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        CTHRC1在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

        2017-03-08 11:00:26馮春翠徐伏蘭
        實(shí)用癌癥雜志 2017年2期
        關(guān)鍵詞:免疫組化癌癥內(nèi)膜

        馮春翠 周 琦 徐伏蘭 廣 怡

        CTHRC1在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

        馮春翠 周 琦 徐伏蘭 廣 怡

        目的 探討膠原三股螺旋重復(fù)蛋白1(CTHRC1)在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)情況及其臨床意義。方法 選取子宮內(nèi)膜癌(癌癥組)、子宮內(nèi)膜不典型增生(增生組)及正常子宮內(nèi)膜(對(duì)照組)患者各50例,采用免疫組化法和酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)法檢測(cè)CTHRC1蛋白在子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)情況,并比較其表達(dá)情況與子宮內(nèi)膜癌病理分級(jí)、臨床分期及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。結(jié)果 CTHRC1主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)中,少許表達(dá)在細(xì)胞核中,其在癌癥組陽(yáng)性表達(dá)43例(86%),增生組陽(yáng)性表達(dá)4例(8%),對(duì)照組無陽(yáng)性表達(dá)。CTHRC1蛋白在癌癥組中的表達(dá)明顯高于增生組及對(duì)照組(P<0.05)。CTHRC1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)在病理分級(jí)、臨床分期及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 CTHRC1在子宮內(nèi)膜癌患者體內(nèi)高表達(dá),且其表達(dá)與患者病理分級(jí)、臨床分期及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),有望成為子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展的檢測(cè)指標(biāo)之一。

        子宮內(nèi)膜癌;免疫組化;ELISA;表達(dá)

        (ThePracticalJournalofCancer,2017,32:221~223)

        子宮內(nèi)膜癌是女性生殖道三大惡性腫瘤之一,其發(fā)病率逐年上升。歐美最近研究發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生率接近宮頸癌,且有年輕化的趨勢(shì)[1]。目前普遍認(rèn)為在缺乏孕激素的狀態(tài)下,長(zhǎng)期的雌激素刺激會(huì)增加子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病幾率,但是其具體的發(fā)病機(jī)制及疾病的發(fā)生發(fā)展仍不清楚。腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致癌癥患者死亡的主要原因[2]。近年來多項(xiàng)研究表明,膠原三股螺旋重復(fù)蛋白1(collagen triple helix repeat containing 1,CTHRC1)參與腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移,并在多種實(shí)體腫瘤中檢測(cè)其高表達(dá)[3]。本研究采用免疫組化法分析CTHRC1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá),并采用ELISA法檢測(cè)患者血清中CTHRC1水平,分析其與病理分級(jí)、臨床分期及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系,報(bào)告如下。

        1 材料與方法

        1.1 一般資料

        選取子宮內(nèi)膜癌(癌癥組)、子宮內(nèi)膜不典型增生(增生組)及正常子宮內(nèi)膜(對(duì)照組)患者各50例,子宮內(nèi)膜癌組患者年齡52~70(60.87±7.97)歲;增生組患者年齡40~58(48.95±5.67)歲;正常組患者年齡53~71(61.87±3.28)歲。3組間年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

        1.2 方法

        1.2.1 標(biāo)本來源 子宮內(nèi)膜癌組及增生組組織標(biāo)本來源于治療前病理檢查標(biāo)本;正常組標(biāo)本來源于因功血、子宮肌瘤及子宮脫垂行子宮切除的患者。標(biāo)本經(jīng)過甲醛溶液固定后,經(jīng)石蠟包埋,切片厚度3 μm。所有患者的血清均為空腹靜脈血,之前未接受治療。血液室溫自然凝固10~20 min,離心20 min取上層液即為血清,1∶20稀釋作為樣品。

        1.2.2 試劑來源 CTHRC1酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)試劑盒購(gòu)于上海研卉生物科技有限公司,酶標(biāo)板購(gòu)自于JETPLATES公司。采用免疫組織化學(xué)SABC法,CTHRC1多克隆抗體購(gòu)自Santa cruz公司,細(xì)胞免疫組化(SABC)和二氨基聯(lián)苯胺(DAB)試劑盒購(gòu)自美國(guó)博士德生物工程有限公司。

        1.2.3 實(shí)驗(yàn)方法 ELISA采用間接法,按照試劑盒操作步驟包被、加樣、加酶標(biāo)抗體、加底物液顯色、終止反應(yīng)及結(jié)果判定進(jìn)行。免疫組化采用SABC法按照試劑盒操作說明進(jìn)行,磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照,該試劑公司提供的陽(yáng)性切片作為CTHRC1陽(yáng)性對(duì)照。

        1.3 結(jié)果判定

        ELISA結(jié)果判定是測(cè)定吸光度(OD450)值。免疫組化所有標(biāo)本均由2位病理醫(yī)生評(píng)定:CTHRC1主要在細(xì)胞質(zhì)表達(dá),少數(shù)表達(dá)于細(xì)胞核,光鏡下觀察到細(xì)胞質(zhì)有棕黃色顆粒沉淀為陽(yáng)性,不染色為陰性。評(píng)分參照王輝等[4]的評(píng)定方法進(jìn)行評(píng)估,采用二級(jí)計(jì)分方式,取5個(gè)以上高倍鏡視野,根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占視野比例計(jì)數(shù):5%~24%為1分,≥25%~49%為2分,≥50%~75% 為3分,> 75%為4分。染色強(qiáng)度分類:淡黃色為1 分,黃或深黃色為2 分,褐或棕褐色為3 分。兩者計(jì)分相乘>1 為陽(yáng)性。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

        采用SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)數(shù)資料間比較采用t檢驗(yàn)或方差分析,組間比較采用q檢驗(yàn)。χ2檢驗(yàn)分析不同臨床病理因素(病理分型、臨床分級(jí)及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)的CTHRC1表達(dá)情況,P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 CTHRC1在不同子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)情況

        CTHRC1蛋白陽(yáng)性表達(dá)呈棕黃色顆粒樣物質(zhì),主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)中,少數(shù)表達(dá)于細(xì)胞核。正常子宮內(nèi)膜組織無表達(dá);子宮內(nèi)膜不典型增生中有極少量的表達(dá);子宮內(nèi)膜癌組織中細(xì)胞質(zhì)和包膜上均有較強(qiáng)表達(dá),少數(shù)細(xì)胞核上有表達(dá)。其陽(yáng)性表達(dá)率在癌癥組、增生組及對(duì)照組中逐漸下降,CTHRC1在血清中的表達(dá)即OD450的表達(dá)量也逐漸下降,而且其表達(dá)量在癌癥組中與其他組別相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

        表1 CTHRC1在不同內(nèi)膜組織中的表達(dá)

        2.2 CTHRC1表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌不同臨床病理特征的關(guān)系

        CTHRC1在癌癥組織中的表達(dá)與病理分級(jí)、臨床分型及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)(表2)。

        表2 CTHRC1的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌不同臨床病理特征關(guān)系

        3 討論

        子宮內(nèi)膜癌是女性生殖道常見的三大惡性腫瘤之一,其發(fā)病率逐年上升。歐美最近研究發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生率接近宮頸癌,且有年輕化的趨勢(shì)。目前子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制及其病因目前尚不清楚,因此,尋找子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制、評(píng)估其預(yù)后的標(biāo)志性分子,對(duì)于臨床指導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌的治療與病情預(yù)后的轉(zhuǎn)歸具有重要的意義。

        膠原三股螺旋重復(fù)蛋白1(collagen triple helix repeat containing 1,CTHRC1)在大鼠損傷組織中首次被發(fā)現(xiàn),主要表達(dá)在成纖維細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞中,正常組織中未見其表達(dá)。Tang等[3]最先報(bào)道了CTHRC1 在惡性黑色素瘤中表達(dá)升高,且在轉(zhuǎn)移性黑色素瘤中的表達(dá)更高,同時(shí)發(fā)現(xiàn)抑制CTHRC1 的表達(dá)可以抑制腫瘤細(xì)胞遷移。隨后開始其在人實(shí)體腫瘤,如肝癌、大腸癌、宮頸癌等中研究,發(fā)現(xiàn)其表達(dá)與腫瘤的臨床分期、病理分級(jí)及是否有淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移等相關(guān)。

        本研究探討CTHRC1在子宮內(nèi)膜癌患者體內(nèi)的表達(dá)情況。免疫組化及ELISA法均提示CTHRC1在子宮內(nèi)膜癌患者體內(nèi)高表達(dá),且其表達(dá)水平隨疾病的嚴(yán)重程度而逐漸增加,各組間蛋白表達(dá)的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);而且CTHRC1蛋白的表達(dá)與腫瘤的病理分型、臨床分期及有否轉(zhuǎn)移有關(guān)。由此推測(cè)CTHRC1可能參與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生與發(fā)展。近年的研究發(fā)現(xiàn)CTHRC1參與癌細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移的可能機(jī)制有:①血管的生成是腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)展及轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ),CTHRC1主要通過抑制膠原蛋白的沉積及促進(jìn)細(xì)胞的遷移,進(jìn)而促進(jìn)血管重構(gòu),參與腫瘤發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移[5]。②參與Wnt/PCP信號(hào)通路,促進(jìn)細(xì)胞的遷移,減少膠原的沉積,而促進(jìn)腫瘤的發(fā)展[6-7]。③CTHRC1誘發(fā)腫瘤細(xì)胞發(fā)生形態(tài)學(xué)改變,使其黏附及增殖增加,改善其生活環(huán)境,使其生存能力增加。④TGF及BMP4能夠誘導(dǎo)CTHRC1的表達(dá),并能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移[8]。其具體的作用機(jī)理仍需大量研究證實(shí),其是否為腫瘤患者的特異性分子,亦需進(jìn)一步的研究。

        [1] 楊 曦,馬 珂,吳 成.子宮內(nèi)膜癌的流行病學(xué)及高危因素〔J〕.實(shí)用婦產(chǎn)科雜志,2015,31(7),485-488.

        [2] Kim K,Ryu SY.Major clinical research advances in gynecologic cancer in 2009〔J〕.J Gynecol Oncol,2009,20(4):203-209.

        [3] Tang L1,Dai DL,Su M,et al.Aberrant expression of collagen triple helix repeat containing 1 in human solid cancers〔J〕.Clin Cancer Res,2006,12(12):3716-3722.

        [4] 王 輝,許 青.CTHRC1在食管鱗癌中的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.臨床腫瘤學(xué)雜志,2015,20 (6),531-534.

        [5] Leclair RJ,Durmus T,Wang O,et al.CTHRCI is a novel inhibitor of transforming growth factor-beta signaling and neointimal lesion formation〔J〕.Circ Res,2007,100(6):826-833.

        [6] S Yamamoto,O Nishimura,K Misaki,et al.Cthrcl selectively activates the planar cell polarity pathway of wnt signaling by stabilizing the wnt-receptor〔J〕.Complex Developmental Cell,2008,15(1):23-36.

        [7] Tan F,Liu F,Liu H,et al.CTHRC1 is associated with peritonealcarcinomatosis in colorectal cancer:a new predictor for prognosis〔J〕.Med Oncol,2013,30(1):473.

        [8] Pyagay P,Heroult M,Wang Q,et al.Collagen triple helix repeat containing 1,a novel secreted protein in injured and diseased arteries,inhibits collagen expression and promotes cell migration〔J〕.Circ Res,2005,96(2):261-268.

        (編輯:甘 艷)

        Expression and Clinical Significance of CTHRC1 in Endometrial Cancer

        FENGChuncui,ZHOUQi,XUFulan,etal.

        CenterHospitalofXiaogan,Xiaogan,432100

        Objective To explore the expression and clinical significance of CTHRC1 in endometrial cancer.Methods50 cases of endometrial cancer,50 cases of atypical endometrial hyperplasia and 50 cases of normal patients were selected.Using immunohistochemical method and ELISA method to detect the expression of CTHRC1 protein,and compared its expression with pathological grades,clinical stages and lymph node metastasis.Results CTHRC1 was mainly expressed in cytoplasm,with the positive expression rate of 86%(43 cases) in endometrial cancer group,8%(4 cases)in atypical endometrial hyperplasia group and 0 in the control group.The positive expression rate in endometrial cancer group was significantly different from that in the atypical endometrial hyperplasia and the control group(P<0.05).There was significant difference in CTHRC1 protein expression with pathological grades,clinical stages and lymph node metastasis(P<0.05).Conclusion CTHRC1 is highly expressed in endometrial cancer,and is correlated with pathological grades,clinical stages and lymph node metastasis,and it is expected to become one of the important indicators predicting the development of endometrial cancer.

        Endometrial cancer;Immunohistochemistry;ELISA;Expression

        432100 湖北省孝感市中心醫(yī)院

        徐伏蘭

        10.3969/j.issn.1001-5930.2017.02.014

        R737.33

        A

        1001-5930(2017)02-0221-03

        2016-03-04

        2016-08-02)

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