張存彥

（天津大學(xué)，天津300192）

HPLC法測定4-氨基吡啶的含量

張存彥

（天津大學(xué)，天津300192）

4-氨基吡啶為一種常見的醫(yī)藥起始物料，并且具有多種較好的理化性質(zhì)，因此應(yīng)用比較廣泛。對其進(jìn)行準(zhǔn)確的含量測定，有助于對該化合物的質(zhì)量進(jìn)行更好的確定。本文應(yīng)用HPLC方法對其進(jìn)行精密度、穩(wěn)定性、回收率等相關(guān)試驗(yàn)，建立4-氨基吡啶的含量測定方法。該方法操作簡便，測定結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好。

HPLC法；4-氨基吡啶；含量

4-氨基吡啶作為氮雜環(huán)類化合物，可以作為制備藥物、染料等產(chǎn)品的重要化工原料。4-氨基吡啶可以抑制肺癌SPCA1及PC9細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移[1，2]，抑制肺癌細(xì)胞的生長，而且4-氨基吡啶可能調(diào)控PI3K/AKT信號通路及下游細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)。目前對其準(zhǔn)確的含量測定方法沒有相關(guān)的研究，為了對其在應(yīng)用過程中進(jìn)行準(zhǔn)確投料，故而急需建立準(zhǔn)確的含量確定方法。

1 儀器與試藥

安捷倫1260高效液相色譜儀，DAD檢測器，AB135-S電子天平（瑞士梅特勒-托利多電子分析天平），KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。4-氨基吡啶（北京維達(dá)精細(xì)化工有限公司，批號20160912、20161112和20161112），4-氨基吡啶對照品（含量為99.8%，美國西格瑪奧德里奇公司），甲醇為色譜純[賽默飛世爾科技（中國）有限公司]，其他試劑為分析純，水經(jīng)默克密理博（Merck Millipore）Milli Q Direct水純化系統(tǒng)純化。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色譜柱（4.6mm×150mm，填料粒徑5μm，P/N：993967-902），流動(dòng)相為10mmol/L磷酸鹽緩沖液（取二水合磷酸二氫鈉1.56g，加水900mL溶解，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0±0.2，加水稀釋成1 000mL）∶乙腈（53∶47），流速1mL/min，檢測波長241nm，進(jìn)樣量10μL，柱溫40℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品儲(chǔ)備液

取4-氨基吡啶對照品約20mg，置100mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得含4-氨基吡啶約0.2 mg/mL。

2.2.2 供試品溶液

取4-氨基吡啶樣品約10 mg，精密稱定，置50mL量瓶中，溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得含4-氨基吡啶約0.2mg/mL。

2.2.3 陰性對照溶液

以流動(dòng)相進(jìn)行干擾峰測試。

2.3 專屬性試驗(yàn)

分別取供試品溶液、陰性對照溶液、對照品儲(chǔ)備液分別進(jìn)樣，陰性對照溶液對試驗(yàn)結(jié)果不造成干擾。所有雜質(zhì)峰與主峰能夠達(dá)到完全分離，對照品儲(chǔ)備液與供試品溶液的主峰出峰時(shí)間一致。

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密量取2.2.1對照儲(chǔ)備液適量置于量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，配制得6份濃度依次為1、5、10、15、20μg/mL和50μg/mL的4-氨基吡啶溶液。取各濃度溶液10μL進(jìn)樣測定，用峰面積（A）對濃度（C）作回歸直線，4-氨基吡啶線性方程為Y=14.579X+0.743 2，r=1.000 0。結(jié)果表明，進(jìn)樣濃度在1～50μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

通過對對照品溶液（50μg/mL）同一樣品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，統(tǒng)計(jì)RSD，結(jié)果為0.79%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

通過對20160912批樣品溶液（50μg/mL）同一樣品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，統(tǒng)計(jì)RSD，結(jié)果為1.6%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

將對照品及供試品溶液室溫放置，于0、4、8、12、16h和24h分別取樣，按2.1的色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，結(jié)果對照品及供試品溶液在室溫放置24h內(nèi)穩(wěn)定，RSD分別為0.8%、1.0%（n=6）。

2.8 回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的4-氨基吡啶樣品（10mg，批號20160912）6份，分別精密加入對照品適量（約10mg），置100mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得，用外標(biāo)法計(jì)算4-氨基吡啶的含量，結(jié)果該方法測定的4-氨基吡啶的回收率（n=6）為99.7%，RSD為0.8%。

2.9 含量測定

分別取對照品及4-氨基吡啶約10mg，精密稱定，置50mL量瓶中，溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（含4-氨基吡啶約0.2mg/mL）。測定結(jié)果詳見表1。

表1 4-氨基吡啶的標(biāo)示百分含量（n=3）

3 討論

用水替換磷酸鹽緩沖液（pH 3），4-氨基吡啶的洗脫幾乎不受影響，但會(huì)造成拖尾，因而流動(dòng)相優(yōu)選使用酸性緩沖液。曾經(jīng)試驗(yàn)過使用Proshell色譜柱的條件，但進(jìn)行精密度試驗(yàn)時(shí)殘留較為嚴(yán)重，這可能與Proshell填充劑的實(shí)心硅膠結(jié)構(gòu)有關(guān)。檢測波長的選擇，4-氨基吡啶的雜質(zhì)中主要是沒有完全還原的4-硝基吡啶，而二者的母核均為吡啶環(huán)，在241nm下均有強(qiáng)吸收，因此對于雜質(zhì)的判定比較有利，能夠更好地區(qū)別不同產(chǎn)品的雜質(zhì)情況。通過專屬性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該方法專一性強(qiáng)，通過精密度試驗(yàn)和線性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該方法靈敏度高，操作簡單，為控制4-氨基吡啶質(zhì)量提供了一種較好的分析方法。

[1]胡喆,黃玉潔,谷紅麗,等.4-氨基吡啶抑制肺癌SPCA1及PC9細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移[J].江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2016,26(5):384-386,390.

[2]甄艷,黎東明,黃玉潔,等.4-氨基吡啶抑制肺癌細(xì)胞SPCA1及PC9增殖及其分子機(jī)理的研究[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào),2016,32(5):613-617.

Determination of 4- aminopyridine by HPLC Method

Zhang Cun-yan
(Tianjin University, Tianjin 300192)

4-Aminopyridine is a kind of common medicine starting material, and has many kinds of good physicochemical properties, so its application is more extensive. The accurate determination of the content of the compound can help to determine the quality of the compound better. In this paper, the method of determination of 4-aminopyridine was established by the method of HPLC, such as precision, stability, recovery rate and so on. This method is simple, accurate and reproducible.

HPLC; 4-aminopyridine; Content

TQ25

A

2096-0387（2017）01-0017-02

張存彥（1976-），男，漢族，山東聊城人，博士，高級工程師，研究方向：小分子藥物合成及工藝優(yōu)化。