陳 松

（承德市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，河北 承德 067000）

冬凌草甲素提純與分離

陳 松

（承德市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，河北 承德 067000）

冬凌草又稱冰凌草，其中含有的冬凌草甲素的提純與分離一直是業(yè)界較為關(guān)注的重點(diǎn)。目前較為常用的冬凌草甲素的提純法有實(shí)驗(yàn)室內(nèi)常用的乙醇提取法，但由于提取中所使用的溶劑毒性較大，提取的純度不高，因此未能大規(guī)模應(yīng)用到工業(yè)化生產(chǎn)中。而超臨界CO2萃取工藝屬于新工藝，該方法得出的結(jié)果提取效率高，適合大規(guī)模生產(chǎn)。本文主要簡(jiǎn)述該兩種提純分離方式，進(jìn)行對(duì)比并得出結(jié)論。

冬凌草甲素；乙醇提取法；柱色譜法；超臨界CO2萃取法

冬凌草是一種唇形科香茶菜屬的植物，在過(guò)去的研究中發(fā)現(xiàn)從冬凌草中提取的冬凌草甲素是一種貝殼杉烯二萜類的化合物，這是一種有抗癌功效的成分，能有效地靶向殺死食管癌109細(xì)胞、肝癌細(xì)胞BEL-7402、胃腺癌MGc80-3細(xì)胞，阻止多種植物性動(dòng)物腫瘤如ARS，ECA，P388等的擴(kuò)散，同時(shí)還能抑制食管上皮細(xì)胞的惡性增生。目前在臨床上，也多用于肝癌、食管癌和胰腺癌的治療，具有強(qiáng)抗癌活性的冬凌草甲素可以說(shuō)是醫(yī)學(xué)界研究重點(diǎn)，因此如何能高效省時(shí)地提取純度高的冬凌草甲素，也是研究的重心。本文主要簡(jiǎn)述乙醇提取法及超臨界CO2萃取工藝與柱色譜技術(shù)分離法兩種提純分離方式，進(jìn)行對(duì)比并得出結(jié)論。

1 儀器與試劑

多能式提取機(jī)組;工業(yè)用95%乙醇；粉狀活性炭；甲醇（分析純、色譜純）；石油醚、丙酮、氯仿（分析純）；冬凌草購(gòu)自山東某藥廠；冬凌草甲素對(duì)照品（含量98.3%）；柱層析硅膠；柱色譜硅膠、薄層色譜硅膠G；CO2（山東某氣體有限公司）SFE-2000型超臨界流體萃取裝置；Agilent1100型高效液相色譜儀。

2 乙醇提取法方法與結(jié)果

2.1 乙醇提取

取冬凌草2 kg加入95%乙醇，放置到多能式提取機(jī)中，在0.15 MKa下加熱，之后回收乙醇。過(guò)濾后濃縮，取回綠褐色的膏狀物，再加入水進(jìn)行溶解，棄固體后用復(fù)合溶劑進(jìn)行萃取。加入粉狀活性炭后回流脫色，抽濾而后得浸膏110 g，在用400 mL石油醚萃取4次后得最終浸膏80 g。

2.2 柱層析分離

用少量乙醇溶解浸膏后，加入柱層析硅膠，再拌炒后呈干粉狀。進(jìn)行裝柱后上層覆蓋一定適量硅膠，再用9:1的石油醚進(jìn)行洗脫，用TLC跟蹤流份后，在8:2的洗脫物中，將白色晶體洗出，而后進(jìn)行減壓過(guò)濾操作，并進(jìn)行洗白、干燥操作。

2.3 薄層層析分析

用甲醇溶解后的樣品與冬凌草甲素對(duì)照品置于統(tǒng)一硅膠G薄層板上進(jìn)行點(diǎn)樣，在用8:2氯仿-丙酮進(jìn)行展開(kāi)后，再噴硫酸（純度為50%）顯色處理，進(jìn)行加熱，可以看到最終樣品和對(duì)照品都具有同樣的Rf值（約0.36），樣品無(wú)雜質(zhì)斑，呈現(xiàn)亮黃綠色斑點(diǎn)，與樣品的斑點(diǎn)反應(yīng)基本一致。

3 關(guān)于乙醇提取法的討論

在本次實(shí)驗(yàn)中，可以看出冬凌草甲素在8:2的比例的石油醚-丙酮洗脫液中，進(jìn)行的脫色處理可以除去大部分的干擾色素，使結(jié)晶體的純度提高。再用5:5的石油醚-丙酮轉(zhuǎn)移洗脫物的時(shí)候，可以發(fā)現(xiàn)過(guò)程中有結(jié)晶較易析出的特點(diǎn)，本提純與分離的操作適合在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，所使用的溶劑便宜可得，操作簡(jiǎn)單、方便，無(wú)需借助大型的器材。

4 關(guān)于超臨界CO2萃取的方法與結(jié)果

4.1 超臨界萃取過(guò)程

先將經(jīng)過(guò)干燥后得冬凌草進(jìn)行研磨粉碎，過(guò)篩后將40目以下的冬凌草放進(jìn)萃取器，將實(shí)驗(yàn)裝置的控制系統(tǒng)開(kāi)啟，將萃取所需的壓力，溫度、CO2的流量及夾帶劑流量的實(shí)驗(yàn)操作值校定，同時(shí)將CO2的冷卻水浴溫度設(shè)定值調(diào)整后，開(kāi)啟CO2的鋼瓶，使氣體和夾帶劑進(jìn)入料泵（CO2的流量為20 g/min、夾帶劑為2 g/min），反應(yīng)結(jié)束后，關(guān)閉泵并進(jìn)行系統(tǒng)的降溫；而后再?gòu)男L(fēng)分離器中的萃取物放至取樣瓶中，進(jìn)行稱量，并用HPLC法進(jìn)行分析和檢測(cè)最終冬凌草甲素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

4.2 注意事項(xiàng)

在超臨界萃取的過(guò)程中，由于CO2的相對(duì)分子質(zhì)量較大，因此溶解能力在一定程度上有所限制，為了有效提取極性成分，一般都需要加入夾帶劑。夾帶劑劑可以調(diào)節(jié)極性并能提高待提取物的溶解度，提高提取率。通常有水、甲醇、乙醇等，在本實(shí)驗(yàn)中除了選擇了甲醇和95%乙醇，還加入了丙酮。其他的條件因數(shù)為40～80目，壓力為20 Mpa。最后使用HPLC法進(jìn)行分析提取，最終得出的結(jié)果含水95%乙醇與冬凌草甲素形成氫鍵的能力較強(qiáng)，考慮到水的存在和價(jià)格因素，95%的乙醇是夾帶劑的首選。另外，研究所得，夾帶劑中含水量的多少也會(huì)直接影響到提取率，提取率隨著含水量的增加呈現(xiàn)先上升再先下降，在10%時(shí)能達(dá)到0.381%，因此用10%含水量的乙醇作為夾帶劑是最佳選擇。

5 關(guān)于超臨界CO2萃取法的討論

超臨界CO2萃取法有著其自身獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，首先，它所使用的CO2對(duì)于環(huán)境無(wú)害，不會(huì)像傳統(tǒng)的乙醇提純法一樣對(duì)環(huán)境有污染，對(duì)人體也有危害，同時(shí)流程復(fù)雜，不適合大規(guī)模的生產(chǎn)。但乙醇提純法所使用的器材簡(jiǎn)單，所需材料在實(shí)驗(yàn)室研究中也較易取得，因而目前在實(shí)驗(yàn)室中還有一定的應(yīng)用價(jià)值。相比之下，超臨界CO2萃取法步驟簡(jiǎn)單、周期短、在控制好最佳實(shí)驗(yàn)條件的情況下，所能提取到的冬凌草甲素純度高，更適應(yīng)目前環(huán)境及工業(yè)生產(chǎn)的要求。

[1] 許欣新,等.超臨界CO_2萃取冬凌草甲素影響因素分析[J].中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報(bào),2009,29(6):156-159.

[2] 史曉東.冬凌草甲素提取工藝研究[J].健康必讀旬刊,2013(3):389-390.

本文編輯：吳 衛(wèi)

R284.2

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ISSN.2095-8242.2017.21.3972.01