陳 飛 余婷婷 李 俊

宮頸癌中自噬標(biāo)記蛋白Beclin1、p62的表達(dá)及其臨床意義

陳 飛 余婷婷 李 俊

目的 研究宮頸癌中自噬標(biāo)記蛋白Beclin1、p62表達(dá)的水平及其對(duì)臨床診斷及治療的意義。方法 選擇子宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織標(biāo)本140例，對(duì)納入的組織標(biāo)本使用Beclin1和p62蛋白標(biāo)記。陽(yáng)性結(jié)果采用半定量評(píng)分方法進(jìn)行判定。Beclin1、p62的表達(dá)與患者臨床特征相關(guān)性分析采用χ2檢驗(yàn)。結(jié)果 Beclin1主要表達(dá)于細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)，與正常子宮頸上皮相比，Beclin1在宮頸癌組織中的表達(dá)明顯降低(P<0.05)。但宮頸癌中Beclin1表達(dá)量與患者臨床病理特征無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。p62在子宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織細(xì)胞質(zhì)中的表達(dá)明顯升高，且與淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P<0.05)。Beclin1和p62的陽(yáng)性表達(dá)率之間未見(jiàn)明顯的相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論 Beclin1、 p62的表達(dá)量與子宮頸癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，且p62的核漿轉(zhuǎn)移與子宮頸癌有相關(guān)性。臨床上，可根據(jù)Beclin1和p62的表達(dá)對(duì)疾病進(jìn)展進(jìn)行評(píng)估。

Beclin1；p62；宮頸癌；臨床意義

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:218～220)

子宮頸癌是常見(jiàn)女性惡性腫瘤之一，目前逐漸向年輕化發(fā)展[1]。子宮頸癌以鱗狀細(xì)胞癌最為常見(jiàn)，約為85%[2]。腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程相對(duì)復(fù)雜，不僅僅是單個(gè)基因突變，而是多個(gè)不同復(fù)雜步驟以及環(huán)境共同作用的結(jié)果[3]。突變的基因不同、強(qiáng)度不同得到的結(jié)果也有差異。本次研究納入孝感市中心醫(yī)院收治的140例子宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織標(biāo)本進(jìn)行Beclin1和p62蛋白標(biāo)記，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取2013年8月至2015年8月間醫(yī)院收治的140例子宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者，年齡27～67歲，平均為(43.2±2.3)歲；其中82例年齡≤45歲，58例年齡>45歲；組織學(xué)分型：高分化24例，中分化78例，低分化38例；臨床分期：Ⅰ期76例，Ⅲa期64例；58例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；腫瘤直徑：66例≤4 cm，74例>4 cm。選擇同一時(shí)期40例子宮頸組織標(biāo)本正常的人群作為正常對(duì)照組。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)[4]

①患者術(shù)前進(jìn)行病理分型為子宮頸鱗狀細(xì)胞癌，同時(shí)臨床分期處于Ⅰ～Ⅱa期；②無(wú)其他惡性腫瘤。③無(wú)糖尿病、高血壓病史。④無(wú)免疫系統(tǒng)疾病。⑤患者術(shù)前未實(shí)施過(guò)放化療以及免疫治療。

1.3 實(shí)驗(yàn)室檢查

1.3.1 試劑 Beclin1檢測(cè)應(yīng)用Anti-Beclin1兔抗人單克隆抗體(abcam公司生產(chǎn)，型號(hào)為ab51031)，p62檢測(cè)應(yīng)用Anti-p62鼠抗人單克隆抗體(abcam公司生產(chǎn)，型號(hào)為ab56416)，試劑盒為SP免疫組化試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)公司生產(chǎn))，顯色劑為DAB(北京中杉金橋生物技術(shù)公司)。

1.3.2 方法 首先，石蠟包埋切片處理，之后進(jìn)行HE染色和DBA顯色處理。然后，復(fù)染脫水處理。最后，顯微鏡下觀察。通過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢查可以得出，Beclin1蛋白在細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)中表現(xiàn)為棕黃色顆粒物，p62陽(yáng)性表達(dá)為棕黃色顆粒。運(yùn)用雙盲法在光學(xué)顯微鏡下觀察切片(高倍×400)。每個(gè)高倍視野下計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞[5]，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比值分為：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞0分；陽(yáng)性細(xì)胞所占比例<30.0%1分；陽(yáng)性細(xì)胞所占比例≥30.0%2分。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)弱分為：未出現(xiàn)著色0分，淺黃色或者黃色1分；棕黃色2分；棕褐色3分。將兩項(xiàng)的評(píng)分進(jìn)行相乘，陰性為0～1分；陽(yáng)性為2～6分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 15.0系統(tǒng)軟件，陽(yáng)性結(jié)果采用半定量法判定。用卡方檢驗(yàn)對(duì)Beclin1、p62的表達(dá)與子宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者臨床特征之間的關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Beclin1與p62表達(dá)水平

宮頸癌組織中Beclin1與p62陽(yáng)性表達(dá)率無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。見(jiàn)表1。宮頸癌組織中Beclin1(膜)陽(yáng)性率為22.1%、Beclin1(質(zhì))陽(yáng)性率為13.6%；P62(核)陽(yáng)性率為92.9%、P62(質(zhì))陽(yáng)性率為62.9%。正常對(duì)照組Beclin1(膜)陽(yáng)性率、Beclin1(質(zhì))陽(yáng)性率為30.0%、15.0%；P62(核)陽(yáng)性率和P62(質(zhì))陽(yáng)性率為25.0%、12.5%。

表1 Beclin1與p62表達(dá)水平相關(guān)性

2.2 Beclin1、p62與臨床指標(biāo)相關(guān)性

Beclin1 (核、質(zhì))、p62(核)表達(dá)與子宮頸鱗狀細(xì)胞癌臨床特征無(wú)顯著相關(guān)性(P>0.05)。p62(質(zhì))表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)，而與其他指標(biāo)無(wú)關(guān)，見(jiàn)表3。

表2 Beclin1與p62表達(dá)與臨床指標(biāo)相關(guān)/例

3 討論

子宮頸癌是女性常見(jiàn)的一種惡性腫瘤，在女性生殖系統(tǒng)中發(fā)病率最高。地域性對(duì)宮頸癌的發(fā)病具有很大影響[6]。我國(guó)女性患有宮頸癌呈現(xiàn)各省市縣連接現(xiàn)象。大體趨勢(shì)為農(nóng)村比城市高，山區(qū)比平原高。宮頸癌患者平均發(fā)病年齡與地區(qū)存在一定的差異，我國(guó)主要見(jiàn)于40～50歲之間的女性，在60～70歲之間再次出現(xiàn)高峰，而20歲之前相對(duì)較少[7]。具體發(fā)病機(jī)制尚未闡明，子宮頸癌與早育、早婚、性生活紊亂、多產(chǎn)、社會(huì)經(jīng)濟(jì)地位低下以及HPV病毒感染等因素相關(guān)。

自噬是正常存在于真核細(xì)胞中的基礎(chǔ)代謝過(guò)程之一，具有高度保守性，在不同物種間均以雙層膜包裹細(xì)胞中廢棄細(xì)胞器或其他物質(zhì)呈遞至溶酶體降解為主要過(guò)程，維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定及物質(zhì)、能量再利用[8]。自噬可在應(yīng)激或營(yíng)養(yǎng)缺乏條件下被激活，而許多研究均發(fā)現(xiàn)部分腫瘤組織中也存在自噬現(xiàn)象。大量研究指出，自噬在抑制腫瘤中具有不可忽視的作用[9]。Beclin是一種自噬相關(guān)蛋白，研究發(fā)現(xiàn)Beclin基因敲除的小鼠比野生型小鼠更容易患有惡性腫瘤。然而將兩個(gè)Beclin小鼠的等位基因去除時(shí)，小鼠會(huì)出現(xiàn)宮內(nèi)死亡現(xiàn)象。研究得出，Beclin基因缺失時(shí)，細(xì)胞多出現(xiàn)異常細(xì)胞器及特定蛋白質(zhì)的積累[10]。自噬標(biāo)記蛋白p62失去活性會(huì)導(dǎo)致自噬功能出現(xiàn)障礙，損傷DNA，將細(xì)胞的氧化還原反應(yīng)破壞，增加退行性疾病出現(xiàn)，缺陷線粒體累及以及炎癥性疾病出現(xiàn)，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤出現(xiàn)。大多數(shù)研究指出，在健康的細(xì)胞中，自噬的發(fā)生發(fā)展可對(duì)腫瘤生長(zhǎng)產(chǎn)生一定影響，起到抑制腫瘤的效果[11]。但與此同時(shí)，自噬也可以通過(guò)對(duì)能量、細(xì)胞器等結(jié)構(gòu)的循環(huán)為腫瘤生長(zhǎng)提供前提條件。

在子宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織，p62主要在細(xì)胞質(zhì)中大量表達(dá)，且明顯高于周?chē)Ｗ訉m頸上皮的表達(dá)，這一結(jié)論與其他研究基本相符，這可能與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)[12]。由此猜想，p62轉(zhuǎn)移至細(xì)胞質(zhì)很可能與子宮頸麟狀細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展存在一定關(guān)聯(lián)。而p62轉(zhuǎn)移過(guò)程不能直接通過(guò)細(xì)胞核的核膜進(jìn)行轉(zhuǎn)移，可能是經(jīng)由核孔進(jìn)出，這主要是由核膜的特性所決定的。

本研究發(fā)現(xiàn)，Beclin1和p62不同，不僅在子宮頸鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，在細(xì)胞膜上也有表達(dá)，但其在腫瘤組織中的表達(dá)明顯低于周?chē)m頸上皮(P<0.05)。但對(duì)病理特征分析并未見(jiàn)Beclin1在宮頸癌組織中有表達(dá)的特異性。Beclin1和p62的陽(yáng)性表達(dá)率之間未見(jiàn)明顯的相關(guān)性。研究指出，Beclin1和p62蛋白、對(duì)自噬活性進(jìn)行判斷，能夠?qū)ψ訉m頸癌的轉(zhuǎn)移以及預(yù)后產(chǎn)生預(yù)測(cè)作用，臨床意義顯著[13]。

綜上所述，Beclin1、 p62的表達(dá)量與子宮頸癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，且p62的核漿轉(zhuǎn)移與子宮頸癌有相關(guān)性。臨床上，可根據(jù)Beclin1和p62的表達(dá)對(duì)疾病進(jìn)展進(jìn)行評(píng)估。

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(編輯：甘 艷)

Expression of Cervical Autophagy Marker Protein Beclin1,p62 and Clinical Significance

CHENFei，YUTingting,LIJun.

XiaoganHospitalAffiliatedtoWuhanUniversityofScienceandTechnology,Xiaogan,432000

Objective To study the expression of autophagy marker protein Beclin1,p62 and their significance for clinical diagnosis and treatment.Methods 140 cases of cervical squamous cell carcinoma specimens were selected,tissue samples using the included Beclin1 and p62 protein labeling.Positive results using semi-quantitative scoring method determination.Beclin1,p62 expression and clinical characteristics correlation analysis using χ2test.Results Beclin1 mainly expressed in the cytoplasm and cell membrane,as compared with normal cervical epithelium,Beclin1 expression in cervical cancer was significantly lower(P<0.05).But Beclin1 expression and clinicopathological had no correlation(P>0.05).Expression of p62 in cervical squamous cell carcinoma was significantly higher in the cytoplasm,and was closely related with lymph node metastasis(P<0.05).Beclin1 and positive expression of p62 had no significant correlation(P>0.05).Conclusion The expression of Beclin1,p62 are related with development of cervical cancer,and p62 nuclear transfer plasma is correlated with cervical cancer.Clinically,the disease progression can be assessed based on the expression of p62 and Beclin1.

Beclin1;p62;Cervical cancer;Clinical significance

432000 武漢科技大學(xué)附屬孝感醫(yī)院(孝感市中心醫(yī)院)

李 俊

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.02.013

R737.33

A

1001-5930(2017)02-0218-03

2016-04-08

2016-09-26)