李瑞香

(陜西省渭南市臨渭區(qū)動(dòng)物疾病控制中心，陜西渭南 714000)

規(guī)?；i場(chǎng)豬圓環(huán)病毒2型的血清流行病學(xué)調(diào)查

李瑞香

(陜西省渭南市臨渭區(qū)動(dòng)物疾病控制中心，陜西渭南 714000)

為了解規(guī)?；i場(chǎng)豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)血清學(xué)流行情況，采用ELISA進(jìn)行PCV2抗體檢測(cè)。結(jié)果表明，運(yùn)城地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)廣泛存在PCV2感染，未免疫接種豬圓環(huán)病毒疫苗的外觀健康豬血清樣品中PCV2抗體平均陽(yáng)性率為49.66%，其中種豬感染率達(dá)67%，哺乳仔豬感染率4.55%，保育豬感染率43%，育肥豬感染率64.71%；外觀健康豬群檢測(cè)結(jié)果提示，隨著年齡的增長(zhǎng)PCV2感染有升高趨勢(shì)。為了進(jìn)一步研究豬圓環(huán)病毒感染各癥候群在規(guī)?；瘓?chǎng)發(fā)病特點(diǎn)及流行規(guī)律，采集臨床疑似斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)、仔豬先天性震顫(Congenital tremors,CT)、豬腎炎皮炎綜合征(PDNS)、豬的繁殖障礙(Reproductive failure)、PCV2相關(guān)性肺炎等癥狀豬血清400份進(jìn)行PCV2抗體檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果顯示，疑似PMWS癥狀PCV2抗體陽(yáng)性率最高，達(dá)86.25%，然后依次是疑似PCV2相關(guān)性肺炎陽(yáng)性率56.25%，疑似PDNS陽(yáng)性率46.25%，疑似繁殖障礙陽(yáng)性率26.25%，最低的是疑似CT陽(yáng)性率11.25%。研究結(jié)果表明，運(yùn)城地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)PCV2感染以PMWS和PCV2相關(guān)性肺炎為主，其次是PDNS和繁殖障礙，仔豬先天性震顫感染率最低。

規(guī)?；i場(chǎng)；豬圓環(huán)病毒2型；血清流行病學(xué)；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是豬圓環(huán)病毒病的主要病原，PCV2造成斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(Post weaning multisystemic wating syndrome,PMWS)、仔豬先天性震顫(Congenital tremors,CT)、豬的繁殖障礙(Reproductive failure)、PCV2相關(guān)性肺炎、豬腎炎皮炎綜合征(Porcine dermatitis and nephropathy syndrome,PDNS)等疫病已受到養(yǎng)豬業(yè)的廣泛關(guān)注[1-3]。PCV2感染豬表現(xiàn)進(jìn)行性消瘦、皮膚蒼白、黃疸、呼吸困難、生長(zhǎng)性能降低和繁殖障礙等癥狀[4-5]。1991年加拿大首次報(bào)道PMWS后，世界上許多國(guó)家相繼報(bào)道；2001年我國(guó)首次報(bào)道PCV2感染，之后該病在我國(guó)的流行呈逐年上升趨勢(shì)[6]。PCV2在臨床上以PMWS最常見(jiàn)，是規(guī)模化豬場(chǎng)最重要的經(jīng)濟(jì)性疫病，PCV2造成豬的免疫抑制、呼吸系統(tǒng)綜合征，又是其他疾病的基礎(chǔ)疾病(“鑰匙病”)，成為影響規(guī)?；i場(chǎng)發(fā)展的主要因素[7]。目前PCV2感染呈全球性流行，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的危害。

為初步掌握規(guī)?；i場(chǎng)豬圓環(huán)病毒2型的血清學(xué)流行情況，本研究對(duì)2014年2月—2014年8月期間收集的10個(gè)未免疫接種豬圓環(huán)病毒疫苗的規(guī)?；瘓?chǎng)外觀健康豬血清592份和臨床疑似PMWS、CT、PDNS、繁殖障礙、PCV2相關(guān)性肺炎等癥狀豬血清400份，進(jìn)行PCV2抗體檢測(cè)。旨在通過(guò)對(duì)未免疫接種豬圓環(huán)病毒疫苗的規(guī)模場(chǎng)血清樣本檢測(cè)，系統(tǒng)分析當(dāng)前規(guī)模化豬場(chǎng)PCV2發(fā)病特點(diǎn)及流行規(guī)律，為PCV2感染所致疾病的診斷和防控奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 豬血清樣品來(lái)源 豬血清樣品采集時(shí)間為2014年2月～2014年8月，血清樣品來(lái)自運(yùn)城地區(qū)10個(gè)未免疫接種豬圓環(huán)病毒病疫苗的自繁自養(yǎng)豬場(chǎng)(母豬存欄100頭以上)，隨機(jī)采集外觀健康豬血清592份，其中母豬血清126份，哺乳仔豬血清110份，保育豬血清118份，育肥豬血清238份。

1.1.2 試劑及儀器

1.1.2.1 試劑 豬PCV2型酶聯(lián)免疫吸附抗體檢測(cè)(ELISA)試劑盒，華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院動(dòng)物病毒室研制，武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司生產(chǎn)。

1.1.2.2 儀器 酶標(biāo)儀，Model55o，Bio-Rad公司生產(chǎn);離心機(jī)、生化培養(yǎng)箱、 微量移液器、自動(dòng)洗板機(jī)、微量振蕩器等。

1.2 方法

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，按照國(guó)家農(nóng)業(yè)部頒標(biāo)準(zhǔn)和ELISA診斷試劑盒操作程序說(shuō)明進(jìn)行操作。

1.2.1 試劑配制 使用前將濃縮洗滌液恢復(fù)至室溫，充分搖勻使沉淀物完全溶解，37℃水浴加熱5 min～10 min，蒸餾水20倍稀釋。

1.2.2 樣品稀釋 按1∶40稀釋待檢血清，陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照1∶4稀釋，吹打均勻。

1.2.3 試驗(yàn)步驟 ①取抗原預(yù)包被的微孔條，用稀釋的洗滌液200 μL/孔洗板后，靜置3 min棄去，如此反復(fù)3次，最后一次用吸水紙拍干。②將稀釋好的待檢樣品100 μL加入檢測(cè)板內(nèi)；稀釋好的陰、陽(yáng)性對(duì)照各設(shè)2孔，每孔100 μL，空白對(duì)照設(shè)1孔，加稀釋液100 μL。貼上封板薄膜后輕輕振搖樣品，37℃孵育30 min。③棄去孔內(nèi)溶液，洗滌液洗板3次，每次靜置3 min后倒掉，拍干。④加入100 μL/孔羊抗豬酶標(biāo)二抗，37℃孵育30 min。⑤用洗滌液反復(fù)洗滌5次，切記用干凈吸水紙拍干。⑥先加底物A液，每孔內(nèi)加50 μL，然后再加底物B液，每孔加50 μL，混勻后室溫避光顯色10 mn。⑦每孔內(nèi)加50 μL終止液后，放置在震蕩器上振蕩1 min。⑧10 min內(nèi)酶標(biāo)儀上測(cè)定各孔的OD 630 nm值。

1.2.4 結(jié)果判定 空白孔調(diào)零，使用酶標(biāo)儀測(cè)出每孔的OD 630 nm值；試驗(yàn)成立條件：陽(yáng)性對(duì)照孔平均OD 630 nm值≥1.0，陰性對(duì)照孔平均OD 630 nm值<0.3則試驗(yàn)成立；待測(cè)樣品孔OD 630 nm值>0.42判為陽(yáng)性，待測(cè)樣品孔OD 630 nm值<0.38的判為陰性，待測(cè)樣品OD 630 nm介于0.38～0.42之間判為可疑。

2 結(jié)果

表1顯示，本次共檢測(cè)血清樣品592份，檢出陽(yáng)性血清294份，10個(gè)豬場(chǎng)全部檢出PCV2抗體，說(shuō)明10個(gè)采樣豬場(chǎng)均有PCV2感染，豬場(chǎng)抗體陽(yáng)性率達(dá)100%，陽(yáng)性率介于32.14%～73.44%，總體平均陽(yáng)性率為49.66%；高于平均陽(yáng)性率的豬場(chǎng)5個(gè)，分別是1場(chǎng)53.57%，6場(chǎng)64.29%，7場(chǎng)73.44%，8場(chǎng)50.82%，9場(chǎng)54.10%；陽(yáng)性率最低的是10場(chǎng)為32.14%。

表2是對(duì)PCV2抗體檢測(cè)結(jié)果分類統(tǒng)計(jì)，按母豬、哺乳仔豬、保育豬和育肥豬四個(gè)階段豬分類統(tǒng)計(jì)。表2顯示，不同豬場(chǎng)不同生產(chǎn)階段豬血清樣品PCV2抗體結(jié)果均呈陽(yáng)性，且有一定差異；檢測(cè)結(jié)果顯示不同生長(zhǎng)階段的豬群中，母豬PCV2抗體陽(yáng)性率最高，達(dá)66.67%，育肥豬陽(yáng)性率64.71%，保育豬43.22%，哺乳仔豬最低為4.55%。2個(gè)場(chǎng)母豬PCV2抗體陽(yáng)性率達(dá)80%以上，育肥豬陽(yáng)性率最高79.17%，4個(gè)豬場(chǎng)存在哺乳仔豬感染情況，7場(chǎng)哺乳仔豬檢出2份陽(yáng)性血清，陽(yáng)性率18.18%，1場(chǎng)、4場(chǎng)、9場(chǎng)分別檢出1份陽(yáng)性，陽(yáng)性率10%。

表1 不同豬場(chǎng)PCV2抗體檢測(cè)結(jié)果

由表3可知，檢測(cè)臨床疑似病豬血清400份，檢出陽(yáng)性血清181份，各類臨床疑似病豬均有陽(yáng)性血清檢出，但陽(yáng)性率存在顯著的差異。其中臨床疑似PMWS檢出陽(yáng)性率最高，達(dá)86.25%(69/80)，然后依次是疑似相關(guān)性肺炎陽(yáng)性率56.25%(45/80)，疑似PDNS陽(yáng)性率46.25%(37/80)，疑似繁殖障礙36.25%(21/80)，最低是臨床疑似CT陽(yáng)性率為11.25%(9/80)。

3 討論

本次檢測(cè)血清樣本來(lái)自運(yùn)城地區(qū)10個(gè)未免疫接種PCV2疫苗的規(guī)?；苑弊责B(yǎng)豬場(chǎng)，采集不同階段的豬群樣本，豬只外觀正常、健康，隨機(jī)采集樣品，具有一定的代表性。因此該檢測(cè)結(jié)果能夠真實(shí)反映PCV2的感染現(xiàn)狀。表1結(jié)果顯示，10個(gè)豬場(chǎng)全部檢出PCV2抗體，表明10個(gè)采樣豬場(chǎng)均有PCV2感染，豬場(chǎng)抗體陽(yáng)性率達(dá)100%；檢測(cè)結(jié)果說(shuō)明，運(yùn)城地區(qū)規(guī)模化自繁自養(yǎng)豬場(chǎng)PCV2感染已經(jīng)十分普遍，尤其以母豬、保育育肥階段豬群PCV2感染壓力大。分析可能與母豬隱性帶毒、產(chǎn)房連續(xù)生產(chǎn)方式、保育育肥豬的連續(xù)飼養(yǎng)以及飼養(yǎng)管理水平低、引種不規(guī)范、防疫混亂等因素有關(guān)，需要引起高度重視。這與邵萌等[7]、張智明等[8]、曹東陽(yáng)等[9]、戴愛(ài)玲等[10]的研究結(jié)果相一致；劉文俊等[2]對(duì)山西5個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)采集病料檢測(cè)結(jié)果顯示，豬圓環(huán)病毒感染陽(yáng)性率為61.54%，同本次試驗(yàn)結(jié)果相近。本次調(diào)查共檢測(cè)592份血清樣品，294份為PCV2抗體陽(yáng)性，PCV2抗體陽(yáng)性率介于32.14%～73.44%之間，平均陽(yáng)性率達(dá)49.66%；該結(jié)果顯示運(yùn)城地區(qū)的規(guī)?；i場(chǎng)存在不同程度的豬圓環(huán)病毒感染，且個(gè)別場(chǎng)感染情況十分嚴(yán)重；分析認(rèn)為這些PCV2陽(yáng)性豬可能處于隱性感染狀態(tài)，只是暫時(shí)未發(fā)病，一旦存在其他致病因子或者誘發(fā)因素，免疫功能抑制，則可能很快發(fā)病[11]。這些處于隱性感染狀態(tài)的豬只將成為豬場(chǎng)重要的傳染源，PCV2可通過(guò)分泌物、飛沫、鼻液、糞尿隨空氣傳播，對(duì)整個(gè)豬群構(gòu)成威脅；因此，應(yīng)該高度重視這些處于隱性感染狀態(tài)的豬，加強(qiáng)PCV2的檢測(cè)工作，這對(duì)控制豬圓環(huán)病毒感染有重要意義。

表2 各階段豬的PCV2抗體檢測(cè)結(jié)果

表3 疑似病豬PCV2抗體檢測(cè)結(jié)果

檢測(cè)結(jié)果分類分析統(tǒng)計(jì)顯示，4個(gè)豬場(chǎng)的哺乳仔豬檢測(cè)到PCV2抗體，其他各場(chǎng)除哺乳仔豬外各階段均檢測(cè)到PCV2抗體，據(jù)此說(shuō)明PCV2在豬群的各個(gè)階段都有感染，以哺乳仔豬感染率最低，母豬和育肥豬感染嚴(yán)重，且隨豬日齡增加PCV2抗體陽(yáng)性率有升高的趨勢(shì)。縱觀10個(gè)場(chǎng)的檢測(cè)結(jié)果，7場(chǎng)、6場(chǎng)的總體陽(yáng)性率最高，這可能與該場(chǎng)母豬PCV2隱性感染率高相關(guān)，7場(chǎng)哺乳階段仔豬檢出2份陽(yáng)性，6場(chǎng)雖然哺乳階段未檢出陽(yáng)性，但保育階段陽(yáng)性率僅低于7場(chǎng)；10個(gè)豬場(chǎng)均顯示母豬階段PCV2抗體陽(yáng)性率高于其他階段，分析認(rèn)為規(guī)模化豬場(chǎng)豬場(chǎng)圓環(huán)病毒的感染壓力主要源于種豬。

本次調(diào)查母豬PCV2的陽(yáng)性率較高，同時(shí)哺乳仔豬PCV2抗體陽(yáng)性率4.55%，在110份哺乳仔豬血清中檢出5份陽(yáng)性，無(wú)法確定是垂直感染還是出生后感染；Opriessnig T[12]研究證實(shí)妊娠母豬產(chǎn)前3周通過(guò)鼻腔感染PCV2，可通過(guò)胎盤垂直感染仔豬；綜合分析認(rèn)為這可能與母豬隱性感染、種豬場(chǎng)PCV2感染壓力大有關(guān)，但不能排除垂直感染的可能；隱性感染的帶毒豬在該病的傳播中具有重要作用，動(dòng)物試驗(yàn)證實(shí)帶毒豬通過(guò)分泌物及排泄物持續(xù)排毒，使病毒在豬群中長(zhǎng)期存在、持續(xù)傳播和普遍感染有關(guān)[13]。因此，對(duì)于豬場(chǎng)防控PCV2的感染，至關(guān)重要的是控制隱性感染的豬群，減低PCV2帶毒量，這就要求做好檢疫檢測(cè)工作，同時(shí)進(jìn)行疫苗免疫和加強(qiáng)生物安全防控等工作。

檢測(cè)疑似病豬血清樣品，結(jié)果表明運(yùn)城地區(qū)該病以PMWS、PCV2相關(guān)性肺炎和PDNS為主，CT和繁殖障礙也有發(fā)生。該檢測(cè)結(jié)果與以往研究稍有偏差，分析可能與PCV2感染對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)造成損害，導(dǎo)致免疫功能低下，且存在PCV2與多種病原混合感染，如PPV、PRRSV、豬副豬嗜血桿菌病、豬肺炎支原體等，這些病原在臨床上都有呼吸系統(tǒng)癥狀，同時(shí)這些病原均能增加PCV2相關(guān)病變并擴(kuò)大PMWS造成的影響；其次，這可能與采樣分類過(guò)程中將部分PMWS的病豬病料歸為PCV2相關(guān)性肺炎病料中，導(dǎo)致PCV2相關(guān)性肺炎的陽(yáng)性率增高。

本調(diào)查采用ELISA進(jìn)行PCV2血清學(xué)抗體檢測(cè)，結(jié)果表明，運(yùn)城地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)廣泛存在PCV2流行，且以PMWS和PCV2相關(guān)性肺炎為主，其次是PDNS和繁殖障礙，仔豬先天性震顫感染率最低。檢測(cè)結(jié)果提示，隨著豬日齡的增長(zhǎng)，PCV2感染有升高趨勢(shì)。

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Investigation on Seral Epidemiology of PCV2 in Large-scale Pig Farms

LI Rui-xiang

(CenterforControlandPreventionofAnimalDiseaseinLinweiDistrict,Weinan,Shaanxi,714000,China)

In order to acquaint the seral epidemiology of infection with prcine circovirus type 2 in scale pig farms,ELISA was used to detect PCV2 antibody.The results showed that there were PCV2 infection in scale pig farms in Yuncheng area widespreadly,the average positive rate of PCV2 antibody was 49.66% in pigs without PCV2 vaccine immunization,the positive rate of PCV2 antibody in boars was 67%,4.55% in suckling piglets,43% in nursery pigs,and 64.71% in fattening pigs.The PCV2 infection had rising trend with the growth in clinical health pigs.In order to acquaint the morbidity and epidemic feature of syndromes in infections with PCV2 in scale pig farms,400 samples were collected clinicaly with PMWS,CT,PDNS,reproductive failure and PCV2 associated pneumonia,and PCV2 antibodies were detected.The results showed that the positive rate of PCV2 antibody was the highest in PMWS than that in other symptoms,and reached 86.25%,and 56.25%,46.25%,26.25% in PCV2 associated pneumonia,PDNS and reproductive failure respectively,it was lowest in CT,and reached 11.25%.The results showed that the major symptoms of PCV2 infection were PMWS and PCV2 associated pneumonia,then were PDNS,CT in scale pig farms of Yuncheng area.

scale pig farm；Porcine circovirus type 2；seral epidemiology;ELISA

2016-09-04

李瑞香(1973-)，女，陜西渭南人，獸醫(yī)師，博士，主要從事動(dòng)物疫病控制等方面工作。

S858.28;S852.659.2

B

1007-5038(2017)03-0129-04