呂健勇，胡永斌

(1.柳州市婦幼保健院 病理科,廣西 柳州545001;2.中南大學(xué)湘雅醫(yī)院,湖南 長沙410008)

SIRT1在宮頸病變中的臨床應(yīng)用

呂健勇1，胡永斌2

(1.柳州市婦幼保健院 病理科,廣西 柳州545001;2.中南大學(xué)湘雅醫(yī)院,湖南 長沙410008)

宮頸病變[1]( Cervical erosion)又名宮頸糜爛，一般由于宮頸鱗狀上皮破損，被柱狀上皮外露增生分化包裹鱗狀上皮，由于被柱狀上皮表觀呈紅色，被認(rèn)為是“假性糜爛”。其無傳染性，常發(fā)生于已婚女士，部分發(fā)生于健康女士，主要臨床癥狀為陰道分泌物增多，少量血性白帶及性交后出血。相關(guān)研究表明[2-4]，宮頸病變分為宮頸人乳頭瘤病毒(HPV)感染、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)、宮頸癌(CC)，其中CIN又分為CIN I、CIN II和CIN III三級。SIRT1是近年來逐漸被發(fā)現(xiàn)于腫瘤組織中的能夠抑制腫瘤細(xì)胞生長的因子。雖然SIRT1的研究已經(jīng)達(dá)到前所未有的深度，但其在宮頸病變中的研究還處于空缺。因此本文旨在探討分析宮頸病變者的宮頸病變組織與病變旁組織中的SIRT1的表達(dá)情況和宮頸病變的關(guān)系以及發(fā)病中的作用，探討宮頸上皮組織線粒體功能在宮頸病變發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制。報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取自2014年1月至2016年1月來我院接受檢查的宮頸病變患者50例作為研究對象，年齡從32歲到55歲不等，平均為(45.7±10.6)歲。所有患者均經(jīng)過病理科檢查、陰道鏡、白帶檢測確認(rèn)為宮頸病變并分級，由病理科保存病變組織和病變旁組織并將其制作成蠟塊備檢。所有患者均由兩名以上的病理醫(yī)師確診，并排除合并其他腫瘤和重大疾病者，排除正在用相關(guān)藥物者。

1.2 方法

采用組織病理、細(xì)胞病理、免疫組化、陰道鏡、白帶檢測等方法判定宮頸病變程度進(jìn)行分析分級，同時采用免疫組化(P16，Ki-67)方法監(jiān)測50例不同病情程度的病變組織和15例病變旁組織中的SIRT1的表達(dá)情況。詳細(xì)操作步驟為：①標(biāo)本收集與儲存，將待測組織置于燒杯中并固定48 h。本次標(biāo)本選擇的病變組織和病變旁組織大小為0.4 cm×0.4 cm×0.3 cm。隨后將固定好的標(biāo)本取出并反復(fù)應(yīng)用蒸餾水進(jìn)行沖洗，再將其先后加入到二甲苯Ⅰ和Ⅱ溶液里浸泡15 min隨后將其放入無水C2H5OHⅠ和Ⅱ各洗滌5 min，在無水C2H5OHⅡ中5 min；95%乙醇中浸泡5 min；85%乙醇中浸泡5 min；70%乙醇中浸泡5 min；蒸溜水中浸泡5 min。②抗原修復(fù)，取一定量的0.01 M梓檬酸鹽緩沖液(pH=6.0)進(jìn)行加熱；冷卻，并用提前制備的無菌蒸餾水和PBs緩沖液洗滌3次，共15 min。③免疫組化，現(xiàn)用現(xiàn)配3%HA，密封20 min，蒸餾水洗2次，每次5 min；再用PBS洗滌2次，持續(xù)5 min；山羊血清密封1 h；取出切片，繼續(xù)用PBS緩沖液進(jìn)行3次洗滌，共16 min；滴加即用型快捷免疫組化MaxVision試劑，濕盒中室溫靜置15 min；PBS洗3次，每次5 min；將其置于DAB中維持2-8 min，實時在鏡下觀察。將石蠟融化后并除去雜質(zhì)，并在石蠟中以1∶1的比例加入鄰二甲苯制成軟蠟A和軟蠟B，同時制備硬蠟A和硬蠟B(含有軟蠟B)，透明好的組織分別在軟蠟A和軟蠟B中浸泡30 min至40 min，在硬蠟A和硬蠟B中浸泡30 min。對待測樣品通過石蠟做包埋，將樣品與石蠟結(jié)合待凝固后應(yīng)用石蠟切片機(jī)將待測組織切成4 μm厚度芯片，將組織芯片置于65℃恒溫中5 h待測。

2 結(jié)果

2.1 宮頸病變分類分級情況 本組50例患者中有HPV感染者8例、宮頸上皮內(nèi)瘤變32例、宮頸癌10例，其中CIN I者10例，CIN II者10例，CIN III者12例。各病變分類之間在年齡上差異不顯著(P>0.05)?？梢赃M(jìn)行比較。

2.2 SIRT1在宮頸病變組織和病變旁組織中的表達(dá)情況 SIRT1在病變旁組織中陽性表達(dá)率和表達(dá)水平均較低，均明顯的低于HPV感染組織、CIN組織和宮頸癌組織(P<0.05)。根據(jù)Dunnet-t檢驗可知，宮頸癌組織中SIRT1陽性表達(dá)率高達(dá)100%，顯著高于病變旁組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。說明SIRT1在宮頸病變組織中均有表達(dá)，但癌前病變中表達(dá)低于癌組織,見表1。

表1 SIRT1在宮頸病變組織和病變旁組織中的表達(dá)情況 [%(n)]

注：χ2值各組與病變旁組織比較

2.3 SIRT1在宮頸病變中表達(dá)水平 隨著病變程度加重SIRT1的陽性表達(dá)水平也升高，其中在CIN III和宮頸癌組織中SIRT1表達(dá)水平最高，達(dá)3+，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。說明病情越嚴(yán)重SIRT1的陽性水平高，SIRT1的表達(dá)與病情嚴(yán)重程度呈現(xiàn)正相關(guān),見表2。

表2 SIRT1在不同宮頸病變組織中的表達(dá)水平

3 討論

宮頸病變主要臨床表現(xiàn)[5-8]為陰道分泌物增多，少量血性白帶及性交后出血。其分為三大類型，分別為宮頸人乳頭瘤病毒(HPV)感染、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)、宮頸癌(CC)。HPV為人乳頭瘤病毒，其常見于生殖器，易發(fā)生于女性外陰、陰道、宮頸和肛門周圍、肛管內(nèi)、尿道口，若其長期反復(fù)感染則可誘發(fā)腫瘤的發(fā)生。CIN[9]是由于HPV持續(xù)感染所致，CIN的概念最早于1967年由Richart提出，CIN又分CINI、CINII和CINIII，反映了宮頸癌發(fā)生演進(jìn)的過程。1973年被確認(rèn)，1988年被Bathasda(TBS)系統(tǒng)納入統(tǒng)稱。宮頸癌是目前討論最為熱烈的婦科惡性腫瘤，其發(fā)病多見于30歲到40歲之間，有年輕化趨勢。宮頸癌的發(fā)生對于女性來說具有毀滅性的打擊，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量，而傳統(tǒng)的診斷和治療手段存在一定的弊端。因此為了為宮頸癌的診治提供新的思路，有人[10,11]提出了應(yīng)用分子生物學(xué)進(jìn)行診治。最初有研究指出，SIRT1基本上全部位于細(xì)胞核內(nèi)，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，有人發(fā)現(xiàn)SIRT1還存在于細(xì)胞質(zhì)中，且其表達(dá)場所為細(xì)胞質(zhì)。相關(guān)報道指出[12]，SIRT1在肝癌細(xì)胞中的高表達(dá)，但其所轉(zhuǎn)錄的信使RNA含量與正常肝組織無顯著差異，說明SIRT1蛋白在細(xì)胞質(zhì)中的表達(dá)有一定的限度。SIRT1能夠抑制消化性腫瘤的發(fā)生以及結(jié)腸癌的形成，其是構(gòu)成癌細(xì)胞修復(fù)系統(tǒng)的主要基因，若其缺失，則會出現(xiàn)修復(fù)機(jī)制破壞，腫瘤抑制機(jī)制將會出現(xiàn)漏洞。數(shù)篇文獻(xiàn)表明[13]，SIRT1的高表達(dá)與血清高膽紅素與低細(xì)胞分化有關(guān)，分化程度越低其表達(dá)程度越高，而本研究傾向于研究其病變程度與SIRT1的表達(dá)關(guān)系，SIRT1在病變旁組織中陽性表達(dá)率和表達(dá)水平均較低，均明顯的低于HPV感染組織、CIN組織和宮頸癌組織，且該指標(biāo)隨著病變程度的加深而呈現(xiàn)陽性表達(dá)率升高的現(xiàn)象，即其在表達(dá)數(shù)量上逐漸升高，宮頸癌組織中SIRT1陽性表達(dá)率高達(dá)100%，顯著高于病變旁組織，這也說明宮頸癌組織細(xì)胞中SIRT1高表達(dá)，進(jìn)一步證實了SIRT1能夠在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的推斷，但其是抑制作用還是促進(jìn)作用，本研究由于條件有限未能做出證實。而隨著病變程度加重SIRT1的陽性表達(dá)水平也升高，其中在CIN III和宮頸癌組織中SIRT1表達(dá)水平最高，說明病情越嚴(yán)重，SIRT1的陽性表達(dá)水平越高。

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廣西壯族自治區(qū)柳州市科學(xué)技術(shù)局科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計劃課題(課題編號：2014J030418)

1007-4287(2017)02-0254-03

2016-05-15)