孫德君，劉鑫瑩，楊朋欣，秦立鑫，胡瑞紅

（哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司 哈爾濱 150069）

新城疫是一種急性、高度接觸性傳染病，其病原為雞新城疫病毒（Newcastle Disease Virus，NDV），該病的侵害主要對象是雞和火雞，嚴(yán)重威脅了各個(gè)國家禽類的養(yǎng)殖。新城疫感染癥狀有下痢、神經(jīng)機(jī)能紊亂、敗血癥和胃腸道出血等，漿黏膜點(diǎn)狀出血和腺胃黏膜出血是具有診斷意義的病理變化。雞新城疫病毒第一次爆發(fā)是在1926年印尼的巴塔維亞和英國的新城（Newcastle），根據(jù)發(fā)現(xiàn)地的名字被命名為“新城疫”（Newcastle disease，ND），Doyle 在1927年首次分離到了新城疫病毒（NDV）。之后此病在世界各國快速的傳播，并在不同的地區(qū)多次爆發(fā)流行，引發(fā)了極高的死亡率，給世界各國的禽類養(yǎng)殖造成了極大的損失，隨著新城疫疫苗的發(fā)明并正確應(yīng)用，ND的流行才得以得到有效地控制。

我國目前使用的新城疫疫苗主要是弱毒活疫苗，以凍干的形式儲存。國內(nèi)主要使用的新城疫凍干保護(hù)劑為蔗糖、牛奶等，但是存在組方簡單，保護(hù)實(shí)際功能差的缺點(diǎn)。凍干疫苗多需要在-15℃條件下存儲，如果在2～8℃條件下，只能保存4～6月，這給疫苗的儲存和運(yùn)輸帶來了不便。我國研制獸用生物制品耐熱保護(hù)劑相對滯后，在發(fā)達(dá)國家，疫苗主要都是采用耐熱凍干保護(hù)劑。我國雖然在這方面起步晚，但是速度快，已經(jīng)取得了一定的成果。本實(shí)驗(yàn)對我公司研制生產(chǎn)的雞新城疫耐熱凍干保護(hù)劑活疫苗進(jìn)行了保存期試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 疫苗

雞新城疫（La Sota株）耐熱保護(hù)劑活疫苗，批號：01、02、03。

1.2 SPF雞胚

購自北京梅里亞維通實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司。

1.3 方法

將3個(gè)批次的NDV La Sota株耐熱保護(hù)劑活疫苗分別放入37℃、常溫、2～8℃進(jìn)行NDV La Sota株耐熱保護(hù)劑活疫苗保存期試驗(yàn)。疫苗在37℃保存7d、10d、15d，將疫苗分別取出，進(jìn)行病毒含量測定、性狀檢驗(yàn)。疫苗在常溫保存10d、20d、30d，將疫苗分別取出，進(jìn)行病毒含量測定、性狀檢驗(yàn)。疫苗在分別在 4℃保存 9、12、15、18、24、27 個(gè)月，按規(guī)定日期取出疫苗，進(jìn)行疫苗的效力檢驗(yàn)及外觀性狀檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 NDV La Sota株耐熱保護(hù)劑活疫苗37℃保存期試驗(yàn)結(jié)果

NDV La Sota株耐熱保護(hù)劑活疫苗，在37℃保存 7d、10d、15d，按規(guī)定日期分別將凍干疫苗取出，對凍干疫苗進(jìn)行物理性狀檢驗(yàn)、病毒含量EID50測定。結(jié)果表明：3批疫苗37℃放置7d病毒滴度平均下降0.35～0.40個(gè)滴度左右。37℃放置10d病毒滴度下0.54～0.58個(gè)滴度左右。37℃放置15d病毒滴度下降0.95～0.98個(gè)滴度左右。物理性狀均符合規(guī)定。（見表1）

2.2 NDV La Sota株耐熱保護(hù)劑活疫苗常溫保存期試驗(yàn)結(jié)果

NDV La Sota株耐熱保護(hù)劑活疫苗在常溫保存 10d、20d、30d，分別取出，進(jìn)行疫苗的性狀檢驗(yàn)、病毒含量EID50測定。結(jié)果表明：常溫放置10d病毒滴度下降0.26～0.30個(gè)滴度左右。常溫放置20d病毒滴度下降0.39～0.44個(gè)滴度左右。常溫放置30d病毒滴度下降0.89～0.91個(gè)滴度左右。物理性狀均符合規(guī)定。（見表2）

2.3 NDV La Sota株耐熱保護(hù)劑活疫苗2～8℃保存期試驗(yàn)結(jié)果

NDV La Sota株耐熱保護(hù)劑活疫苗在2～8℃保存，6個(gè)月、12個(gè)月、15個(gè)月、18個(gè)月、24個(gè)月、27個(gè)月，分別取出，進(jìn)行NDVLa Sota株耐熱保護(hù)劑活疫苗的性狀檢驗(yàn)、病毒含量。結(jié)果表明：NDV La Sota株耐熱保護(hù)劑活疫苗在2～8℃可以保存24個(gè)月。（見表3）

表1 耐熱疫苗在37℃保存7、10、15dEID50測定結(jié)果

表2 耐熱疫苗在常溫保存10、20、30d測定結(jié)果

表3 耐熱疫苗在4℃保存9、12、15、18、24、27個(gè)月EID50測定結(jié)果

3 小結(jié)與討論

1）NDV La Sota株耐熱保護(hù)劑活疫苗在2～8℃保存保存24個(gè)月后病毒含量下降了0.40～0.52個(gè)滴度，但每羽份的病毒含量為106.10～106.12，仍然符合質(zhì)量檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。

2）目前，大多數(shù)疫苗生產(chǎn)公司生產(chǎn)的凍干活疫苗所使用的保護(hù)劑為蔗糖、脫脂乳，在運(yùn)輸或存儲過程中會受到溫度的影響造成病毒含量的損失。而NDV La Sota株耐熱保護(hù)劑活疫苗可在2～8℃保存，使病毒的滴度不受損失，從而避免了疫苗在運(yùn)輸過程中易造成的凍干疫苗病毒含量下降，造成免疫接種失敗的問題?！?/p>