曾 博， 馮沿芬， 黃啟濤， 陳景福， 張 昕， 韓向前， 張水深，鄒健勇， 蘇春華， 陳振光， 羅紅鶴， 雷藝炎△

(1中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院胸外科，廣東 廣州 510080； 2中山大學(xué)腫瘤防治中心病理科，廣東 廣州 510060； 3東莞市第三人民醫(yī)院心內(nèi)科, 廣東 東莞 523326)

Mnk2和eIF4E在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義*

曾 博1， 馮沿芬2， 黃啟濤2， 陳景福3， 張 昕1， 韓向前1， 張水深1，鄒健勇1， 蘇春華1， 陳振光1， 羅紅鶴1， 雷藝炎1△

(1中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院胸外科，廣東 廣州 510080；2中山大學(xué)腫瘤防治中心病理科，廣東 廣州 510060；3東莞市第三人民醫(yī)院心內(nèi)科, 廣東 東莞 523326)

目的： 探討MAPK相互作用激酶-2(MAPK-interacting kinase-2，Mnk2)和真核細(xì)胞翻譯起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E，eIF4E)在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及其與食管鱗狀細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系。方法: 收集臨床食管鱗癌石蠟標(biāo)本98例及正常食管黏膜上皮組織20例，應(yīng)用免疫組化SP法檢測癌組織及正常食管黏膜組織中Mnk2和eIF4E的表達(dá)，并分析其與食管鱗癌臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果: Mnk2在食管癌組織中的陽性率68.4%(67/98)，eIF4E的陽性率為61.2%(60/98)，Mnk2與eIF4E表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.05)，且Mnk2蛋白過表達(dá)與食管鱗癌的浸潤深度、病理分期密切相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論: Mnk2在食管癌組織中的過表達(dá)與浸潤深度、TNM分期有關(guān)，同時與eIF4E在食管癌的表達(dá)相關(guān)，兩者在食管癌的發(fā)展中有協(xié)同作用。

食管鱗狀細(xì)胞癌； MAPK相互作用激酶-2； 真核細(xì)胞翻譯起始因子4E

在食管癌中，分子靶向治療發(fā)展步伐仍較遲緩，目前研究的主要靶點(diǎn)如表皮生長因子受體家族、血管內(nèi)皮生長因子等，在食管癌治療中均未見突出療效。MAPK相互作用激酶-2(MAPK-interacting kinase-2，Mnk2)是MAPK激活的蛋白激酶之一，被認(rèn)為是參與腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要標(biāo)志物。MAPK細(xì)胞信號通路參與了很多的腫瘤細(xì)胞生理過程，例如基因的表達(dá)、細(xì)胞的存活、增殖以及細(xì)胞凋亡等[1]。真核細(xì)胞翻譯起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E，eIF4E)是MAPK-Mnk2信號通路的重要下游因子，被證明在多種腫瘤中呈過表達(dá)。近年對Mnk2在腫瘤中的研究主要集中在成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、乳腺癌等[2-3]，其在食管鱗癌中的研究尚未見報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)法對食管鱗癌及正常食管黏膜組織中Mnk2和eIF4E蛋白水平的表達(dá)進(jìn)行研究，分析它們的相關(guān)性及臨床意義。

材 料 和 方 法

1 研究對象

收集2010年8月～2011年8月中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院胸外手術(shù)切除的食管鱗癌標(biāo)本98例及距癌組織5 cm以上的手術(shù)遠(yuǎn)端切緣的正常食管黏膜上皮組織標(biāo)本20例。全部患者均有完整臨床資料，術(shù)前均未接受放、化療，且術(shù)后全部病理切片均由我院病理科2位以上病理醫(yī)生確診為食管鱗癌。研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

2 主要試劑

兔多克隆Mnk2抗體購自Sigma-Aldrich；小鼠單克隆eIF4E抗體購自Santa Cruz Biotechnology。

3 方法

3.1 免疫組化檢測Mnk2表達(dá) 全部標(biāo)本均經(jīng)體積分?jǐn)?shù)10%的甲醛固定、石蠟包埋、4 μm厚連續(xù)切片。采用SP方法檢測，操作步驟按照試劑盒說明進(jìn)行，DAB顯色。Mnk2及elF4E用已知陽性反應(yīng)的組織切片作為陽性對照， 以PBS代替 Ⅰ 抗作為陰性對照。

3.2 免疫組化結(jié)果判定 Mnk2蛋白陽性信號定位于胞核；eIF4E蛋白陽性信號定位于細(xì)胞質(zhì)；染色結(jié)果采用Thomas綜合計(jì)分法計(jì)算，即隨機(jī)選取5個視野計(jì)算陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞的平均數(shù)，陽性細(xì)胞<10%計(jì)0分，11%～25%計(jì)1分，26%～50%計(jì)2分，51%～75%計(jì)3分，76%～100%計(jì)4分；染色強(qiáng)度淡黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，棕褐色計(jì)3分。將陽性細(xì)胞數(shù)和著色強(qiáng)度兩者的計(jì)分相乘，以中位數(shù)8分作為截?cái)嘀担∮诨虻扔?為低表達(dá)，大于8為過表達(dá)。以上結(jié)果均至少由2位病理科醫(yī)生以盲法觀察確定。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 23.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。采用卡方檢驗(yàn)、四格表概率法和Spearman相關(guān)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 Mnk2與eIF4E在食管鱗癌中的表達(dá)

Mnk2與eIF4E在食管鱗癌中表達(dá)的免疫組化結(jié)果見圖1。98例食管鱗癌組織中Mnk2染色陽性率為68.4%(67/98),eIF4E染色陽性率61.2%(60/98)。Mnk2在正常食管組織中的表達(dá)為10.0%(2/20)，eIF4E為15%(3/20)，共同陽性率為5.0%(1/20)。食管癌組織中，Mnk2與eIF4E共同陽性率為53.1%(52/98)，經(jīng)Spearman相關(guān)分析，Mnk2與eIF4E表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.412，P<0.05)，見表1。

Figure 1.The expression of Mnk2 and eIF4E in ESCC tissues. A: the low expression of Mnk2 in ESCC；B: the high expression of Mnk2 in ESCC；C: the low expression of eIF4E in ESCC；D: the high expression of eIF4E in ESCC.

圖1 Mnk2 和eIF4E 在食管鱗癌組織中的表達(dá)

表1 Mnk2與eIF4E表達(dá)的相關(guān)性

2 Mnk2陽性表達(dá)與食管鱗癌臨床病理特征的關(guān)系

在98例食管鱗癌中，Mnk2陽性表達(dá)與腫瘤浸潤深度和臨床分期均有顯著的相關(guān)性(P<0.05)，而年齡、性別、吸煙、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均未顯示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的相關(guān)性。此外，Mnk2與eIF4E共同表達(dá)與腫瘤浸潤深度有顯著相關(guān)性，見表2、3。

表2 Mnk2陽性表達(dá)與食管鱗癌臨床病理特征的關(guān)系

Table 2.Association between Mnk2 protein expression and clinical characteristics in ESCC

CharacteristicsCasesMnk2expressionPvalueAge(years)0．676 ≤595238(73．1%) >594629(63．0%)Gender0．985 Male7254(75．0%) Female2613(50．0%)Smoking0．455 Yes6341(65．1%) No3626(72．2%)Differentiation0．403 Low3925(64．1%) Moderate4734(72．3%) High128(66．7%)Tstage0．018 T1/T25632(57．1%) T3/T44235(83．3%)Nstage0．156 N06742(62．7%) N1/23125(80．6%)TNMstages0．026 Ⅰ4323(53．5%) Ⅱ2821(75．0%) Ⅲ2723(85．2%)eIF4Eexpression0．000 Negative3815(39．5%) Positive6052(86．7%)

表3 Mnk2與eIF4E的共同表達(dá)及其與食管鱗癌臨床病理特征的關(guān)系

Table 3.Co-expression of Mnk2 and eIF4E and clinicopathologic characteristics in ESCC

CharacteristicsCasesMnk2andeIF4EexpressionPvalueTNMstages0．194 Ⅰ4320(46．5%) Ⅱ2818(64．3%) Ⅲ2714(51．9%)Tstage0．002 T1/T25623(41．1%) T3/T44229(69．0%)Nstage0．298 N06734(50．1%) N1/23118(58．1%)

討 論

目前普遍認(rèn)為食管癌是一個多因素、多階段、多基因變異積累及作用的復(fù)雜過程，同時，食管癌的發(fā)生、發(fā)展涉及大量基因表達(dá)水平的改變，如癌基因的激活及抑癌基因的失活。絲裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)相互作用激酶(Mnks)屬于絲-蘇氨酸蛋白家族，由Mnk1和Mnk2 2種亞型組成。Mnks被認(rèn)為是Ras/Raf/MAPK 和 PI3K/Akt/mTOR通路的一部分，并且與細(xì)胞的增殖和凋亡，惡性轉(zhuǎn)化以及耐藥等密切相關(guān)，對腫瘤的生長、增殖起至關(guān)重要的作用[4-5]。作為ERK通路的下游因子，Mnks的活化可以作用于eIF4E，其上調(diào)被證明可以促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展[6]。大量研究已經(jīng)證明，Mnks通路在許多惡性腫瘤中起關(guān)鍵的作用，例如乳腺癌[2]、白血病[7]、淋巴瘤[8]等。但Mnk2通路在食管鱗癌中的表達(dá)及作用未見報(bào)道。

鄭軍等[9]研究發(fā)現(xiàn)，在非小細(xì)胞肺癌中p-Mnk1及p-eIF4E表達(dá)的陽性率分別為85.4%和70.8%，明顯高于正常肺組織的表達(dá)；同時，兩者的表達(dá)呈顯著正相關(guān)。類似地，本實(shí)驗(yàn)檢測了食管鱗癌組織及正常食管組織Mnk2及eIF4E的表達(dá)，結(jié)果顯示在食管鱗癌中，Mnk2和eIF4E的表達(dá)陽性率分別為68.4%和61.2%，明顯高于正常食管組織，結(jié)果與在乳腺癌、肺癌等相關(guān)的研究中的結(jié)果相一致，提示MAPK-Mnk2-eIF4E信號通路可能在食管鱗癌組織被激活，使得eIF4E磷酸化，協(xié)同促進(jìn)食管鱗癌發(fā)生發(fā)展的。對食管鱗癌中存在Mnk2-eIF4E過表達(dá)不呈雙陽性或呈雙陰性的現(xiàn)象，我們認(rèn)為是與腫瘤的發(fā)展程度及可能激活其它交叉信號通路有關(guān)，有待進(jìn)一步的檢測及探討。

另外，我們對食管癌中Mnk2的表達(dá)分為過表達(dá)組與低表達(dá)組，分析其表達(dá)與食管磷癌臨床病理特征之間關(guān)系，Mnk2的陽性表達(dá)與食管鱗癌的腫瘤浸潤深度、臨床病理分期相關(guān)，而與年齡、性別、吸煙與否、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移不相關(guān)，提示Mnk2的表達(dá)可能參與了食管鱗癌細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展與侵襲，并對評價(jià)預(yù)后有一定臨床價(jià)值。但由于本研究的樣本量較少，同時，檢測方法較為單一，對于Mnk2在食管鱗癌患者預(yù)后中的價(jià)值尚需日后大樣本研究的進(jìn)一步證實(shí)。此外，我們也發(fā)現(xiàn)Mnk2與eIF4E的共同過表達(dá)與腫瘤浸潤深度密切相關(guān)，提示兩者可能在食管癌的發(fā)展及浸潤中存在協(xié)同作用，兩者的聯(lián)合檢測可作為對食管鱗癌惡性程度評估與預(yù)后判斷的參考，其在預(yù)后評價(jià)中的意義有待進(jìn)一步的研究。

綜上所述，MAPK-Mnk2-eIF4E信號通路可能在食管癌發(fā)生、發(fā)展及侵襲過程中起重要作用，對Mnk2-eIF4E的深入研究，將有望為食管癌的靶向治療提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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(責(zé)任編輯： 林白霜， 余小慧)

Expression and significance of Mnk2 and eIF4E in esophageal squamous cell carcinoma

ZENG Bo1, FENG Yan-fen2, HUANG Qi-tao2, CHEN Jing-fu3, ZHANG Xin1, HAN Xiang-qian1, ZHANG Shui-shen1, ZOU Jian-yong1, SU Chun-hua1, CHEN Zhen-guang1, LUO Hong-he1, LEI Yi-yan1

(1DepartmentofThoracicSurgery,TheFirstAffiliatedHospital,SunYat-senUniversity,Guangzhou510080,China;2DepartmentofPathology,SunYat-senUniversityCancerCenter,Guangzhou510060,China;3DepartmentofCardiology,TheThirdPeople’sHospitalofDongguanCity,Dongguan523326,China.E-mail:leiyyzsu@126.com)

AIM: To investigate the expression and significance of MAPK-interacting kinase-2 (Mnk2) and eukaryotic initiation factor 4E (eIF4E) in the patients with resected esophageal squamous cell carcinoma (ESCC). METHODS: The protein expression of Mnk2 and eIF4E in ESCC tissues (98 cases) and normal esophageal tissues (20 cases) were assessed by immunohistochemistry (IHC), and their correlations with clinicopathological features were statistically analyzed.RESULTS: The over-expression rate of Mnk2 and eIF4E was 68.4% (67/98) and 61.2% (60/98), respectively. The expression of Mnk2 had a positive correlation with eIF4E (P<0.05). Clinicopathologic analysis showed that Mnk2 expression was significantly correlated with T classification (P<0.05) and clinical stage (P<0.05). CONCLUSION: The over-expression of Mnk2 was significantly related to the tumor invasive depth, TNM stages and expression of eIF4E in ESCC. Expression of Mnk2 and eIF4E may have a cooperative formation mechanism in the development of ESCC.

Esophageal squamous cell carcinoma; MAPK-interacting kinase-2; Eukaryotic initiation factor 4E

1000- 4718(2017)02- 0349- 04

2016- 11- 24

2016- 12- 22

廣東省醫(yī)學(xué)科研基金資助項(xiàng)目(No. A2014217； No. A2014246； No. A2016297)

R730.23

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2017.02.025

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△通訊作者 Tel: 020-87755766; E-mail: leiyyzsu@126.com