BL/6小鼠的T淋巴細胞)，比例為10:1。不同的實驗組加入或者不加入Sp-MSCs共培養(yǎng)，48 h后拍照，收集懸浮的T淋巴細胞上流式分析。

1.8 T淋巴細胞表達的免疫因子檢測

進行定量PCR分析的T淋巴細胞無需進行CFSE標記。簡言之，收集LTT和MLT實驗中的各組T淋巴細胞，以PBS洗滌，以氯仿法提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄后用做定量PCR的模板。引物序列為：小鼠干擾素γ(IFN-γ)：上游序列- 5′-CTCATGGCTGT TTCTGGCTGTTA-3′，下游序列5′-GACGCTTATGTT GTTGCTGATGG-3′；小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)： 上游序列5′-CACTTGGTGGTTTGCTACGA-3，下游序列5′-GCCTCCCTCTCATCAGTTCTA-3′；小鼠白細胞介素17A(IL-17A)：上游序列5′-TCCAGAAGGCCC TCAGACTA-3′，下游序列5′- AGCATCTTCTCGACC CTGAA-3′, 內(nèi)參GADPH上游序列5′-AAACCCATC ACCATCTTCCA-3′，下游序列5′-GTGGTTCACACC CATCACAA-3′。

1.9 統(tǒng)計學方法

實驗結果以SPSS 16.0軟件分析，數(shù)據(jù)以均值方差表示，以Studentttest 分析，P值小于0.05為統(tǒng)計學意義，P< 0.05 ,P< 0.01。

2 結果

2.1 小鼠Sp-MSCs 抑制T淋巴細胞增殖

如圖1A和1B所示，組織塊法分離獲得的小鼠Sp-MSCs具有經(jīng)典的MSCs成纖維狀細胞的形態(tài)特點，成骨誘導分化后磷酸酶染色陽性，提示其具有成骨分化能力(圖1C)，成脂肪誘導后油紅O染色后可見脂肪滴被染料染為紅色(圖1D)。以上結果表明本研究所用的干細胞的確為MSCs。

CFSE是一種可以摻入細胞的熒光染料，隨著細胞增殖分裂，細胞所攜帶的熒光強度逐漸降低[2]。細胞增殖的速度越快，其熒光強度衰減地越快[2]。在LTT中，T淋巴細胞受到Con A刺激之后，增殖迅速，熒光強度衰減明顯，而Sp-MSCs存在時，T淋巴細胞衰減的速度明顯減慢，表明T淋巴細胞增殖受到了抑制(圖2A)。在MLR中，同種異基因抗原也促使T淋巴細胞顯著增殖。與LTT結果相似，Sp-MSCs表現(xiàn)出了抑制T淋巴細胞增殖能力(圖2B)。

A為原代Sp-MSCs，B為快速增殖的Sp-MSCs， C為Sp-MSCs成骨分化后堿性磷酸酶染色陽性，D為Sp-MSCs成脂肪分化后油紅O染色陽性(標尺=200 μm)圖1 Sp-MSCs及其成骨和成脂肪分化(A) primary Sp-MSCs; (B) Highly proliferating Sp-MSCs; (C) ALP-staining for osteogenically differentiated Sp-MSCs; (D)Oil-red-O staining for adipogenically differentiated Sp-MSCs (Bar=200 μm)Fig.1 Primary culture and the osteogenic and adipogenic differentiation of Sp-MSCs

2.2 小鼠Sp-MSCs 抑制非特異性抗原誘導的T淋巴細胞活化

Con A是一種非特異抗原，具有強大的活化T淋巴細胞能力[9]。如圖3A所示，Con A刺激后， T淋巴細胞顯著活化，聚集成巨大的細胞團塊，而有Sp-MSCs存在時，這種活化作用受到顯著抑制，大多數(shù)T淋巴細胞為松散的單個細胞或者小細胞團(圖3B)，以上結果表明小鼠Sp-MSC 可抑制非特異性抗原誘導的T淋巴細胞活化。

2.3 小鼠Sp-MSCs 抑制同種異基因抗原誘導的T淋巴細胞活化

除了非特異性抗原之外，同種異基因抗原同樣可以活化T淋巴細胞。如圖4A所示，同種異基因的T淋巴細胞混合在一起之后，T淋巴細胞顯著活化，培養(yǎng)皿中可見多個巨大的細胞團塊，而 Sp-MSCs則可以顯著抑制這種活化作用。培養(yǎng)皿中的T淋巴細胞無法聚合為大細胞團塊，更多地變現(xiàn)為為松散小細胞團(圖4B)。此結果表明小鼠Sp-MSCs 可抑制同種異基因抗原誘導的T淋巴細胞活化。

A為Con A刺激引發(fā)T淋巴細胞活化，B為Sp-MSCs抑制CoA誘導的T淋巴細胞活化(標尺=200μm)圖3 Sp-MSCs抑制非特異抗原誘導的T淋巴細胞活化(A) Con A-induced T lymphocyte activation; (B) Sp-MSCs suppressed Con A-induced T lymphocyte activation. Bar=200 μm.Fig.3 Sp-MSCs suppressed non-specific antigen-induced T lymphocyte activation

A為Sp-MSCs抑制LTT實驗，B為Sp-MSCs抑制MLR反應。黑色峰代表的是未增殖的T淋巴細胞，藍色峰代表的是加入了Con A或者異基因抗原的刺激后，顯著增殖的T淋巴細胞，紅色峰代表的是Sp-MSCs抑制相應的T淋巴細胞增殖。圖2 Sp-MSCs抑制T淋巴細胞增殖(A) Sp-MSCs suppressing LTT. (B) Sp-MSCs suppressing MLR. The black empty flags represent low proliferative T lymphocytes. The blue empty flags represent high proliferative T lymphocytes, and the red empty flags indicate that the proliferation of T lymphocytes, suppressed by Sp-MSCs, respectively.Fig.2 Sp-MSCs suppressed the proliferation of T lymphocytes

A為同種異基因的抗原刺激引發(fā)T淋巴細胞活化，B為Sp-MSCs抑制同種異基因抗原誘導的T淋巴細胞活化(標尺=200μm)。圖4 Sp-MSCs抑制同種異基因抗原誘導的T淋巴細胞活化(A) Allogeneic antigen-induced T lymphocyte activation; (B) Sp-MSCs suppressed allogeneic antigen-induced T lymphocyte activation. Bar=200 μm.Fig.4 Sp-MSCs suppressed allogeneic antigen-induced T lymphocyte activation

2.4 小鼠Sp-MSCs抑制T淋巴細胞表達炎性細胞因子

為進一步觀察Sp-MSCs對T淋巴細胞的免疫功能影響，我們用定量PCR檢測了各組T淋巴細胞表達的炎性細胞因子的水平。如圖5和圖6所示，加入Sp-MSCs上可顯著抑制LTT和MLR實驗中T淋巴細胞內(nèi)IFN-γ和TNF-α的表達。有意義的是，與LTT相比，Sp-MSCs抑制MLR中IL-17A的作用更強(圖5和圖6)(*P<0.05 ,**P<0.01.)。該結果提示，Sp-MSCs對于不同抗原活化的T細胞調(diào)節(jié)能力可能存在差異。

圖5 Sp-MSCs抑制非特異抗原活化的T淋巴 細胞表達炎性細胞因子Fig.5 Sp-MSCs suppressed the expression of non-specific antigen-induced proinflammatory cytokines.

3 討論

Friedenstein等[1]研究骨髓造血時，意外地發(fā)現(xiàn)骨髓中除了造血干細胞之外還存在有另外一類非造血干細胞，隨后這種類似成纖維細胞樣的干細胞被命名為MSCs[3]。后繼的研究表明，MSCs并不僅存在骨髓中，骨、脂肪、臍帶等多種組織也存在著MSCs。近年來，MSCs被發(fā)現(xiàn)可以調(diào)控多種免疫細胞的發(fā)育和功能。

基于此，MSC已經(jīng)被應用于治療移植物抗宿主病、類風濕性關節(jié)炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡等疾病，并取得了滿意的效果[3]。

圖6 Sp-MSCs抑制同種異基因抗原活化的T淋巴細胞表達炎性細胞因子Fig.6 Sp-MSCs suppressed the expression of allogeneic antigen-induced proinflammatory cytokines.

Sp-MSCs是脾臟微環(huán)境的重要組成部分，其在空間結構上與多種免疫細胞緊密相鄰，但是目前有關其免疫調(diào)節(jié)能力的報道卻不多。T淋巴細胞是免疫細胞的重要組成部分，既參與細胞免疫，又連接體液免疫，其發(fā)育和功能的改變對于維持機體免疫功能極為重要[10]。本研究基于前期建立的可靠細胞模型開展了Sp-MSCs調(diào)節(jié)T淋巴細胞相關研究。我們發(fā)現(xiàn)，Sp-MSCs可以顯著抑制T淋巴細胞的增殖和活化。這種抑制作用具有廣譜性，即Sp-MSCs不僅抑制非特異抗原引起的T淋巴細胞增殖與活化，而且抑制同種異基因引起的T淋巴細胞增殖與活化。 但是，我們同時注意到，Sp-MSCs對于不同抗原活化后的T淋巴細胞分泌功能具有差異性調(diào)節(jié)作用。一般認為，IFN-γ和TNF-α多由Th1調(diào)節(jié)亞群的T淋巴細胞分泌。IL-17A是IL-17家族的重要一員，多有Th17調(diào)節(jié)亞群分泌，與慢性aGVHD和類風濕性關節(jié)炎等自身免疫性疾病密切相關。本研究中， Sp-MSCs對于非特異抗原和同種異基因抗原誘導的IFN-γ和TNF-α表達均具有強大的抑制作用，提示其抑制Th1調(diào)節(jié)亞群的活化和功能。有趣的是，Sp-MSCs對于同種異基因抗原誘導的IL-17A表達具有良好的抑制作用，而對于非特異抗原誘導的IL-17A表達雖然具有抑制作用，但是沒有統(tǒng)計學差異，提示其調(diào)節(jié)相應T淋巴細胞中T h17 亞群的能力較弱。其內(nèi)在的機制不明，仍有待于進一步的研究[11]。此外，本研究主要基于體外實驗開展，相關發(fā)現(xiàn)亦需在體內(nèi)和不同的動物模型水平進一步驗證。

通過本研究，我們發(fā)現(xiàn)了小鼠Sp-MSCs能夠抑制T淋巴細胞增殖與活化，抑制T淋巴細胞表達多種炎性細胞因子，并且這種調(diào)節(jié)能力存在差異性。

[1] Friedenstein AJ, Chailakhyan RK, Latsinik NV, et al. Stromal cells responsible for transferring the microenvironment of the hemopoietic tissues. Cloning in vitro and retransplantation in vivo [J]. Transplantation, 1974;17(4): 331-340.

[2] Ding L, Zhu H, Yang Y, et al. Functional mesenchymal stem cells remain present in bone marrow microenvironment of patients with leukemia post-allogeneic hematopoietic stem cell transplant [J]. Leuk Lymphoma, 2014; 55(7): 1635-1644.

[3] Uccelli A, Moretta L, Pistoia V. Mesenchymal stem cells in health and disease [J]. Nat Rev Immunol, 2008; 8(9): 726-736.

[4] McGaha TL, Karlsson MC. Apoptotic cell responses in the splenic marginal zone: a paradigm for immunologic reactions to apoptotic antigens with implications for autoimmunity [J]. Immunol Rev. 2016, 269(1): 26-43.

[5] Tan JK, O’Neill HC. Concise review: Dendritic cell development in the context of the spleen microenvironment [J]. Stem Cells. 2007, 25(9): 2139-2145.

[6] Zhang M, Tang H, Guo Z, et al. Splenic stroma drives mature dendritic cells to differentiate into regulatory dendritic cells [J]. Nat Immunol. 2004, 5(11): 1124-1133.

[7] Tang H, Guo Z, Zhang M, Wang J, et al. Endothelial stroma programs hematopoietic stem cells to differentiate into regulatory dendtritic cells through IL-10 [J]. Blood. 2006, 108(4): 1189-1197.

[8] Zhu H, Guo ZK, Jiang XX, et al. A protocol for isolation and culture of mesenchymal stem cells from mouse compact bone [J]. Nat Protoc, 2010, 5(3): 550-560.

[9] Guo ZK, Li H, Li XS, et al. In vitro characteristics and in vivo immunosuppressive activity of compact bone-derived murine mesenchymal progenitor cells [J]. Stem Cells, 2006, 24(4): 992-1000.

[10] Liu Z, Fan H, Jiang S. CD4(+) T-cell subsets in transplantation [J]. Immunol Rev 2013, 252: 183e91.

[11] Wang Y, Chen X, Cao W, Shi Y. Plasticity of mesenchymal stem cells in immunomodulation: pathological and therapeutic implications [J]. Nat Immunol. 2014, 15(11): 1009-1016.

Modulatory effects of mouse spleen-derived mesenchymal stem cells on the proliferation and activation of T lymphocytes

DING Li1, ZHU Heng2, ZHANG Hai-hong3, YANG Yang1, HAN Dong-mei1, WANG Zhi-dong1, ZHENG Xiao-li1, DONG Lei1, YAN Hong-min1, LIU Jing1, ZHU Ling1, XUE Mei1, GUO Zi-kuan4, WANG Heng-xiang1

(1. Department of Hematology, Air Force General Hospital of Chinese PLA, Beijing 100142, China; 2. Institute of BasicMedical Sciences, Beijing 100850; 3. Department of General Surgery, Air Force General Hospital of Chinese PLA, Beijing 100142; 4. Institute of Radiation Medicine, Beijing 100850)

Objective To investigate the modulatory effects of mouse spleen-derived mesenchymal stem cells (Sp-MSCs) on the proliferation and activation of T lymphocytes. Methods The mouse Sp-MSCs were isolated from mouse spleens by using explant tissue culture protocol and the cells were induced to differentiate into osteoblasts and adipocytes. The effects of Sp-MSCs on proliferation of activated T lymphocytes were determined by carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE) staining assay. Furthermore, the effects of Sp-MSCs on lymphocyte transformation test (LTT) and mixed lymphocytes reaction (MLR) were observed, respectively. In addition, the mRNA expression of T cell derived proinflammatory cytokines by Sp-MSCs was detected by quantitative PCR. Results The results of CFSE assay demonstrated that Sp-MSCs suppressed ConA and allogeneic lymphocyte-induced T cell proliferation. Moreover, the Sp-MSCs were capable of suppressing LLT and MLR. Additionally, the results of quantitative PCR revealed that Sp-MSCs significantly suppressed the T cells expressing interferon-γ, tumor necrosis factor-α and interleukine-17A. Conclusions Sp-MSCs are capable of suppressing the proliferation and activation of T lymphocytes as well as the expression of T cell-derived proinflammatory cytokines.

Spleen-derived mesenchymal stem cells; T lymphocytes; Proliferation, Activation; Proinflammatory cytokines; Mouse

國家自然科學基金項目(81500083, 81371945, 81572159, 81101342)；空軍總醫(yī)院院級課題( KZ2014023)；北京市自然科學基金項目(7132133)。

丁麗 (1975-)，女，博士，研究方向：干細胞與血液病學。E-mail: dingli7578@163.com。

王恒湘，碩士，主任醫(yī)師，從事血液系統(tǒng)疾病的研究與治療，E-mail: wanghengxiang123@aliyun.com；郭子寬，博士，研究員，主要從事轉(zhuǎn)化醫(yī)學研究E-mail: guozk@bmi.ac.cn；朱恒，博士，副研究員，主要從事干細胞與再生醫(yī)學研究，E-mail: zhudingdingabc@163.com。

R-33

A

1671-7856(2017) 02-0015-06

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.02.003

2016-06-30