范偉光,孟 娟 ,蘇苗苗,劉 洋,石榮亞,石鵬輝,馬金彤

(保定市傳染病醫(yī)院，河北 保定071000)

*通訊作者

結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)應(yīng)用于結(jié)核桿菌感染的研究

范偉光,孟 娟*,蘇苗苗,劉 洋,石榮亞,石鵬輝,馬金彤

(保定市傳染病醫(yī)院，河北 保定071000)

目的 評(píng)價(jià)結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)(免疫斑點(diǎn)法)(T-SPOT.TB)的等效性,指導(dǎo)結(jié)核病的臨床診治。方法 對(duì)受試者進(jìn)行T-SPOT.TB、痰涂片、LDH、ADA、hs-CRP、ESR檢測(cè)，對(duì)結(jié)果進(jìn)行觀察、比較、分析。 結(jié)果 結(jié)核性疾病組T-SPOT.TB的陽(yáng)性率均顯著高于非結(jié)核性疾病組和正常對(duì)照組T-SPOT.TB的陽(yáng)性率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而非結(jié)核性疾病組和正常對(duì)照組T-SPOT.TB的陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；結(jié)核性疾病組中痰涂片陽(yáng)性的T-SPOT.TB檢測(cè)陽(yáng)性率為85.0%，痰涂片陰性的T-SPOT.TB檢測(cè)陽(yáng)性率為86.7%，兩者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；結(jié)核相關(guān)生化指標(biāo)(LDH、ADA、hs-CRP)和ESR檢測(cè)在T-SPOT.TB陽(yáng)性組的表達(dá)量均顯著高于T-SPOT.TB陰性組的表達(dá)量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 T-SPOT.TB為判斷是否感染結(jié)核的可靠指標(biāo)。

結(jié)核分枝桿菌；肺結(jié)核;結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)

(ChinJLabDiagn,2017,21:0220)

結(jié)核病是機(jī)體被結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)感染，引發(fā)的一種傳染病，主要經(jīng)過(guò)上呼吸道傳播，屬于慢性消耗性疾病。結(jié)核病是全球最為嚴(yán)重的衛(wèi)生疾病之一，據(jù)WHO相關(guān)數(shù)據(jù)分析，全球有約20億人感染過(guò)結(jié)核分枝桿菌，每年有約200萬(wàn)人死于結(jié)核[1，2]。早在2000年，國(guó)家衛(wèi)生部第4次結(jié)核流行病學(xué)調(diào)查中顯示，我國(guó)全年齡組結(jié)核分枝桿菌(MTB)感染率已達(dá)到44.5%,全國(guó)大約有5.5億人次感染了該菌，感染率高于全球人口感染率約1/3水平[3]。結(jié)核病是能治愈的，特別是早期進(jìn)行治療可明顯降低病死率。近年來(lái)，新發(fā)展的一種以T細(xì)胞檢測(cè)為基礎(chǔ)的結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)(T-SPOT.TB),被美國(guó)、歐洲等多國(guó)的臨床診療指南所推薦。本研究擬對(duì)所有受試者，進(jìn)行結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn),同時(shí)進(jìn)行痰涂片抗酸染色，結(jié)核相關(guān)生化指標(biāo)(LDH、ADA、hs-CRP)檢測(cè)和ESR測(cè)定，以評(píng)價(jià)T-SPOT.TB 的等效性,指導(dǎo)結(jié)核病的臨床診治。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇自2014年7月至2015年3月在保定市傳染病醫(yī)院住院、門(mén)診的結(jié)核患者110例。其中男62例，女48例，平均年齡為(31.25士16.67)歲，所有入選本研究的病例患者治療時(shí)間均小于1周，經(jīng)臨床或細(xì)菌學(xué)檢查確診[4]。其中肺結(jié)核患者80例，肺外結(jié)核患者30例。非結(jié)核組患者為住院、門(mén)診確診為其他傳染病的43例病例，男27例，女16例，平均年齡為(39.15士20.23)歲。健康對(duì)照組50例為排除結(jié)核病的健康體檢者，男26例，女24例，平均年齡為(29.01士13.54)歲。

1.2 試劑和儀器 主要試劑：結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)試劑盒(免疫斑點(diǎn)法)(T-SPOT.TB)購(gòu)自上海復(fù)星長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司；乳酸脫氫酶(L法)檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京九強(qiáng)生物技術(shù)股份有限公司；腺苷脫氨酶測(cè)定試劑盒(過(guò)氧化物酶法) 購(gòu)自北京九強(qiáng)生物技術(shù)股份有限公司；超敏C-反應(yīng)蛋白測(cè)定試劑(免疫比濁法) 購(gòu)自北京利德曼生化股份有限公司。主要儀器： HFsafe-1500 CLASS II TYPE B2生物安全柜、AU-640生化分析儀等。所有試驗(yàn)均嚴(yán)格按照試劑操作規(guī)程執(zhí)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)處理 應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料：采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料：根據(jù)數(shù)據(jù)方差齊性檢驗(yàn)，選擇采用t檢驗(yàn)或者t’檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)：α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)110例結(jié)核患者、43例非結(jié)核患者和50例健康體檢者的T-SPOT.TB陽(yáng)性率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用χ2檢驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 各組間T-SPOT.TB陽(yáng)性率的比較

注：*χ2=203.457,P <0.05，▲χ2=0.346,P>0.05

2.2 對(duì)110例結(jié)核患者痰涂片結(jié)果和T-SPOT.TB檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用χ2檢驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 結(jié)核患者痰涂片分析和T-SPOT.TB的結(jié)果比較

注：χ2=0.001,P>0.05

2.3 對(duì)T-SPOT.TB陽(yáng)性組和T-SPOT.TB陰性組的結(jié)核相關(guān)生化指標(biāo)(LDH、ADA、hs-CRP)檢測(cè)和ESR檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用t檢驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 相關(guān)生化指標(biāo)和ESR在T-SPOT.TB 陽(yáng)性組與T-SPOT.TB陰性組的比較分析

3 討論

近年來(lái)，中國(guó)地區(qū)結(jié)核病發(fā)病上升趨勢(shì)十分明顯，已嚴(yán)重影響我國(guó)人民生活質(zhì)量和健康保健。潛伏感染者和結(jié)核患者被盡早發(fā)現(xiàn)，對(duì)其進(jìn)行干預(yù)至關(guān)重要，是控制結(jié)核病傳染源，切斷結(jié)核病傳播途徑的關(guān)鍵。結(jié)核病明確診斷需要將臨床表現(xiàn)、影像學(xué)與病原免疫學(xué)檢查、組織病理學(xué)和對(duì)抗癆藥治療反應(yīng)等結(jié)合起來(lái)進(jìn)行評(píng)估。至今沒(méi)有一種準(zhǔn)確、快速、可靠檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的方法[5]。痰涂片抗酸染色陽(yáng)性對(duì)診斷肺結(jié)核有比較重要的臨床意義，該方法技術(shù)要求低，不需特殊儀器設(shè)備，但是非常容易漏檢，需要連續(xù)多次進(jìn)行鏡檢，并且該方法敏感性過(guò)低，不能區(qū)分死菌和活菌，即使沒(méi)有發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌也不能說(shuō)明沒(méi)有感染結(jié)核。結(jié)核相關(guān)生化指標(biāo)(LDH、ADA、hs-CRP)檢測(cè)雖然在結(jié)核感染期間都有不同程度的高表達(dá)，但并不能特異性的說(shuō)明是結(jié)核感染。ESR可作為了解肺結(jié)核患者病情的參考，在一定意義上又可以反映肺結(jié)核的活動(dòng)程度，但是需要其他試驗(yàn)方法的綜合判斷。

T-SPOT.TB是以T細(xì)胞為基礎(chǔ)的體外IFN-γ反應(yīng)測(cè)定方法[6]。以T細(xì)胞免疫應(yīng)答為基礎(chǔ)的T-SPOT.TB，其原理為機(jī)體初次感染結(jié)核分枝桿菌后會(huì)行成致敏的T淋巴細(xì)胞，當(dāng)機(jī)體再次感染結(jié)核分枝桿菌時(shí)，致敏的T淋巴細(xì)胞會(huì)釋放較高水平的細(xì)胞因子，其中最重要的為γ-干擾素(IFN-γ)。高水平的IFN-γ反應(yīng)可提示結(jié)核分枝桿菌感染[7，8]。T-SPOT.TB選用RD1區(qū)編碼的兩種早期分泌蛋白:培養(yǎng)濾過(guò)蛋白-10( CFP-10)與早期抗原靶-6( ESAT-6)，它們?cè)诮Y(jié)核分枝桿菌感染早期就能夠被機(jī)體的免疫系統(tǒng)識(shí)別，引發(fā)專(zhuān)一性的細(xì)胞免疫反應(yīng)，是特異性非常高的蛋白[9]，其避免了非特異性表位(如非結(jié)核分枝桿菌及卡介苗)的影響[10]。T-SPOT.TB為英國(guó)原裝進(jìn)口試劑 (Oxford Immunotec,UK)，是應(yīng)用ELISPOT技術(shù)測(cè)定產(chǎn)生IFN-γ的T細(xì)胞的個(gè)數(shù)。

本研究顯示結(jié)核性疾病組、非結(jié)核性疾病組、正常對(duì)照組T-SPOT.TB的陽(yáng)性率分別為86.4%、7.5%、4.0%。結(jié)核性疾病組T-SPOT.TB的陽(yáng)性率均顯著高于非結(jié)核性疾病組和正常對(duì)照組T-SPOT.TB的陽(yáng)性率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，可見(jiàn)T-SPOT.TB的敏感性很高；而非結(jié)核性疾病組和正常對(duì)照組T-SPOT.TB的陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，可見(jiàn)T-SPOT.TB的特異性也很高。痰涂片陽(yáng)性的T-SPOT.TB檢測(cè)陽(yáng)性率為85.0%，痰涂片陰性的T-SPOT.TB檢測(cè)陽(yáng)性率為86.7%，兩者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說(shuō)明T-SPOT.TB檢測(cè)在痰菌涂片陰性結(jié)核病患者中的敏感性也很高。結(jié)核相關(guān)生化指標(biāo)(LDH、ADA、hs-CRP)檢測(cè)和ESR在T-SPOT.TB陽(yáng)性組的數(shù)值均明顯高于T-SPOT.TB陰性組的數(shù)值，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明結(jié)核相關(guān)生化指標(biāo)(LDH、ADA、hs-CRP)檢測(cè)和ESR測(cè)定對(duì)結(jié)核的診斷也有一定價(jià)值。

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Research T-SPOT.TB applied to Mycobacterium tuberculosis infection

FANWei-guang,MENGJuan,SUMiao-miao,etal.

(InfectiousDiseaseHospitalofBaodingCity,Baoding071000,China)

Objective The results were analyzed to evaluate the meaning of T-SPOT.TB in the clinical diagnosis and treatment of tuberculosis.Methods:All the samples were examined by T-SPOT.TB,sputum smear,LDH,ADA,hs-CRP and ESR test.All the testing items were performed strictly in accordance with the Reagent testing instructions.Methods The T-SPOT.TB positive rate of the tuberculous group was significantly higher than that of non-tuberculosis disease group and control group(P<0.05);However,the T-SPOT.TB positive rate was no statistically significant between non-tuberculosis group and control group.(P>0.05).Positive rate of T-SPOT.TB test was 85.0% for Sputum smear-positive cases,and 86.7% for Sputum smear negative cases,with no statistically significant difference(P>0.05).It showed that T-SPOT.TB test in the sputum smear negative TB patients had a high sensitivity.The amount of LDH、ADA、hs-CRP and ESR test in T-SPOT.TB positive group were significantly higher than that in T-SPOT.TB negative groups(P<0.05).Results Conclusion T-SPOT.TB is a reliable index for judging whether infected with TB.

Mycobacterium Tuberculosis;TB;T-SPOT.TB

1007-4287(2017)02-0220-03

R521

A

范偉光，男，主管技師，碩士，擅長(zhǎng)臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)、生化檢驗(yàn)、免疫檢驗(yàn)等;孟娟，女，主管護(hù)師，從事感染科護(hù)理管理.

2016-01-30)