任黨利，王賀孔，靳 穎，黃 磊，劉冀琴

急性冠狀動(dòng)脈綜合征患者ALDH2基因型和紅細(xì)胞體積分布寬度變化的關(guān)系

任黨利，王賀孔，靳 穎，黃 磊，劉冀琴

目的 分析我國急性冠狀動(dòng)脈綜合征(acute coronary syndrome, ACS)患者乙醛脫氫酶2(ALDH2)基因多態(tài)性與紅細(xì)胞體積分布寬度(RDW)變化的關(guān)系。方法 收集128例ACS患者臨床基線數(shù)據(jù)，按不同RDW區(qū)間進(jìn)行分類，對(duì)患者相關(guān)的臨床數(shù)據(jù)及ALDH2基因型分布頻率，以及等位基因分布頻率進(jìn)行比較，并分析ALDH2基因多態(tài)性及冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度與RDW水平的相關(guān)性。結(jié)果 將RDW按四分位數(shù)分為4組，不同RDW組間ACS患者其超敏C反應(yīng)蛋白Q1～Q4組分別為：(4.12±0.77)、(5.89±0.89)、(5.01±0.76)、(7.66±0.95)mg/L和血肌酐Q1～Q4組分別為：(70.3±19)、(76.8±21)、(74.1±23)、(86.5±24)μmol/L，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。4組間ALDH基因型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，G和A等位基因分布的頻率差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。ALDH基因型與Gensini積分呈顯著相關(guān)(r=-0.154,P<0.05)，ALDH2基因型多態(tài)性對(duì)RDW大小存在顯著性影響(r=-0.386,P<0.05)。結(jié)論 我國ACS患者中ALDH2基因多態(tài)性與RDW存在密切的相關(guān)性。

乙醛脫氫酶2；紅細(xì)胞體積分布寬度；急性冠狀動(dòng)脈綜合征

急性冠狀動(dòng)脈綜合征(acute coronary syndrome, ACS)是以冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂或侵襲，繼發(fā)完全或不完全閉塞性血栓形成為病理基礎(chǔ)的一組常見的急性危重綜合征，由于對(duì)健康威脅較大，其診斷和預(yù)防一直是心血管學(xué)界的一個(gè)重要領(lǐng)域。紅細(xì)胞分布寬度(red blood cell distribution width, RDW)既往多用來鑒別和診斷各種貧血的類型，近些年有研究發(fā)現(xiàn)RDW是ACS患者近期生存情況及不良心血管事件發(fā)生的獨(dú)立預(yù)測因子[1，2]。乙醛脫氫酶 2(aldehyde dehydrogenase-2, ALDH2)是存在于線粒體內(nèi)的一種氧化乙醛的酶，在乙醇和硝酸甘油及氧化應(yīng)激等代謝過程中發(fā)揮重要作用[3]。近年研究發(fā)現(xiàn)，該基因的多態(tài)性與心血管相關(guān)疾病密切相關(guān)[4，5]。全基因組關(guān)聯(lián)分析在2012年研究證實(shí)了Glu504Lys等位基因是冠心病的一個(gè)遺傳易感基因位點(diǎn)[6]。由于ALDH基因多態(tài)性和RDW兩者在ACS中均起到重要的指示作用，但其關(guān)系尚未明確，該試驗(yàn)旨在分析ACS患者中ALDH2基因多態(tài)性與RDW水平的相關(guān)性。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 連續(xù)選取2016-03至2016-06在武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院心內(nèi)科住院治療的ACS患者128例，男81例，女47例，年齡22～78歲，其中ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者56例，非ST段抬高心肌梗死(NSTEMI)患者22例，不穩(wěn)定性心絞痛(UA)患者50例，根據(jù)RDW四分位數(shù)分為Ⅰ組(10.9%～12.1%)Ⅱ組(12.2%～13.6%)；Ⅲ組(13.7%～14.6%)；Ⅳ組(14.7%～18.6%)。

1.2 方法

1.2.1 病例入選 STEMI、NSTEMI、UA診斷均符合2012、2013年ACCF/AHA發(fā)布的全球有關(guān)STEMI和NSTEMI/UA診療指南中的相關(guān)定義，診斷標(biāo)準(zhǔn)：中華醫(yī)學(xué)會(huì)2012年急性非ST段抬高型ACS診斷和治療指南及 2010年急性ST段抬高型心肌梗死診斷與治療指南中頒布的ACS診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：惡性腫瘤；嚴(yán)重肝病或者腎臟衰竭；失血性貧血；近半年有輸血或獻(xiàn)血者、免疫性疾病、甲狀腺疾病、近期服用影響紅細(xì)胞的藥物以及近一個(gè)月有嚴(yán)重的感染等。

1.2.2 指標(biāo)測定 所有患者入院即刻及入院第2日晨采靜脈血進(jìn)行完善的血液生化檢查，取靜脈EDTA鉀或肝素抗凝血3 ml，RDW、血紅蛋白(HGB)及白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)通過血常規(guī)分析檢測(XN-1000，希森美康公司)。西門子全自動(dòng)生化儀advia2400對(duì)相關(guān)的生化指標(biāo)進(jìn)行檢測，試劑及相關(guān)的質(zhì)控和定標(biāo)液為西門子試劑提供。hs-CRP采用免疫散射比濁法，于BNII全自動(dòng)蛋白分析儀(西門子公司)上進(jìn)行，試劑購自西門子醫(yī)學(xué)診斷產(chǎn)品有限公司。

1.2.3 Gensini積分測定 患者于我院導(dǎo)管室行冠狀動(dòng)脈造影，手術(shù)操作至少有2名經(jīng)驗(yàn)豐富的心內(nèi)科醫(yī)師完成，使用Judkins法行冠狀動(dòng)脈造影，對(duì)左、右冠狀動(dòng)脈行多體位投照，狹窄判斷采用直徑法。經(jīng)定量冠狀動(dòng)脈造影 (quantitative coronary angiography，QCA) 軟件計(jì)算Gensini積分，采用Gensini評(píng)分[7]方法對(duì)每支冠狀動(dòng)脈血管病變狹窄程度進(jìn)行定量評(píng)分。根據(jù)造影結(jié)果，按狹窄<25%、25%～50%、51%～75%、76%～90%、91%～99%及100%分別計(jì)1分，2分，4分，8分，16分及32分；同一支血管的不同節(jié)段，乘以其評(píng)分等于上述記分乘以病變所在節(jié)段系數(shù)：左冠狀動(dòng)脈主干系數(shù)為5；前降支近段系數(shù)為2.5，中段系數(shù)為1.5，心尖支及第一對(duì)角支病變的系數(shù)為1.0，第二對(duì)角支系數(shù)為0.5；回旋支近段系數(shù)為2.5，回旋支中段及遠(yuǎn)段鈍緣支右冠后降支系數(shù)均為1.0；左心室后支系數(shù)0.5。上述病變處的積分累計(jì)求和為該患者冠狀動(dòng)脈病變的Gensini積分。

1.2.4 ALDH2基因檢測 采用ALDH2基因型檢測試劑盒檢測(上海百傲科技有限公司)，先經(jīng)過細(xì)胞裂解的辦法提取和純化外周血DNA。ALDH2基因特異引物經(jīng)PCR擴(kuò)增：目標(biāo)DNA經(jīng)由：(1)50 ℃，5 min；(2)94 ℃，5 min；(3)94 ℃ 25 s，60 ℃ 25 s，72 ℃ 30 s共35個(gè)循環(huán)；(4)72 ℃，5 min。將PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物最后放入裝有基因芯片的BaiOe-Hyb全自動(dòng)雜交儀中，運(yùn)行雜交程序。反應(yīng)結(jié)束后取出基因芯片，將基因芯片放入生物芯片識(shí)讀儀中，用BaiO基因芯片圖像分析軟件(Bai OArray Doctor V2.0)進(jìn)行圖像掃描與數(shù)據(jù)分析，輸出檢測結(jié)果判斷樣品的基因型，最后進(jìn)行分析。

2 結(jié) 果

2.1 一般資料對(duì)比 128例ACS患者的一般臨床基線特征、實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)如表1所示，不同RDW組間ACS患者其hs-CRP和血肌酐比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其他因素的對(duì)比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 ALDH2基因型分布頻率以及等位基因分布頻率 各組ALDH2基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡。經(jīng)χ2檢驗(yàn)分析，4組間ALDH基因型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，G和A等位基因分布的頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。且Q4組G等位基因頻率低于Q1組(63.5%vs85.0%)，A 等位基因頻率高于Q1組(36.5%vs15.0%)。見表2。

2.3 ALDH2基因多態(tài)性與Gensini積分和RDW水平的相關(guān)性 ALDH2基因型與Gensini積分呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.154,P=0.038)，并且ALDH2基因型多態(tài)性對(duì)RDW大小存在顯著性影響(r=-0.386,P=0.021)，提示RDW和ALDH基因型在一定程度上可以反映ACS患者冠脈病變的嚴(yán)重程度。

表1 不同紅細(xì)胞體積分布寬度四分位數(shù)組臨床基線特征 [±s；(n;%)]

注：與Q1組比較，①P<0.05

表2 ALDH2基因型分布頻率及等位基因分布頻率 (n;%)

3 討 論

在ACS中，動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂和血栓形成密不可分，但是目前心血管疾病的非傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素正受到越來越多的重視，尤其像RDW和ALDH基因這類指標(biāo)越來越受到關(guān)注。國內(nèi)外多篇報(bào)道指出RDW可作為評(píng)價(jià)心血管事件的危險(xiǎn)及預(yù)后的指標(biāo)，增高的RDW與心血管事件的發(fā)病率和病死率密切相關(guān)[8]。這大大拓寬了RDW在臨床的應(yīng)用范圍。RDW與心血管疾病的關(guān)系具體作用機(jī)制還不清楚，人們通過研究猜測紅細(xì)胞在炎性反應(yīng)的狀態(tài)下會(huì)出現(xiàn)加速破壞或者緩慢成熟，進(jìn)而導(dǎo)致RDW增大。

ALDH2基因位于人類第12號(hào)染色體，由于ALDH2基因存在一個(gè)單核苷酸多態(tài)性，導(dǎo)致氨基酸序列第504位上的谷氨酸被賴氨酸替換。在人群中該酶基因型有三種組合方式：野生型ALDH2*1/*1，產(chǎn)生具有正常催化活性的酶；突變型ALDH2*1/*2和ALDH2*2/*2，突變型這兩種基因型產(chǎn)生的酶活性很低[9]。該基因多態(tài)性的分布在不同人種、甚至民族間往往存在差異。在我國，該基因突變發(fā)生率顯著高于西方國家，中國漢族人群ALDH2基因Glu504Lys多態(tài)達(dá)30%～50%的突變率[10]。ALDH2是乙醇代謝通路的關(guān)鍵酶和重要的抗氧化應(yīng)激分子[11]。

綜上所述，在發(fā)生ACS時(shí)，尤其是在ALDH基因突變型患者中，炎性反應(yīng)誘發(fā)的斑塊破裂和血栓形成的同時(shí)，伴有氧自由基大量堆積，紅細(xì)胞膜在自由基的攻擊下可形成脂質(zhì)自由基，發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，使膜磷脂降解和變異導(dǎo)致紅細(xì)胞脆性增加,紅細(xì)胞加速破裂，同時(shí)大量氧自由基影響骨髓造血，使造血進(jìn)程緩慢，最終導(dǎo)致RDW的改變[12]。在本實(shí)驗(yàn)中，筆者證實(shí)了在ACS中不同RDW分組中超敏C反應(yīng)蛋白和血肌酐差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，ALDH基因型以及G和A等位基因在4組間分布差異也存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ALDH2基因多態(tài)性與冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度對(duì)RDW水平的相關(guān)性分析得知：ALDH基因型與Gensini積分呈顯著負(fù)相關(guān)，并且ALDH2基因型多態(tài)性對(duì)RDW大小存在顯著性影響，提示RDW和ALDH基因型在一定程度上可以反映ACS患者冠脈病變的嚴(yán)重程度。也就是說，RDW和ALDH基因多態(tài)性存在密切的相關(guān)性，對(duì)于ACS患者的臨床診斷價(jià)值是一樣的。但是，相對(duì)于昂貴和繁瑣的ALDH2基因多態(tài)性檢測，RDW檢測更為廉價(jià)和快速。RDW除了輔助貧血診斷之外，在心血管疾病患者中有著更為廣泛的潛在應(yīng)用價(jià)值。

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(2016-10-12收稿 2016-11-20修回)

(責(zé)任編輯 岳建華)

Relationships between genotype of ALDH2 and red blood cell distribution width in patients of acute coronary syndrome

REN Dangli, WANG Hekong, JIN Yin, HUANG Lei, and LIU Jiqin.

Department of Clinical Laboratory, Affiliated Hospital of Logistics University of Chinese People’s Armed Police Force, Tianjin 300162, China

Objective To analyze the relationship between red blood cell distribution width (RDW) and aldehyde dehydrogenase-2 polymorphism in acute coronary syndrome in China.Methods The baseline clinical data of 128 ACS patients were collected and evaluated. Aldehyde dehydrogenase-2 genotype and the distribution frequency of allele in different RDW groups were analyzed. Correlation analysis was made of ALDH gene polymorphism，the level of coronary artery disease and RDW.Results There was significant difference in high sensitive C reaction protein between different RDW groups(P<0.05).hs-CRP was (4.12±0.77)mg/L, (5.89±0.89) mg/L, (5.01±0.76)mg/L, and (7.66±0.95)mg/L respectively in groups Q1 to Q4 while CERA was (70.3±19.0)μmol/L, (76.8±21.0)μmol/L, (74.1±23.0) μmol/L, and (86.5±24.0 μmol/L) in plasma creatinine in groups Q1-Q4. There was statistically significant difference between the four groups in ALDH gene type, as in the distribution frequency of allele. There were significant positive correlations between Gensini score and RDW(r=-0.154,P<0.05 ALDH genotype had a significant effect on RDW (r=-0.386,P<0.05).Conclusions There are close correlations between ALDH genotype and RDW in ACS patients in China.

aldehyde dehydrogenase-2；red blood cell distribution width；acute coronary syndrome

武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院資助項(xiàng)目(FYM201615)

任黨利，碩士，技師。

300162 天津，武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科

王賀孔，E-mail: wanghekong.888@163.com

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