李洋，董誠明，徐鵬，姚鋒

(河南中醫(yī)學(xué)院，河南 鄭州 450008)

冬凌草適宜采收期的研究△

李洋，董誠明*，徐鵬，姚鋒

(河南中醫(yī)學(xué)院，河南 鄭州450008)

目的：通過研究冬凌草生長時(shí)期的發(fā)育規(guī)律及有效成分的變化，初步探討冬凌草的適宜采收時(shí)期。方法：在冬凌草整個(gè)生長發(fā)育過程中，對(duì)株高、鮮干重的變化進(jìn)行測(cè)量，并用HPLC法測(cè)定植株中冬凌草甲素、冬凌草乙素、迷迭香酸的含量，進(jìn)行分析。結(jié)果：冬凌草干物質(zhì)累積的高峰期出現(xiàn)在9月下旬；冬凌草甲素含量在9月下旬出現(xiàn)相對(duì)較大值；冬凌草乙素在6月下旬出現(xiàn)最大值，在9月下旬出現(xiàn)相對(duì)較大值；迷迭香酸在6月下旬出現(xiàn)最大值，8月下旬出現(xiàn)相對(duì)較大值。結(jié)論：綜合分析，栽植期為一年的冬凌草適宜采收期為9月下旬。

冬凌草；適宜采收期；發(fā)育規(guī)律；有效成分

冬凌草Rabdosiarubescens(Hemsl.) Hara，學(xué)名碎米椏，為唇形科香茶菜屬多年生植物；味甘苦，性微寒，具清熱解毒、消炎止痛及抗腫瘤的功效[1-2]。中藥的療效主要與其有效成分的含量有關(guān)，冬凌草中的主要成分是貝殼杉烷二萜類化合物，目前研究最多且療效已被公認(rèn)的是冬凌草甲素和冬凌草乙素[3]。近年來發(fā)現(xiàn)以迷迭香酸為代表的冬凌草水溶性成分也有明顯的藥理活性[4-5]。冬凌草在民間作為清熱解毒、消炎止痛藥并用于抗癌已多年，經(jīng)20多年的藥理學(xué)研究和臨床驗(yàn)證，冬凌草具有獨(dú)特的抗菌消炎和多種保健作用。冬凌草既是當(dāng)今新崛起的具有多種功效的藥用植物，又是防風(fēng)固沙保持水土的優(yōu)秀植物，亦為優(yōu)良園林觀賞植物和重要蜜源植物，是很有開發(fā)前景的經(jīng)濟(jì)作物。

目前，由于亂采濫挖，冬凌草資源逐漸減少。為規(guī)范冬凌草種植，確保冬凌草質(zhì)量，確定其最佳采收適宜期，以達(dá)到冬凌草“安全、有效、穩(wěn)定、可控”的目的。本文主要考察上述3種有效成分，對(duì)冬凌草整個(gè)生長時(shí)期進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察，分析比較其變化規(guī)律，進(jìn)而確定冬凌草最佳采收期。作為多年生植物，不同生長年限的冬凌草采收期也不相同，相關(guān)研究表明冬凌草有3種采收方法：第一種方法是正常采葉法：7～8月份，將葉片全部采集，到深秋植株復(fù)原后再進(jìn)行第二次采收，適合于栽植期3年以上的冬凌草；第二種方法是輪采法：7～8月份，采取隔行采集的方法，枝葉枯萎前采收剩余部分，適合于栽植期2年以上的冬凌草；第三種方法是后期采法：在冬凌草枝葉枯萎前全部采收，適合于栽植期1年的冬凌草[6]。隨著冬凌草的綜合開發(fā)利用，藥材需求量大大增加，為滿足新藥研發(fā)及其市場(chǎng)需求，提高冬凌草質(zhì)量與產(chǎn)量已是迫不及待的任務(wù)，探索其適宜采收時(shí)期，對(duì)實(shí)現(xiàn)其質(zhì)量產(chǎn)量最大化具有重要意義。本研究性實(shí)驗(yàn)主要選取的是一年采收的冬凌草植株，對(duì)指導(dǎo)冬凌草的采收提供了一定理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)地的選擇

實(shí)驗(yàn)田地選取在河南省濟(jì)源市早廟村冬凌草規(guī)范化種植基地里，塊地向陽，沙質(zhì)土壤，適宜冬凌草栽種。

1.2實(shí)驗(yàn)種苗的選取

供試冬凌草種苗由河南省濟(jì)源冬凌草規(guī)范化種植基地提供，經(jīng)河南中醫(yī)學(xué)院董誠明教授鑒定為唇形科植物冬凌草Rabdosiarubescens(Hemsl.) Hara。

1.3大田取樣

在冬凌草生長發(fā)育初期，植株高5cm左右、3片葉片時(shí)(2008-03-25，氣溫8～19℃)開始采樣，采用5點(diǎn)取樣法在試驗(yàn)區(qū)中采集30株冬凌草種植植株的地上部分，每隔15d采樣一次，直至冬凌草完全枯萎時(shí)停止采樣(2008-11-20，氣溫1～12℃)。觀測(cè)指標(biāo)為：株高(地面到頂生葉片葉柄的高度)、鮮重、干重(自然干燥后稱重)。

1.4含量測(cè)定

將采集的冬凌草樣品自然干燥，打粉過四號(hào)篩，用于測(cè)定有效成分含量。供試品溶液的制備：精密稱取1g的冬凌草粉末，置于100mL具塞三角瓶中，加入50mL甲醇，稱量稱重，靜置30min，超聲30min，冷卻，補(bǔ)足重量，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾既得，測(cè)定冬凌草甲素及迷迭香酸的含量[7-8]。精密稱取1g冬凌草粉末，置于100mL具塞容量瓶中，加入50mL丙酮，稱量重量，靜置30min，水浴回流加熱90min，冷卻，補(bǔ)足重量，搖勻，過濾，吸取濾液25mL，水浴蒸干，用甲醇定容于25mL容量瓶中，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾既得，用于測(cè)定冬凌草乙素含量[9]。

2 結(jié)果與分析

2.1冬凌草生長發(fā)育規(guī)律及其有效成分的動(dòng)態(tài)積累

本實(shí)驗(yàn)研究了采收期為一年的冬凌草整個(gè)生長發(fā)育變化趨勢(shì)，全生育期為270d左右。一共采集樣品17次，主要觀測(cè)株高、葉片干鮮重、冬凌草甲素、冬凌草乙素、迷迭香酸等指標(biāo)，具體實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見表1。

表1 不同生長時(shí)期冬凌草生長狀況及其有效成分含量

冬凌草植株株高變化趨勢(shì)見圖1，由圖1可知：從3月25日開始，植株進(jìn)入萌芽期，此時(shí)期苗勢(shì)生長旺盛，漲幅較快，4月初至8月10日左右，此期間植株是生長期，株高一直在增高，基本上呈直線型增長趨勢(shì)，增長速度較快，該階段一直進(jìn)行營養(yǎng)生長；8月10日至9月10日，此期間植株增長緩慢，株高基本變化不大，營養(yǎng)生長基本停止，進(jìn)入開花期，表明生殖生長階段開始，10月10日以后植株基本停止生長，植株開始生殖生長，進(jìn)入種子形成期，到11月底氣候開始變冷，植株逐漸開始老化并逐步停止生長，進(jìn)入枯萎期。

冬凌草植株干鮮重變化見圖2，由圖2可知：植株葉片鮮重在9月10日左右出現(xiàn)最大值，在此之前一直呈上升趨勢(shì)，其中4月至5月初葉片鮮重增加明顯，植株葉片數(shù)逐漸增加、植株增粗生長旺盛；葉片干重呈上升趨勢(shì)，9月25日干重出現(xiàn)最大值后逐漸下降，這是由于植株開始進(jìn)行生殖生長，養(yǎng)分逐漸轉(zhuǎn)移，逐步進(jìn)入衰老期，葉片逐漸變黃、脫落導(dǎo)致的。

冬凌草植株有效成分含量變化見圖3，由圖3可知：冬凌草甲素基本上呈逐步減小趨勢(shì)，其中在9月25日時(shí)出現(xiàn)一個(gè)回升小高峰，在此之后植株進(jìn)入種子形成期，甲素含量逐漸減少；迷迭香酸在整個(gè)生長階段基本上呈“M”型波動(dòng)性變化，在植株進(jìn)入快速生長階段時(shí)即6月25日左右出現(xiàn)一個(gè)最大值，此后含量有所下降，在8月25日出現(xiàn)一個(gè)回升小高峰，此后含量逐漸減少。冬凌草乙素含量在植株整個(gè)生長期含量均較少，在表3中未顯示，其含量在6月25日至7月10日之間處于較高值，此階段植株生長發(fā)育快速，養(yǎng)分吸收較多，而后逐漸減少，在9月25日左右出現(xiàn)一個(gè)回升小高峰，此后冬凌草乙素含量逐漸減少。

2.2有效成分與其生長指標(biāo)的相關(guān)性分析

通過SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)不同生長時(shí)期冬凌草的株高、鮮重、干重、冬凌草甲素、冬凌草乙素、迷迭香酸六種指標(biāo)進(jìn)行了相關(guān)性分析，見表2。

圖1 一年中冬凌草植株株高變化趨勢(shì)

圖2 一年中冬凌草植株干鮮重變化示意圖

圖3 一年中冬凌草植株有效成分含量變化趨勢(shì)圖

株高鮮重干重冬凌草甲素迷迭香酸冬凌草乙素株高1.000鮮重0.905**1.000干重0.969**0.965**1.000冬凌草甲素-0.845**-0.760**-0.774**1.000迷迭香酸-0.652**-0.297-0.4390.4801.000冬凌草乙素-0.498*-0.181-0.2820.4780.825**1.000

注：*表示顯著相關(guān)(P<0.05)，**表示極顯著相關(guān)(P<0.01)

冬凌草生長指標(biāo)及其有效成分含量的相關(guān)性分析見表2，由表2可知：冬凌草甲素含量與株高、鮮重、干重之間呈極顯著負(fù)相關(guān)(P<0.01)，與迷迭香酸、冬凌草乙素呈正相關(guān)；迷迭香酸與冬凌草乙素呈顯著正相關(guān)(P<0.01)，兩者均與冬凌草甲素呈正相關(guān)性；與冬凌草株高呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05或P<0.01)，與鮮重呈負(fù)相關(guān)。相關(guān)性分析結(jié)果的表明：冬凌草三種有效成分的含量與植株生長、葉片干鮮重之間呈負(fù)相關(guān)性，冬凌草藥材應(yīng)在冬凌草生物產(chǎn)量適宜時(shí)及時(shí)采收，在考慮產(chǎn)量的同時(shí)也充分注意有效成分含量問題，確保藥材的高質(zhì)高產(chǎn)。

采用多指標(biāo)綜合加權(quán)評(píng)分法，從株高(a)、葉片干重(b)、葉片鮮重(c)、冬凌草甲素(d)、迷迭香酸(e)、冬凌草乙素(f)幾個(gè)方面對(duì)冬凌草不同生長時(shí)期的綜合效益進(jìn)行分析評(píng)價(jià)，從而篩選出最佳采收時(shí)期，分別賦予不同主觀系數(shù)：0.1、0.2、0.2、0.2、0.1、0.2，得到綜合加權(quán)評(píng)分值OD值。綜合加權(quán)平均評(píng)分值見表3(其中序號(hào)1～17表示從3月25日到11月25日不同采樣時(shí)期)。

OD=(0.1×ai/amax+0.2×bi/bmax+0.2×ci/cmax+0.2×di/dmax+0.1×ei/emax+0.2×fi/fmax)×100

其中i指第幾次采樣時(shí)期；max指該指標(biāo)項(xiàng)下最大值。

表3 不同采收時(shí)期冬凌草的產(chǎn)量及質(zhì)量綜合評(píng)價(jià)

由表3可知，7號(hào)和13號(hào)OD值最高均為69，即：6月25日和9月25日，此時(shí)間段植株產(chǎn)量與質(zhì)量品質(zhì)均較其他時(shí)間段高，初步建議冬凌草適宜采收為6月下旬和9月下旬。結(jié)合產(chǎn)區(qū)實(shí)際采收情況：適宜采收期確定為9月下旬，此時(shí)期冬凌草產(chǎn)量較高，各種指標(biāo)性成分含量適宜，使冬凌草的產(chǎn)量及質(zhì)量最大化。

3 小結(jié)與討論

本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)冬凌草整個(gè)生長時(shí)期的觀察，基本查明了冬凌草的生物學(xué)特性，其生長時(shí)期大致可以分為以下6個(gè)階段：萌芽期(3月中上旬)、生長緩慢期(3月下旬至6月中上旬)、快速生長期(6月中下旬至8月中上旬)、開花期(8月中下旬至9月下旬)、種子形成期(10月初至11月中上旬)、植株枯萎期(11月中下旬)。在冬凌草整個(gè)發(fā)育生長時(shí)期：株高最大值和鮮物質(zhì)累積高峰期出現(xiàn)在9月中上旬；干物質(zhì)累積高峰期出現(xiàn)在9月中下旬；冬凌草甲素出現(xiàn)兩次較大值，分別在8月上旬和9月下旬；迷迭香酸出現(xiàn)兩次較大值，分別是6月下旬和8月下旬；冬凌草乙素出現(xiàn)兩次較大值，分別為6月下旬和9月下旬。

在冬凌草植株生長早期(3～5月)雖冬凌草甲素含量很高，但干物質(zhì)累積很低，不適宜采收；在植株生長中期(6～7月)三種有效成分含量均比較高，同時(shí)植株也在快速生長，干物質(zhì)累積產(chǎn)量相對(duì)較高，適宜采收；在植株生長末期(8～9月)干物質(zhì)累積基本上已達(dá)到最大值，三種有效成分含量也均處于相對(duì)較大值范圍，也比較適宜采收；在入秋以后，植株干物質(zhì)重及三種有效成分含量均呈逐步下降趨勢(shì)，不適合采收。

制定適宜的采收期，對(duì)于提高冬凌草藥材的產(chǎn)量及質(zhì)量具有重要作用。由于本實(shí)驗(yàn)只研究了一年收獲期冬凌草的生長變化趨勢(shì)，并且只綜合考慮產(chǎn)量和質(zhì)量等相關(guān)因素，并未參考?xì)夂蜃兓茸匀灰蛩?，所以存在一定的局限性。由?shí)驗(yàn)研究結(jié)果分析，初步得出冬凌草最佳適宜采收期有兩個(gè)時(shí)期：6月下旬和9月下旬。再結(jié)合河南濟(jì)源冬凌草產(chǎn)區(qū)的一年收獲期冬凌草實(shí)際采收情況，綜合分析，確定冬凌草適宜采收期為9月下旬。適宜采收期的確定，對(duì)提高冬凌草的產(chǎn)業(yè)化、高產(chǎn)高質(zhì)化具有重要意義，加快了冬凌草藥材的開發(fā)與利用，促進(jìn)我國中藥材經(jīng)濟(jì)的迅速發(fā)展。

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BestHarvestTimeStudyofRabdosiarubescensHara

LI Yang，DONG Chengming*，XU Peng，YAO Feng

(Henan College of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou 450008，China)

Objective：To preliminarily determine the suitable harvest time ofRabdosiarubescensHara through studying the development rule and the change of the effective components during its growth period.Methods：During theR.rubescenswhole growth，the changes of plant height and fresh dry weight were measured.The contents of oridonin, ponicidin and rosmarinic acid were determined by HPLC.Results：The peak period of dry matter accumulation appeared in late September；relatively large value of the oridonin content appeared in late September；the maximum of ponicidin appeared early in late June and relatively large values appeared in late September；the maximum of rosmarinic acid occurred in late June and in late August appeared relatively large value.Conclusion：The best harvest time of one-yearR.rubescensis in late September.

RabdosiarubescensHara；Best harvest time；Growth rule；Effective components

國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目基金(2006BAI06A15-3)

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董誠明，教授，研究方向：中藥資源開發(fā)利用；Tel:(0371)86535313,E-mail:dcm663@sina.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.10.010

2014-04-26)