史同瑞，朱慶賀，王 爽，陳 曦，王觀悅，楊淑萍，侯美如，于萬才

(黑龍江省獸醫(yī)科學(xué)研究所，黑龍江齊齊哈爾 161005)

利福昔明混懸乳劑的安全性試驗(yàn)

史同瑞，朱慶賀，王 爽，陳 曦，王觀悅，楊淑萍，侯美如，于萬才

(黑龍江省獸醫(yī)科學(xué)研究所，黑龍江齊齊哈爾 161005)

應(yīng)用全身過敏性、皮膚刺激性、黏膜刺激性和乳腺刺激性試驗(yàn)，評定了利福昔明混懸乳劑的安全性。結(jié)果表明，致敏試驗(yàn)豚鼠均未出現(xiàn)過敏性反應(yīng)。在皮膚刺激性試驗(yàn)中，單次敷藥組家兔皮膚均未見異常變化，多次敷藥組雖有1只試驗(yàn)兔皮膚出現(xiàn)了短暫性輕微紅斑，但皮膚刺激反應(yīng)積分平均值僅為0.2。在黏膜刺激性試驗(yàn)中，受試藥物組有1只試驗(yàn)兔的陰道黏膜出現(xiàn)輕微的充血現(xiàn)象，陰道黏膜刺激反應(yīng)積分平均值為0.2。乳腺刺激性試驗(yàn)羊乳房未見異常癥狀，乳腺組織未見充血、水腫和白細(xì)胞浸潤等病理變化。綜合評價試驗(yàn)結(jié)果表明，利福昔明混懸乳劑是一種安全性良好的制劑。

利福昔明；混懸乳劑；安全性

利福昔明是利福霉素的半合成衍生物，由意大利阿爾法韋士曼公司研究開發(fā)，1987年在意大利上市[1]。2002年利福昔明口服片劑進(jìn)口我國，此后，利福昔明原料藥及其他劑型制劑也陸續(xù)進(jìn)入國內(nèi)市場。利福昔明抗菌譜廣，抗菌作用強(qiáng)，對革蘭陽性菌、革蘭陰性菌均具有很強(qiáng)的殺滅活性。由于利福昔明局部使用不易被機(jī)體組織吸收，僅在局部發(fā)揮高效抗菌作用，因此，利福昔明是一種優(yōu)良的局部抗細(xì)菌感染藥。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，利福昔明主要用于治療腸道及預(yù)防外科手術(shù)等局部感染炎癥[2-3]。在獸醫(yī)領(lǐng)域，利福昔明主要用于動物乳房炎、子宮炎、胃腸炎、皮膚感染和腐蹄病等局部感染的預(yù)防和治療[4-6]。

混懸乳劑，又稱懸浮乳劑、懸乳劑，是一種相對復(fù)雜的懸浮乳狀液載藥體系，由固體懸浮體與乳狀液混合形成，該體系不僅具有混懸劑和乳劑的特性，而且還具有自身獨(dú)特性能[7]?；鞈胰閯┎粌H使用方便，可經(jīng)口服、注射等途徑使用，而且還能延緩藥物的釋放，減少用藥次數(shù)，提高藥物療效。國際上有關(guān)混懸乳劑的研究起始于20世紀(jì)80年代后期，目前，在農(nóng)藥及工業(yè)制劑中應(yīng)用較多[8]。近年來，在獸醫(yī)領(lǐng)域也開展了相關(guān)的研究工作[9-10]。利福昔明不溶于水，為方便臨床用藥，將其制備成一種20 g/L利福昔明混懸乳劑，擬用于動物乳房炎、子宮炎及腸道感染的治療。本試驗(yàn)檢驗(yàn)了藥劑的安全性，旨在為其臨床應(yīng)用提供安全性技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

2 g/L利福昔明混懸乳劑，規(guī)格：20 mL∶0.4 g，由本研究室自制。豚鼠，體重350 g～400 g,家兔，體重1.5 kg～2.0 kg，由齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。健康泌乳綿羊，體重50 kg～60 kg，購自當(dāng)?shù)啬尘d羊養(yǎng)殖場。試驗(yàn)動物均常規(guī)飼養(yǎng)，飲水、飼料中不含抗菌藥物。

1.2 方法

1.2.1 過敏性試驗(yàn) 取健康豚鼠30只，分為5組，雌雄各半，每組6只，分別為高劑量藥物組、中劑量藥物組、低劑量藥物組、陽性對照組和陰性對照組。高劑量藥物組、中劑量藥物組和低劑藥物量組分別經(jīng)腹腔注射受試藥物1.0、0.5、0.2 mL/只，陽性對照組腹腔注射50 mL/L卵蛋白液0.5 mL/只，陰性對照組腹腔注射空白乳劑1.0 mL/只，各組均隔日注射1次，連續(xù)注射3次。在末次注射后第14天各組豚鼠經(jīng)前肢靜脈分別注射50 mL/L卵蛋白液1 mL/只激發(fā)致敏反應(yīng)。致敏期間每天觀察豚鼠癥狀，激發(fā)注射后3 h內(nèi)密切觀察豚鼠臨床變化。參照文獻(xiàn)方法[11]，依據(jù)試驗(yàn)豚鼠過敏反應(yīng)癥狀和致敏性評價標(biāo)準(zhǔn)，評定藥物的致敏性。

1.2.2 皮膚刺激性試驗(yàn) 取健康家兔10只，均分2組，雌雄各半，分別為單次敷藥組和多次敷藥組。采用同體左右側(cè)自身對照方法，每組均設(shè)空白乳劑作為對照。試驗(yàn)前剪去家兔背部脊柱兩側(cè)被毛，然后用100 g/L硫化鈉脫毛，每側(cè)脫毛面積約為5×5 cm2，注意保持脫毛皮膚無破損。單次敷藥組取受試藥物1.0 mL直接涂布于右側(cè)去毛皮膚上，左側(cè)涂布等量空白乳劑，然后用兩層紗布和一層玻璃紙覆蓋，再用繃帶固定，貼敷24 h后除去受試物，用溫水清洗，在去除受試物后1、24、48、72 h，觀察記錄涂敷部位皮膚有無紅斑和水腫等癥狀。多次敷藥組每天敷藥1次，劑量同單次敷藥組，每次貼敷4 h，連續(xù)敷藥6次，在每次去除受試物后1 h、再次敷藥前，以及末次敷藥去除后1、24、48、72 h，觀察涂敷部位皮膚有無紅斑和水腫等癥狀。參照文獻(xiàn)[11]皮膚刺激反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)，計算每一觀察時間點(diǎn)每組家兔貼敷部位皮膚反應(yīng)積分平均值，并依據(jù)皮膚刺激強(qiáng)度評價標(biāo)準(zhǔn)判定藥物的刺激性。

1.2.3 陰道黏膜刺激性試驗(yàn) 取健康雌性家兔15只，試驗(yàn)前陰道檢查應(yīng)無分泌物、充血、水腫及損傷等異常癥狀。試驗(yàn)兔隨機(jī)均分為滅菌蒸餾水對照組、空白基質(zhì)對照組和受試藥物組，給藥前禁食禁水6 h。給藥時固定家兔，消毒陰門，將滅菌輸藥管插入家兔陰道5 cm～6 cm深處，注入試驗(yàn)藥液1 mL，家兔在固定器內(nèi)保持頭低尾高姿勢，固定4 h后放回兔籠。1次/d，連續(xù)給藥7 d。

試驗(yàn)期間，每天觀察記錄家兔精神、食欲等全身狀況，以及陰道局部反應(yīng)，末次給藥后24 h處死全部試驗(yàn)兔，剖檢陰道黏膜，觀察有無紅腫、出血、破潰等現(xiàn)象。參照文獻(xiàn)[12-13]方法評定藥物的刺激性。黏膜刺激性評分及評定標(biāo)準(zhǔn)：無變化或無明顯變化為0分；輕度充血，有少量分泌物為1分；中度充血，分泌物較多為2分；重度淤血，水腫，分泌物很多，黏膜變性為3分。統(tǒng)計平均分值在0～0.4范圍判定為無刺激性，分值0.41～1.5判定為輕度刺激性，分值0.51～2.5判定為中度刺激性，分值大于2.5判定為重度刺激性。

1.2.4 乳腺刺激性試驗(yàn) 選取健康泌乳綿羊3只，試驗(yàn)羊右側(cè)乳區(qū)灌注受試藥物，左側(cè)乳區(qū)灌注生理鹽水作對照，灌注劑量均為2.0 mL/次，2次/d，連續(xù)3 d。給藥時先擠凈乳汁，再用消毒藥藥浴乳頭約30 s，然后經(jīng)乳頭管灌注藥物，并按摩乳區(qū)，使藥物均勻分布。每天觀察記錄綿羊臨床變化、乳汁性狀，以及乳房是否出現(xiàn)紅、腫、疼痛和發(fā)熱等癥狀，試驗(yàn)至末次給藥后7 d結(jié)束，參照文獻(xiàn)[14]評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床癥狀評分。試驗(yàn)結(jié)束后剖殺存活綿羊，剖檢，采取乳腺組織，制作切片，并進(jìn)行病理學(xué)檢查。

2 結(jié)果

2.1 過敏性試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明，在致敏期間及激發(fā)注射后3 h內(nèi)觀察，各組豚鼠均未出現(xiàn)騷動不安、站立不穩(wěn)、被毛豎立、身體顫抖、搔鼻、咳嗽、噴嚏、呼吸困難等過敏反應(yīng)癥狀，反應(yīng)癥狀評分為0，過敏反應(yīng)為陰性。試驗(yàn)說明利福昔明混懸乳劑對豚鼠無致敏作用。

2.2 皮膚刺激性試驗(yàn)結(jié)果

在單次敷藥試驗(yàn)中，各觀察時間點(diǎn)受試藥物和空白乳劑涂敷部位皮膚均未見紅斑、水腫等異常癥狀，皮膚刺激反應(yīng)積分為0，說明藥物無刺激性。在多次敷藥試驗(yàn)中，在末次敷藥去除后1 h觀察時，有1只兔受試藥物和空白乳劑涂敷部位皮膚均出現(xiàn)輕微紅斑，皮膚刺激反應(yīng)積分平均值為0.2，但在除去受試藥物24 h后觀察，皮膚恢復(fù)正常，其他試驗(yàn)兔各觀察時間點(diǎn)均未見異常變化。依據(jù)皮膚刺激強(qiáng)度評價標(biāo)準(zhǔn)，評定藥物無刺激性。

2.3 陰道黏膜刺激性試驗(yàn)結(jié)果

陰道黏膜刺激性試驗(yàn)結(jié)果表明，給藥期間試驗(yàn)組與對照組家兔均未見異常臨床癥狀，陰道口也未見有充血、紅腫及異常分泌物流出等現(xiàn)象。試驗(yàn)結(jié)束時剖檢家兔，肉眼觀察陰道黏膜，發(fā)現(xiàn)空白基質(zhì)對照組和受試藥物組各有1只試驗(yàn)兔的陰道黏膜僅出現(xiàn)輕微充血現(xiàn)象，其他家兔未見充血、出血、水腫、紅斑、潰瘍等異常癥狀。陰道黏膜刺激反應(yīng)平均分值為0.2，說明受試藥物安全。

2.4 乳腺刺激性試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)期間綿羊精神狀態(tài)良好，采食量、體溫等指標(biāo)正常，試驗(yàn)乳房均未見紅、腫、疼痛和發(fā)熱癥狀，乳汁性狀、泌乳量未見異常，臨床癥狀評分為0。剖檢乳腺未見充血、出血、水腫、壞死等病理變化。乳腺組織切片觀察顯示，乳腺管及腺泡結(jié)構(gòu)正常，管泡腔內(nèi)未見脫落的腺上皮細(xì)胞及炎性細(xì)胞等，間質(zhì)未見水腫及炎性細(xì)胞浸潤等異?，F(xiàn)象(圖1)。

3 討論

利福昔明是治療局部感染的高效藥物，利用其特點(diǎn)，筆者研發(fā)了一種20 g/L利福昔明混懸乳劑，并擬用于動物子宮炎、乳房炎、腸炎等局部感染的治療。刺激性是指非口服給藥制劑給藥后對給藥部位產(chǎn)生的可逆性炎癥反應(yīng)，主要考察動物血管、肌肉、皮膚、黏膜部位接觸受試藥物后是否引起紅腫、充血、滲出、變性、壞死等局部反應(yīng)[11,15-16]。依據(jù)利福昔明混懸乳劑的擬用藥途徑，以及藥劑主要作用于子宮黏膜、胃腸道黏膜和乳腺組織的特點(diǎn)，試驗(yàn)選擇了皮膚刺激性試驗(yàn)、過敏性試驗(yàn)、陰道黏膜刺激性試驗(yàn)、乳腺刺激性試驗(yàn)作為評定藥劑安全性的試驗(yàn)依據(jù)。

A1～C1.試驗(yàn)組；A2～C2.對照組

A1-C1.Experimental groups;A2-C2.Control groups

圖1 羊乳腺組織學(xué)觀察(HE，200×)

Fig.1 Histological observation of the mammary tissue of sheep(HE，200×)

在利福昔明混懸乳劑的安全性試驗(yàn)中，雖然多次敷藥皮膚刺激性試驗(yàn)在末次敷藥去除后1 h觀察，有1只家兔受試藥物和空白乳劑涂敷部位皮膚均出現(xiàn)輕微紅斑。陰道黏膜刺激性試驗(yàn)有1只受試藥物兔的陰道黏膜出現(xiàn)輕微的充血現(xiàn)象，但依據(jù)評定標(biāo)準(zhǔn)，藥劑屬無刺激性，可安全使用。綜合分析試驗(yàn)結(jié)果，利福昔明混懸乳劑產(chǎn)生輕微刺激性的原因可能主要是與藥劑的輔料有關(guān)。在利福昔明混懸乳劑中，除主藥利福昔明外，其主要成分是液體石蠟和水，其次是乳化劑和助乳化劑?？v觀利福昔明混懸乳劑中各成分，油相和乳化劑的安全性良好，不易引起動物的不良反應(yīng)，僅其中的丙二醇可能是引起局部刺激的原因。

目前，研發(fā)的利福昔明獸用制劑劑型主要有混懸劑、納米乳、栓劑和泡騰片，尚未見有混懸乳劑的研究報道。本試驗(yàn)結(jié)果表明，利福昔明混懸乳劑對皮膚、黏膜和乳腺組織無明顯刺激性，對試驗(yàn)動物無致敏性，藥劑安全性良好，可確保臨床用藥的安全。

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Safety Test of Rifaximin Suspoemulsion

SHI Tong-rui,ZHU Qing-he,WANG Shuang,CHEN Xi,WANG Guan-yue, YANG Shu-ping,HOU Mei-ru,YU Wan-cai

(HeilongjiangInstituteofVeterinaryMedicine,Qiqihar,Heilongjiang,161005,China)

The safety of rifaximin suspoemulsion was evaluated by the active systemic anaphylaxis test,skin irritation test,vaginal mucosa irritation test and mammary irritation test.The result showed that no sign of anaphylaxis was observed in guinea pigs.No abnormal changes were observed on the skin of the single dose rabbits.Although temporary mild erythema appeared on two rabbits skin in multiple dose groups,the skin irritation reaction average score was only 0.2.In the vaginal mucous membrane irritation test,the milde hyperemia was found in vaginal mucosa of a rabbit in test group,the vaginal mucous membrane irritation reaction average score was 0.2.No clinical symptoms,hyperemia,edema and leukocyte infiltration were found in the sheep mammary tissue.Comprehensive evaluation of the test results showed that the rifaximin suspoemulsion was a safe preparation.

rifaximin;suspoemulsion;safety

2016-07-25

黑龍江省創(chuàng)新能力提升專項(xiàng)項(xiàng)目(YC2016D004)

史同瑞(1965-)，男，山東濟(jì)寧人，碩士，研究員，主要從事動物疾病診斷與治療研究。

S859.7

A

1007-5038(2017)03-0086-04