王 璞 ，王長宏 ，劉明暉*， 趙樹華， 張 學(xué)，吳思宇 ，尚宇航 ，趙雨杰

(1.吉林大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，吉林 長春 130021;2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 中醫(yī)科)

自擬抑酸止痛方對胃潰瘍大鼠胃酸及胃蛋白酶的影響

王 璞1，王長宏2，劉明暉2*， 趙樹華2， 張 學(xué)2，吳思宇1，尚宇航1，趙雨杰1

(1.吉林大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，吉林 長春 130021;2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 中醫(yī)科)

胃潰瘍?yōu)榕R床常見病[1]，目前抑酸劑、胃黏膜保護(hù)劑[2,3]等西藥方案成熟，療效確切，但是價(jià)格偏貴、毒副作用大等問題仍不容忽視，且停藥后復(fù)發(fā)率高，流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示達(dá)50%-70%。近年來，中藥對胃潰瘍治療作用的實(shí)驗(yàn)研究取得了諸多進(jìn)展[4]，顯示出獨(dú)特的優(yōu)勢。本課題采用實(shí)驗(yàn)室常用的醋酸涂抹法復(fù)制大鼠消化性潰瘍模型，以胃液量、胃酸度及胃蛋白酶活性為觀察指標(biāo)，對抑酸止痛方治療消化性潰瘍的療效及作用機(jī)理進(jìn)行探討，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 藥材與試劑 海螵蛸、乳香、沒藥，由吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院中藥房提供，經(jīng)執(zhí)業(yè)中藥師鑒定均為地道藥材，質(zhì)量合格；奧美拉唑腸溶膠囊(沈陽澳華制藥股份有限公司，批號：20121013，規(guī)格：20 mg/粒)；酚酞(天津永晟精細(xì)化工有限公司，批號：20130428，分析純)；胃蛋白酶測試盒(南京建成科技有限公司，批號：20140310)；NaOH(齊齊哈爾化工總廠，批號：20130528)，水合氯醛(青島金沙字庫化工廠，批號：40448)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康Wistar大鼠60只，SPF級，雌雄各半，體重200±20 g，由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號：SCXK(吉)20070003，動(dòng)物飼養(yǎng)：恒溫22℃，大鼠自由進(jìn)食進(jìn)水，室內(nèi)保持自然光暗周期。

1.3 儀器 MP51001型電子秤(上海橫平科學(xué)儀器有限公司)；5810型低溫高速離心機(jī)(德國Eppendorf公司)；BlueStar Plus紫外-可見分光光度計(jì)(北京萊伯泰科儀器有限公司)。

1.4 方法

1.4.1 藥物制備 抑酸止痛方中海螵蛸：乳香：沒藥按2∶1∶1比例組成，首次加10倍于中藥質(zhì)量蒸餾水浸泡2 h后，常規(guī)煎煮2次，每次30 min，濾出藥液并加熱濃縮成每1 ml藥液含原藥材2 g，冷卻后放置于4℃冰箱備用，待使用時(shí)加入蒸餾水稀釋至所需濃度。

1.4.2 動(dòng)物模型制備 將Wistar大鼠60只按隨機(jī)數(shù)字法分成假手術(shù)組、模型組、中藥大劑量組、中藥中等劑量組、中藥小劑量組及西藥對照組，每組10只，雌雄各半，按照Takagi[5]方法復(fù)制大鼠胃潰瘍模型：用10%水合氯醛按0.2ml·100 g-1比例對其進(jìn)行腹腔給藥[6]，待麻醉后將大鼠仰臥固定，去毛，用75%乙醇進(jìn)行消毒，用手術(shù)刀從劍突下部沿腹白線打開長度約2 cm的刀口，打開腹腔，于胃黏膜下層注入冰醋酸，生理鹽水清洗局部，縫合腹壁；假手術(shù)組開腹后于胃黏膜下層注入同體積生理鹽水。手術(shù)后第3天開始給藥，中藥大劑量組按1.0 g·kg-1體重日1次灌胃(相當(dāng)于成人劑量的20倍)；中藥中等劑量組按0.5.0 g·kg-1體重日1次灌胃(相當(dāng)于成人劑量的10倍)；中藥小劑量組按0.25 g·kg-1體重日1次灌胃(相當(dāng)于成人劑量的5倍)；西藥對照組以奧美拉唑水溶液4 mg·kg-1體重日1次灌胃；假手術(shù)組及模型組給予相同體積的蒸餾水，以上各組給藥天數(shù)為14 d。

1.4.3 指標(biāo)檢測 胃液檢測:給藥結(jié)束后1天，大鼠背位固定，剪開腹腔，結(jié)扎賁門，摘取全胃，于胃大彎處剪一小口，將胃內(nèi)容物收集于刻度離心管中，記錄胃液量。胃總酸度檢測 :所收集胃液置于離心管中，以半徑4 cm、轉(zhuǎn)速3 000 r/min離心15 min后，吸取上層清液1 ml，加酚酞指示劑1滴，用0.01 mol·L-1的NaOH滴定至指示色不變，根據(jù)所消耗NaOH量，由公式總酸度(mol·L-1)=10×耗去NaOH溶液量(ml)可計(jì)算胃總酸度。胃蛋白酶活性的檢測:依據(jù)胃蛋白酶測試盒說明書進(jìn)行檢測，取反應(yīng)終止后的樣本在660 nm波長處測定光密度(OD)，代入回歸方程(以標(biāo)準(zhǔn)品胃蛋白酶OD值對質(zhì)量濃度進(jìn)行回歸分析)計(jì)算胃蛋白酶活性(U/ml)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

與模型組對比，各組大鼠胃液量、胃酸總量及胃蛋白酶活性均顯著降低(P<0.05)；與奧美拉唑組對比，中藥高劑量組各項(xiàng)指標(biāo)無顯著差異(P>0.05)；中藥中、低劑量組各項(xiàng)指標(biāo)高于中藥高劑量組及奧美拉唑組(P<0.05)；隨著中藥劑量的增加，各項(xiàng)觀察指標(biāo)依次降低(P<0.05)，說明抑酸止痛方療效與劑量成正相關(guān)。具體見表1。

表1 抑酸止痛方對大鼠胃液量、胃酸總量 及胃蛋白酶活性的影響

a與b:P<0.05;a與c:P<0.05;b與cP>0.05。

3 討論

一直以來，“胃酸-胃蛋白酶自身消化”被認(rèn)為是消化性潰瘍的最終形成原因[7，8]，這一觀念在“HP時(shí)代”仍占主導(dǎo)地位。胃蛋白酶是由胃主細(xì)胞分泌的胃蛋白酶原經(jīng)胃酸激活而形成，它具有降解蛋白質(zhì)分子的作用，因此對消化道黏膜有侵襲作用[9]。胃液是消化液中的主要成分，胃黏膜壁細(xì)胞、主細(xì)胞和黏液細(xì)胞均能分泌，由胃酸、胃蛋白酶、黏液、氯化鈉、氯化鉀等成分組成。胃酸有多種作用，其主要功能之一就是激活胃蛋白酶原，使之轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂猩锘钚缘奈傅鞍酌?，同時(shí)為胃蛋白酶發(fā)揮作用提供適宜的外界環(huán)境。當(dāng)胃內(nèi)pH值上升超過4.0時(shí)[10]，胃蛋白酶即失活，因此胃蛋白酶的活性受到胃內(nèi)環(huán)境制約，我們在探討消化性潰瘍的病因病機(jī)及治療方案時(shí)，首先要考慮胃酸的作用[11-12]。綜上，胃酸的作用在潰瘍發(fā)生中占主導(dǎo)地位。

抑酸止痛方是臨床驗(yàn)方，方劑組成為海螵蛸、乳香、沒藥[13]，其中海螵蛸抑酸、定痛、止血、愈瘍之功效；乳香行氣止痛；沒藥散瘀結(jié)、消腫脹。有研究報(bào)道，以海螵蛸、乳香、沒藥為主要組成的方劑在研究中普遍應(yīng)用于非甾體型、慢性乙酸性、幽門結(jié)扎型和應(yīng)激型胃潰瘍模型，均有顯著的抗?jié)冏饔谩?/p>

本研究表明，抑酸止痛方對幽門結(jié)扎型大鼠胃潰瘍模型可顯著降低胃總酸度并能夠抑制胃蛋白酶活性，且無明顯的毒副作用。

[1]王長宏，劉明暉，王 璞，等.六君子湯對胃潰瘍大鼠胃組織中EGF、TGF-α的影響[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，31(3)：448.

[2]Kjeiiev S.The trefoil factor family-small peptides with multiple-functionalities [J].Cell Mol Life Sci,2009，66(8):1350.

[3]Syam AF,Sadikin M,Wanandi SI,et al.Molecular mechanism on healing process of peptic ulcer [J].Acta Med Indones,2009，41(2):95.

[4]趙偉國，李 冀，柴劍波，等.大黃黃連瀉心湯、理中丸對醋酸涂抹型胃潰瘍寒熱證大鼠模型胃組織EGF、TGF-α的影響[J].遼寧中醫(yī)雜志，2012，39(1)：49.

[5]Tarnawski A，Santos AM，Hanke S，et al.Quality of gastric ulcer healing.Is it influenced by antiulcer drugs[J].Scand J Gastroenterol,1995,208(Suppl):9.

[6]徐淑云，卞如濂，陳 修.藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法[M].第3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002.201-210，693，713-735.

[7]張志勇，孫公凱，楊世忠.表皮生長因子在消化道潰瘍中的研究進(jìn)展[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，16(3)：388.

[8]王 瑋，孫 梅.胃腸黏膜抗損傷和修復(fù)新進(jìn)展[J].世界華人消化雜志，2005，13(19)：2355.

[9]劉錦宙，楊 燕，李學(xué)良.Nesfatin-1對大鼠胃黏膜胃酸和胃蛋白酶分泌機(jī)制的研究 [J].中國生化藥物雜志，2014，34(9)：46.

[10]Chen D，Zhao C.Complexity of gastric acid secre tion revealed by targeted gene disruption in mice [J].Curr Pharm Design，2010，16(11)：1235.

[11]Qi Z，Jie L，Haixia C，et al.Effect of reb amipide on quality of peptic ulcer healing in rat [J].Dig Dis Sci，2009，54(9)：1876.

[12]Celinski K,Kunturek PC,Kunturek SJ,et al.Effects of melatonin and tryptophan on healing of gastric and duodenal ulcers with Helicobacter pylori infection in humans [J].J Physiol Pharmacol,2011，62(5):521.

[13]趙紅曄，王 濱.中藥胃黏膜保護(hù)作用的研究現(xiàn)狀與進(jìn)展 [J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008,29(7)：843.

國家中醫(yī)藥管理局全國名老中醫(yī)藥專家傳承工作室項(xiàng)目([2014]20) ；吉林大學(xué)“大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃”項(xiàng)目 (20161100548)；吉林大學(xué)課題項(xiàng)目(2016YX285)

1007-4287(2017)02-0311-02

2016-10-10)

*通訊作者