曾偉榮

【摘要】 目的：探討短時受精提前脫顆粒細胞對體外受精胚胎質量及臨床結局的影響。方法：回顧性分析2015年1月-12月就診于本中心的1693例患者資料，將這些患者分為短時受精提前脫顆粒細胞后發(fā)現(xiàn)第二極體卵子行過夜受精組107例及傳統(tǒng)過夜受精組1147例，觀察早期脫顆粒細胞對正常受精率、1PN率、3PN率、卵裂率、優(yōu)質胚胎率、臨床妊娠率的影響。再將短時受精提前脫顆粒細胞后未發(fā)現(xiàn)第二極體卵子行ICSI組13例與傳統(tǒng)的ICSI組426例，比較兩組的正常受精率、1PN率、3PN率、卵裂率、優(yōu)質胚胎率、臨床妊娠率。結果：短時受精提前脫顆粒細胞發(fā)現(xiàn)第二極體卵子行過夜受精組與傳統(tǒng)過夜受精組之間的正常受精率、優(yōu)質胚胎率、臨床妊娠率比較差異均無統(tǒng)計學意義（P<0.05）。并且短時受精提前脫顆粒細胞后未發(fā)現(xiàn)第二極體卵子行ICSI組的正常受精率、優(yōu)質胚胎率、臨床妊娠率與傳統(tǒng)ICSI組相比，差異均無統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論：短時受精提前脫顆粒細胞與常規(guī)過夜IVF組相比并沒有提高多PN的受精率，而與傳統(tǒng)ICSI組相比多PN受精率沒有差異，也沒有降低胚胎的受精率、卵裂率、優(yōu)質胚胎率和臨床妊娠率。短時受精提前脫顆粒細胞可獲得與常規(guī)IVF和ICSI相似的臨床結局，短時受精通過提前觀察第二極體的排出來判斷是否受精，可預防出現(xiàn)傳統(tǒng)過夜IVF低受精和完全不受精，降低ICSI的使用率。

【關鍵詞】 短時受精； 提前脫顆粒細胞； 多PN受精率； 臨床妊娠率

Short-term Fertilization Degranulation Cell of the Embryo Quality and Clinical Outcome in Advance/ZENG Wei-rong.//Medical Innovation of China，2016，13（31）：120-123

【Abstract】 Objective：To investigate the effect of early cell degranulation in vitro fertilization and embryo quality and clinical outcomes after short time IVF.Method：1693 patients were retrospectively analyzed from January to December 2015 in the center.They were divided into short-term fertilization early degranulation cell found after the second polar body of eggs for overnight fertilization group of 107 cases and traditional overnight fertilization group of 1147 cases，the rate of early cell degranulation of normal fertilization effect，1PN，3PN， cleavage，high-quality embryo and clinical pregnancy of two groups were observed.The early short time insemination degranulation cells were found after the second polar body for eggs ICSI group of 13 cases and traditional ICSI group of 426 cases，the rate of early cell degranulation of normal fertilization effect，1PN，3PN，cleavage，high-quality embryo and clinical pregnancy of two groups were compared.Result：In vitro fertilization degranulation cell found in advance of the second polar body of eggs for overnight fertilization compared to the normal group and the traditional overnight fertilization rate between the groups，high quality embryo rate，clinical pregnancy rate showed no significant difference （P<0.05）.And in vitro fertilization group degranulation cells were found after the second polar body of eggs for normal fertilization recovery rate of ICSI group， high quality embryo rate， clinical pregnancy rate compared with ICSI group，there were no significant differences （P<0.05）.Conclusion：The early embryonic cell degranulation do not improve the fertilization rate of more than 2PN to compare with the conventional overnight IVF group.Embryos of fertilization rate， cleavage rate，high quality embryo rate and clinical pregnancy rate not significantly reduced compare with the conventional ICSI group.The early embryonic cell can achieve similar clinical pregnancy rate compared to conventional IVF and ICSI cycles，with second polar body detection.It can preventing low fertilization IVF and no fertilization，reduce the percentage of ICSI.

【Key words】 Short time IVF； Early embryonic cell degranulation； PN fertilization rate； Clinical pregnancy rate

First-authors address：The Reproductive Center of Zhuhai Maternal and Child Health Hospital，Zhuhai 519000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.31.035

隨著輔助生殖技術的不斷發(fā)展，體外受精-胚胎移植（IVF-ET）的臨床治療方案和實驗室技術不斷完善，但仍然無法避免IVF低受精率和完全受精失敗情況發(fā)生，因此增加了患者經(jīng)濟和心理上的負擔，亦增加了臨床醫(yī)生的壓力。短時受精通過提前脫顆粒細胞觀察第二極體的排出情況來判斷受精與否，并決定是否需要進行早期補救（Intracytoplasmic sperm injection，ICSI）技術即卵胞漿內單精子注射技術，以此避免低受精率和完全受精失敗的幾率。但提前脫顆粒細胞對于胚胎受精、胚胎質量、臨床結局方面的影響仍然存在爭議。因此本文回顧性分析2015年1-12月就診于本中心的1693例患者資料，研究提前脫顆粒細胞與傳統(tǒng)受精相比是否對胚胎質量和臨床結局有影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧分析2015年1-12月就診于本中心的1693例患者資料，將這些患者分為短時受精提前脫顆粒細胞發(fā)現(xiàn)第二極體卵子行過夜受精組107例及傳統(tǒng)過夜受精組1147例。觀察早期脫顆粒細胞對正常受精率、1PN率、3PN率、卵裂率、優(yōu)質胚胎率、臨床妊娠率的影響。另外，再將短時受精提前脫顆粒細胞未發(fā)現(xiàn)第二極體行ICSI組13例與傳統(tǒng)ICSI組426例，比較兩組的正常受精率、1PN率、3PN率、卵裂率、優(yōu)質胚胎率、臨床妊娠率。四組患者的年齡、不孕年限比較差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），短時受精提前脫顆粒細胞未發(fā)現(xiàn)第二極體行ICSI組的獲卵數(shù)高于其他三組，比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

1.2 方法 臨床方案：根據(jù)患者的年齡、卵巢的儲備功能等進行個性化COH。（1）長方案為降調節(jié)于排卵后7 d左右開始短效GnRH-a 0.05 mg或0.1 mg/d皮下注射，或長效GnRH-a 1.500～1.875 mg肌肉注射；14 d后抽血查激素，降調標準為E2<50 pg/mL，LH<5 miu/mL，B超子宮內膜<5 mm。（2）短方案于月經(jīng)第3天起應用促排卵藥物，一般情況下30歲以下Gn啟動劑量150 IU，30～35歲225 IU，35歲以上300 IU，用藥4 d后陰道超聲監(jiān)測卵泡發(fā)育情況，適當調整藥物用量。精液處理：手淫法取精至無菌杯，根據(jù)精子當天情況用密度梯度離心法（ISOlate）洗滌精子，然后調節(jié)精子密度為4×106/mL斜置于培養(yǎng)箱中備用。（4）常規(guī)IVF受精取卵后3～4 h將精子放入卵子培養(yǎng)皿受精微滴內，加精后16～20 h觀察原核。（5）ICSI受精：取卵后4～6 h對MII卵子行ICSI注射。（6）短時受精在加精后4～6 h脫顆粒細胞，于倒置顯微鏡下觀察，有明顯第二極體的卵子可認為已受精，如果未觀察到第二極體的卵子，則行早期補救ICSI術。（7）胚胎及囊胚評分、胚胎移植、冷凍胚胎的按常規(guī)方法選擇。（8）妊娠判定：胚胎移植后14D查尿或血HCG，若陽性則在4～6周行B超檢查，見孕囊判斷為臨床妊娠。

1.3 觀察指標 （1）短時受精與常規(guī)IVF計算方式：正常受精率=該方法2PN的總和/該方法成熟與未成熟卵子總和×100%；優(yōu)質胚胎率=該方法所獲得的優(yōu)質胚胎數(shù)/該方法2PN的總和×100%；臨床妊娠率=取得臨床妊娠數(shù)總和/該方法的移植周期總數(shù)×100%。（2）短時受精行ICSI注射與傳統(tǒng)ICSI計算方式：正常受精率=該方法2PN的總和/該方法成熟卵子MII總和×100%；優(yōu)質胚胎率=該方法所獲得的優(yōu)質胚胎數(shù)/該方法2PN的總和×100%；臨床妊娠率=取得臨床妊娠數(shù)總和/該方法的移植周期總數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計學處理 使用SPASS 19.0統(tǒng)計軟件進行處理，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用 字2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

四組的正常受精率、1PN率、3PN率、卵裂率、優(yōu)質胚胎率、臨床妊娠率方面比較差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表2、3。

3 討論

在輔助生殖技術中，受精是極為重要的環(huán)節(jié)。它經(jīng)歷精子的獲能、精子的頂體反應、精子與透明帶的結合、卵母細胞的激活、雌雄原核的形成等極其復雜的過程，受精中的任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題均可能導致體外受精（IVF）低受精率和完全受精失敗。此類患者在受精后16～18 h后再進行補救ICSI，所得的臨床結局并不理想，因此尋求避免IVF低受精率和完全受精失敗的方法尤其重要。

2003年，Chen等[1]國外學者首次提出在受精6 h后脫顆粒細胞后觀察是否有第二極體的排出，對沒有第二極體排出的卵子行補救ICSI，并得到良好的受精率和妊娠率，這個方法使得卵子在老化前進行及時的ICSI，是預防低受精率和受精失敗的有效方法[2]，也可避免很多不必要的ICSI。有報道稱，短時受精可以提高胚胎質量和妊娠率[3-4]。但也有學者提出，提前脫顆粒細胞可能會可能使得卵子的透明帶受到損傷，脫離了卵細胞周圍的微環(huán)境，從而導致3PN率的增加。而且外界的過早的刺激，提前去除顆粒細胞對于已受精胚胎的安全性及遺傳后代方面尚不確定，觀察提前脫顆粒細胞對于胚胎質量和臨床結局的影響顯得尤為重要[5]。

本文結果顯示：短時受精組和過夜受精組在正常受精率、1PN率、3PN率、卵裂率、優(yōu)質胚胎率、臨床妊娠率比較差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。提前脫顆粒細胞優(yōu)勢在于減少了胚胎在顆粒細胞和精子代謝產(chǎn)生的活性氧化物（ROS）的時間，Gianaroli等[6]研究表明，長時間的共培養(yǎng)會產(chǎn)生大量ROS，從而使得胚胎透明帶硬化，損害胚胎的潛能。還有國內學者認為，精子在體外3 h就已經(jīng)有78.3%完成與卵母細胞結合并且相互激活[7-8]，刺激卵母細胞排出第二極體，到了6 h第二極體的排出率為92.9%[9]，提前脫顆粒細胞將胚胎放入新的培養(yǎng)環(huán)境，更符合胚胎受精后的微環(huán)境。而多PN的受精更可能是由于卵子方面的原因所引起，比如卵子的不成熟、卵子的老化、透明帶的異常等。短時受精組脫顆粒細胞后未發(fā)現(xiàn)雙極體卵子行ICSI組與傳統(tǒng)的ICSI組在正常受精率、1PN率、3PN率、卵裂率、優(yōu)質胚胎率、臨床妊娠率比較也沒有統(tǒng)計學的差異，短時受精早期補救ICSI組雖然3PN率高過傳統(tǒng)ICSI組，但比較差異并無統(tǒng)計學意義（P>0.05），其3PN的形成可能是注射了已經(jīng)受精的卵子，此3PN可通過延長第二極體的觀察時間，透明帶上的粘附和穿透精子加以判斷，減少此類3PN的發(fā)生。辛才林等[10]需要根據(jù)脫顆粒細胞后卵母細胞的狀態(tài)、卵齡、失敗原因和患者意見等綜合考慮是否進行補救ICSI。

綜上所述，短時受精提前脫顆粒細胞與常規(guī)過夜IVF組相比并沒有提高多PN的受精率，而與傳統(tǒng)ICSI組相比多PN受精率沒有差異，也沒有降低胚胎的受精率、卵裂率、優(yōu)質胚胎率和臨床妊娠率。短時受精提前脫顆粒細胞可獲得與常規(guī)IVF和ICSI相似的臨床結局，短時受精通過提前觀察第二極體的排出來判斷是否受精，可預防出現(xiàn)傳統(tǒng)過夜IVF低受精和完全不受精，降低ICSI的使用率。

參考文獻

[1] Chen C，Kattera S.Rescure ICSI of oocytes that failed to extrude the second polar body 6h post-insemination in conventional IVF[J].Human Reprod，2003，18（18）：2118-2121.

[2]金海霞，孫瑩璞，戴善軍，等.短時受精與長時受精對體外受精及臨床妊娠結局的影響[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展，2012，21（2）：133-135.

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[6] Gianaroli L，Cristina Magli M，F(xiàn)erraretti A P，et al.Reducing the time of sperm-oocyte interaction in human in-vitro fertilization improves the improves the implantation rate[J].Hum Reprod，1996，11（1）：166-171.

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[10]辛才林，唐亮，趙琰，等.常規(guī)體外受精失敗行補救ICSI治療試管嬰兒成功分娩一例[J].實用臨床醫(yī)學，2009，10（1）：73.

（收稿日期：2016-08-04） （本文編輯：周亞杰）