陳姍姍，孫瑩瑩，韋 陽，王恪申

(浙江省醫(yī)學科學院，藥物研究所，杭州 310013)

研究報告

鹽酸格拉司瓊透皮貼劑在Beagle犬中多劑量給藥的藥代動力學研究

陳姍姍，孫瑩瑩，韋 陽，王恪申

(浙江省醫(yī)學科學院，藥物研究所，杭州 310013)

目的 建立鹽酸格拉司瓊透皮貼劑在Beagle犬中的血藥濃度測定方法，通過Beagle犬多劑量給藥，揭示鹽酸格拉司瓊透皮貼劑在Beagle犬體內(nèi)的藥代動力學變化規(guī)律，闡明其在Beagle犬體內(nèi)的藥代動力學特征，提供重要的動力學參數(shù)。方法 Beagle犬給予鹽酸格拉司瓊透皮貼劑6次，每次貼片持續(xù)72 h，每次撤藥和下次給藥間隔24 h。用建立的HPLC-MS/MS法測定血漿中的格拉司瓊的濃度，根據(jù)所得的血漿藥物濃度-時間曲線，計算藥動學參數(shù)。結(jié)果 第1次給藥和第6次給藥后的谷濃度Cmin分別0.0459 ng/mL和0.2593 ng/mL，峰濃度Cmax分別為0.4637 ng/mL和1.3428 ng/mL，AUC0～96分別為18.92 h·ng/mL和40.21 h·ng/mL，第1次給藥和第6次給藥后的Tmax分別為48.3 h和45.3 h，MRT0-96分別為48.9 h和45.84 h。結(jié)論 多次給藥后格拉司瓊在體內(nèi)存在一定的蓄積效應，并在多次給藥后第16天到達穩(wěn)態(tài)。

鹽酸格拉司瓊透皮貼劑；beagle犬；HPLC-MS/MS；藥代動力學

格拉司瓊(granisetron)是一種強效高選擇性外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的5-羥色胺受體(5-HT3)拮抗劑，通過對上端小腸腹部向心神經(jīng)纖維和孤束?；驀I吐化學感受區(qū)的5-HT3受體的阻斷作用，抑制抗腫瘤化療和放療引起的惡心和嘔吐[1]。它的劑型有片劑、膠囊劑、注射劑等，臨床用于預防和放化療引起的劇烈嘔吐，效果良好[2]。與其它止吐藥相比，具有高效、低毒、安全等優(yōu)點[3]。目前，我國有仿制的格拉司瓊注射劑、片劑，并已用于臨床[4]。鹽酸格拉司瓊的現(xiàn)有制劑在臨床使用中存在著不同的局限性，注射劑使用不便，口服藥物有較強的首過效應，生物利用度低，且患者往往因胃腸道反應造成服藥困難[4-5]。鹽酸格拉司瓊透皮給藥系統(tǒng)的研發(fā)就是為避免首過效應，減輕全身不良反應，維持恒定有效的血藥濃度，提高患者順應性，本實驗對鹽酸格拉司瓊貼劑在beagle犬中的多劑量給藥后的藥代動力學特性進行研究。

1 材料和方法

1.1 試藥

鹽酸格拉司瓊貼劑，北京羚銳制藥有限公司研制，批號：080602，規(guī)格：12 mg/40 cm2。

1.2 實驗對象

Beagle犬6只，體重為(8.7±0.35)kg，雌雄各半，由嘉興市嘉安實驗動物養(yǎng)殖有限公司提供，生產(chǎn)許可證號SCXK(浙)2003-0007。

1.3 實驗方法

1.3.1 給藥方案與取血：選取6只健康Beagle犬，體重為(8.7±0.35)kg，雌雄各半，每只犬給藥6次，每次貼片持續(xù)72 h，每次撤藥和下次給藥間隔24 h。分別在不同時間點自犬前臂靜脈抽取靜脈血3 mL于肝素抗凝管中，30 min內(nèi)離心獲取血漿，所獲血漿-20℃冷凍保存待測。采血時間點分別為首次給藥前1 h內(nèi)，給藥后(從貼片固定在皮膚初始算起)2、6、10、14、24、30、36、48、54、60、72、76、80、84、96、120、144和168 h，第3、4、5次給藥后96 h以及第6次給藥后2、6、10、14、24、30、36、48、54、60、72、76、80、84、96、120、144和168 h。

1.3.2 樣品處理與分析：按照已建立的HPLC-MS/MS法[6]對血漿樣品進行處理與色譜分析，得到的數(shù)據(jù)代入血漿標準曲線中，求得血漿藥物濃度。

1.3.3 數(shù)據(jù)分析：根據(jù)測定的藥物血漿濃度-時間數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(Mean ± SD)表示，用DAS2.1擬合房室模型，求算藥代動力學參數(shù)。將根據(jù)第1次給藥后及第6次給藥后藥物血漿濃度-時間數(shù)據(jù)分別用藥代動力學軟件擬合房室模型，估算藥代動力學參數(shù)，并比較藥代動力學參數(shù)的差異，評價多次給藥是否在體內(nèi)造成蓄積。其中Cmax、Cmin、Tmax、Cssmax、Cssmin和Tssmax取實測值。AUC用矩形法求算。平均穩(wěn)態(tài)濃度Cave=AUC0～τ/τ；波動系數(shù)FI=(Cssmax-Cssmin)/Cave，積蓄因子R=Cssmin/Cmin。

2 結(jié)果

2.1 血漿藥物濃度測定結(jié)果

6只Beagle犬多次服用鹽酸格拉司瓊貼片后格拉司瓊血漿濃度-時間數(shù)據(jù)(表1、表2)及平均藥時曲線圖(圖1)，結(jié)果顯示6次給藥后，血漿中格拉司瓊濃度到達穩(wěn)態(tài)，但到達穩(wěn)態(tài)后，血漿峰谷濃度以及AUC與首次用藥相比明顯增大。

2.2 藥代動力學參數(shù)與結(jié)果分析

用DAS 2.1藥代動力學軟件擬合藥代動力學參數(shù)(表3)，結(jié)果提示多次給藥后格拉司瓊在體內(nèi)存在一定的蓄積效應。多次給藥研究表明給藥第16天后血漿中格拉司瓊濃度到達穩(wěn)態(tài)，但到達穩(wěn)態(tài)后，血漿峰谷濃度以及AUC與首次用藥相比明顯增大，第1次給藥和第6次給藥后的谷濃度Cmin分別為0.0459 ng/mL和0.2593 ng/mL，峰濃度Cmax分別為0.4637 ng/mL和1.342 ng/mL，AUC0～96分別為18.92 h·ng/mL和40.21 h·ng/mL，提示多次給藥后格拉司瓊在體內(nèi)存在一定的蓄積效應。第1次給藥和第六次給藥后的Tmax分別為48.3 h和45.3 h，MRT0-96分別為48.9 h和45.84 h，分別略有下降。雖然第1次給藥和第6次給藥后各藥代動力學參數(shù)都出現(xiàn)了比較明顯的改變，但經(jīng)非參數(shù)檢驗表明，除Cmax外這些改變均沒有顯著的統(tǒng)計學意義(表4)。

表1 6條犬第1次使用貼片后的各時間點格拉司瓊血漿濃度(ng/mL)

注：nd 低于檢測限90%

Note. nd: below the detection limit 90%.

服藥天次Administration檢測指標Detectionindexes編號Nnumber123456x-±s第1次1sttimeCmin(ng/mL)00252002960032400635008640038200459±00240Cmax(ng/mL)01980022800922007250021400495004637±03059Tmax(h)367624307648483±229AUC0～96(h·ng/mL)91293129983146100623591892±1066MRT0～96(h)507510410474537499489±44第6次Cssmin(ng/mL)02750039900093205410019100056302593±018586thtimeCssmax(ng/mL)08700228001010022600071100926013428±07248平均Cssave(ng/mL)03276057660197007137032130376904189±01901Tmax(h)721476241472453±309AUC0～96(h·ng/mL)3145553518916852308536184021±1825AUC0-168(h·ng/mL)4029586621798013454648214909±1945AUC0-∞(h·ng/mL)4046587821998146465748624965±1977λ(1/h)00449004500035400244003090040400368±00082T1/2(h)15421541959284522417171974±504MRT0～96(h)5123321842534056542254324584±891MRT0-168(h)537823427160207424225776459125126±1056MRT0-∞(h)543834539614624513461149602575282±1091FI182326465241162231268±112R032018009024027006019±010

表4 單劑量多次服用受試藥物達穩(wěn)態(tài) 前后相關參數(shù)分析表

注：P>0.05：組間差別無顯著統(tǒng)計意義，P<0.05：組間差別有顯著意義，P<0.01：組間差別有極顯著意義

Note.P>0.05: no significant difference between the groups;P<0.05: significant difference between the groups;P<0.01: very significant difference between the groups

3 討論

按照中國藥典的有關規(guī)定，緩控釋制劑需要進行單劑量實驗和多劑量穩(wěn)態(tài)實驗，達穩(wěn)態(tài)后進行血藥濃度波動性研究，從而得出一些緩控釋制劑的藥代動力學參數(shù)。另外求算生物利用度時，用多劑量穩(wěn)態(tài)時的AUC比單劑量的AUC更有價值。基于上述原因，很有必要進行緩控釋制劑的多劑量給藥藥物動力學研究[7]。

因此，本節(jié)對鹽酸格拉司瓊多次給藥后的代謝進行了研究，研究結(jié)果表明，血漿中格拉司瓊濃度在多次給藥后第16天到達穩(wěn)態(tài)，體內(nèi)存在一定的蓄積效應，參數(shù)結(jié)果提示，經(jīng)皮給藥的體內(nèi)滯留時間顯著延長，藥效維持的時間延長，具有良好的緩釋性，并且不用經(jīng)過胃腸道代謝，提高了生物利用度，克服了口服給藥的缺點。對于預防和放化療引起的惡心嘔吐的患者來說，使用鹽酸格拉司瓊透皮貼劑既可以維持持續(xù)平穩(wěn)的血漿藥物濃度達到較長時間藥物療效，又可以減少口服制劑所帶來的嘔吐等不良反應，顯著提高藥物的生物利用度。由多次給藥研究可進一步證實鹽酸格拉司瓊貼劑是一種理想的制劑類型，并且使用方便，在臨床應中具有重要的意義。

[1] 曲中堂，袁若，柴雅琴, 等. 高選擇性5-HT3受體拮抗劑鹽酸格拉司瓊離子選擇性電極的研制與含量測定 [J]. 重慶大學學報(自然科學報)，2009, 38(8): 979-982.

[2] 笪紅遠，凌樹森. 格拉司瓊的研究進展 [J]．中國臨床藥理學雜志，1999；15: 374-380.

[3] 陳新謙，金有豫.《新編藥物學》，第十四版，人民衛(wèi)生出版社，1997. 517.

[4] 陶欣，朱秀平，卓海通, 等. 格拉司瓊片劑人體生物利用度和藥代動力學研究[J]. 中國臨床藥理學雜志，1999, 15(1): 45-47, 67.

[5] 章杰兵，周國華，古卓良, 等. 鹽酸格拉司瓊注射劑臨床療效及其安全性評價[J]. 中國臨床藥理學雜志，2001, 17(1): 31-35.

[6] 陳姍姍，孫瑩瑩，韋陽，等. HPLC-MS/MS法測定Beagle犬血漿中鹽酸格拉司瓊的濃度 [J]. 藥物分析雜志，2013, 33(4): 576-580.

[7] 楊星鋼，聶淑芳，白海嬌, 等. 家犬單劑量和多劑量口服阿昔莫司緩釋制劑的藥代動力學和生物等效性研究 [J]. 藥學學報，2005, 40(5): 457-461.

Pharmacokinetic study of granisetron hydrochloride transdermal patch by multiple administrations in beagle dogs

CHEN Shan-shan, SUN Yin-yin, WEI Yang, WANG Ke-shen

(Institue of Materia Medica, Zhejiang Academy of Medical Sciences, Hangzhou 310013, China)

Objective To establish an HPLC-MS/MS method for determination of the plasma concentration of granisetron hydrochloride administered by transdermal patch in Beagle dogs and evaluate its pharmacokinetics. Methods Six beagle dogs were given topically applied transdermal patches (72 h) for 6 times with an interval of 24 h. HPLC-MS/MS was applied to determine the concentration of granisetron hydrochloride in blood samples, thereafter the pharmacokinetic parameters were calculated. Results The trough concentration of Cmin was 0.0459 ng/mLand 0.2593 ng/mLafter the first-dosage and sixth-dosage of granisetron transdermal patches, respectively. The peak concentration of Cmax was 0.4637 ng/mLand 0.4637 ng/mL, respectively. The AUC0～96was 18.92 h·ng/mLand 40.21 h·ng/mL, respectively. The Tmax was 48.3 hours and 45.3 hours, respectively, and the MRT0-96was 48.9 hours and 45.84 hours, respectively. Conclusions The concentration of granisetron has accumulation effect after repeated administration of granisetron hydrochloride transdermal patches, and it reaches a steady state on the sixteenth day by multiple administrations.

Granisetron hydrochloride patch; Beagle dog; HPLC-MS/MS; Pharmacokinetics.

浙江省科技廳培育創(chuàng)新載體項目(編號：2015F10032)；浙江省中醫(yī)藥科學研究基金項目(編號：2011ZA017)。

陳姍姍(1982-)，女，助理研究員，研究方向：藥代動力學研究。E-mail： cherry0907820@sina.com。

韋陽(1973-)，女，副研究員，研究方向：藥代動力學研究。E-mail： weiyang56@hotmail.com。

R-33

A

1671-7856(2017) 02-0044-05

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.02.008

2016-06-18