趙京山， 孫佳歡， 于 琨, 2， 劉 玉, 2， 王 超， 李愛英

(1河北中醫(yī)學院基礎(chǔ)醫(yī)學院生物化學與生物學教研室， 2河北省心腦血管病中醫(yī)藥防治重點實驗室，河北 石家莊 050200； 3河北省人民醫(yī)院, 河北 石家莊 050051)

Roscovitine通過影響核因子κB活化抑制大鼠頸動脈內(nèi)膜損傷導(dǎo)致的炎性增生*

趙京山1, 2△， 孫佳歡1， 于 琨1, 2， 劉 玉1, 2， 王 超3， 李愛英1, 2△

(1河北中醫(yī)學院基礎(chǔ)醫(yī)學院生物化學與生物學教研室，2河北省心腦血管病中醫(yī)藥防治重點實驗室，河北 石家莊 050200；3河北省人民醫(yī)院, 河北 石家莊 050051)

目的： 探討roscovitine通過影響核因子κB(nuclear factor-κB，NF-κB)活化抑制大鼠頸動脈內(nèi)膜損傷導(dǎo)致炎性增生的作用及其分子機制。 方法：隨機將SD大鼠分成對照組、模型組和治療組3組，每組20只。模型組采用胰蛋白酶消化法制作頸動脈內(nèi)膜損傷模型；對照組采用假手術(shù)，用生理鹽水代替胰蛋白酶消化步驟，其他同模型組操作；治療組在分離的頸動脈血管外壁均勻涂抹終濃度為2 g/L roscovitine 緩釋凝膠0.5 mL，其他同模型組。各組大鼠術(shù)后常規(guī)飼養(yǎng)4周后取材備檢。采用HE染色觀察各組形態(tài)學變化，采用Western blot法檢測IκB的表達變化和磷酸化降解，檢測NF-κB的表達變化、磷酸化激活以及其下游環(huán)氧合酶2(cyclooxygenase-2，COX-2)、血管細胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白細胞介素6(interleukin-6,IL-6) 的表達變化。 結(jié)果：Roscovitine通過抑制胰蛋白酶損傷誘導(dǎo)的IκB-α磷酸化降解，阻斷NF-κB-p65的磷酸化活化，進而下調(diào)COX-2表達，抑制VCAM-1、TNF-α和IL-6的表達，從而發(fā)揮抑制損傷血管內(nèi)膜增生的作用。 結(jié)論：Roscovitine通過影響NF-κB活化抑制大鼠頸動脈內(nèi)膜損傷導(dǎo)致的炎性增生。

Roscovitine； 核因子κB； 頸動脈內(nèi)膜； 炎性增生

隨著社會的老齡化，動脈粥樣硬化性疾病的發(fā)病率逐年升高，已經(jīng)成為嚴重危害人類健康的主要疾病。雖然動脈粥樣硬化性疾病的發(fā)病機理尚未完全闡明，但經(jīng)多年的發(fā)展，血管搭橋術(shù)、動脈球囊擴張術(shù)及支架置入術(shù)等多種形式的血管重建術(shù)已經(jīng)成為治療這類疾病常用而有效的方法[1]；然而，術(shù)后較高的再狹窄率使其遠期療效不容樂觀。雖然人們嘗試采用藥物支架、轉(zhuǎn)基因技術(shù)、血管內(nèi)照射以及多種治療藥物(包括抗凝藥、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑、他汀類藥、細胞毒類藥)等方法來預(yù)防再狹窄，但是，到目前為止，人們尚未找到一種安全有效、用藥簡便、能作用于多種病理環(huán)節(jié)防治再狹窄的藥物以及能夠完全有效地的解決這一難題的方法[2-3]。研究表明，再狹窄的最主要的病理變化是新生內(nèi)膜增生，因此可從抑制構(gòu)成血管壁細胞增殖的視角來研究防治再狹窄形成。

國內(nèi)外研究表明，血管壁的內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞及成纖維細胞的的異常增生是高血壓、動脈粥樣硬化、血管成形術(shù)后再狹窄等血管增殖性疾病發(fā)生的核心事件，研究血管壁細胞增殖的機制，尋找抗細胞增殖的藥物已成為防治血管增殖性疾病領(lǐng)域的主要研究課題。血管壁細胞尤其是平滑肌細胞異常增生是血管增殖性疾病特征性病理變化，機械損傷和生長因子的刺激使得平滑肌細胞表現(xiàn)出與腫瘤細胞類似的生物學行為，在疾病發(fā)生的分子機制上，調(diào)控血管平滑肌增殖的信號傳導(dǎo)通路與許多調(diào)控腫瘤發(fā)生發(fā)展的信號通路相一致[3]。因此，應(yīng)用抗腫瘤藥物治療血管增殖性疾病可能是一種新的治療策略。但使用抗增殖藥防治血管增生性疾病還處于實驗階段，探索抗增殖藥防治血管增生性疾病的機制將有助于抗增殖藥防治血管增生性疾病在臨床上的應(yīng)用與推廣。

大量研究表明，roscovitine 具有廣泛的生物學效應(yīng)，roscovitine可抑制多種類型細胞的增殖，包括多種腫瘤細胞、角化細胞和成纖維細胞等[4]。NF-κB作為一種多向性轉(zhuǎn)錄因子其結(jié)合序列存在于多種促炎和促增殖基因的啟動子和增強子中，通過激活靶基因表達，廣泛參與機體的免疫炎癥反應(yīng)、細胞周期調(diào)控、細胞增殖分化與凋亡[5-8]。Roscovitine是一種小分子抑制腫瘤細胞增殖藥物，具有低毒高效的特點[7]。Roscovitine是否能通過影響核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)信號途徑而抑制血管壁細胞增生是一個值得研究的問題。本課題采用胰酶消化法建立SD大鼠頸動脈血管損傷模型，觀察roscovitine 對血管新生內(nèi)膜增生的影響，并探討其作用機制，從而為臨床應(yīng)用roscovitine治療血管增殖性疾病提供實驗和理論依據(jù)。

材 料 和 方 法

1 實驗動物和主要試劑

實驗動物為體重300～330 g的成年雄性SD大鼠，由河北省醫(yī)學動物中心提供；實驗所用單克隆抗體購自Santa Cruz；多克隆抗體購自北京中杉公司；roscovitine購自Gibco；胰蛋白酶購自Sigma；其余試劑為進口或國產(chǎn)分析純。

2 主要實驗儀器

酶標儀和高速冷凍離心機(Thermo)；電泳儀(Bio-Rad)；顯微鏡(HITACHI)； ID數(shù)碼成像分析系統(tǒng)(Kodak)。

3 主要方法

3.1 模型制作 大鼠稱重，用10%水合氯醛(3 mL/kg)進行麻醉。麻醉成功后備皮，取5%碘伏給大鼠頸動脈區(qū)皮膚消毒1次，再用75%乙醇消毒2次，鋪無菌巾。然后操作者在無菌條件下進行頸動脈剝離，暴露出2 cm。用動脈夾夾住剝離血管兩端，再將一段手術(shù)結(jié)扎線置于剝離血管下以備用。取0.33 mm注射器平行于血管縱軸方向穿刺進入血管, 0.9%生理鹽水沖洗置換出管腔內(nèi)的血液后抽出生理鹽水，保留針頭，再抽取0.25%胰酶溶液進行注射，直至血管充盈，將已準備好的手術(shù)結(jié)扎線在針眼上方進行結(jié)扎，防止胰酶漏出，拔出注射器，再用醫(yī)用生物膠粘合針孔。計時10 min后將結(jié)扎線解開取出，并松開動脈夾，進行切口縫合，縫合后注射0.2%青霉素2 mL。

3.2 Roscovitine緩釋凝膠的制備 利用Pluronic F127制備roscovitine血管外涂藥物緩釋凝膠，稱固體PF127粉30 g，溶于PBS中，40 ℃攪拌至澄清，定容至100 mL。將roscovitine 50 mg先溶解于1 mL DMSO, 然后再溶解于24 mL Pluronie F-127凝膠中，40 ℃攪拌過夜，制成終濃度為2 g/L 的roscovitine緩釋凝膠備用。

3.3 實驗分組和取材 隨機將SD大鼠分成對照組、模型組和治療組3組，每組20只。對照組采用假手術(shù)，用生理鹽水代替胰蛋白酶消化步驟，其他同模型組操作；模型組按照3.1方法制作；治療組在進行切口縫合前，在分離的頸動脈血管外壁均勻涂抹終濃度為2 g/L的roscovitine 緩釋凝膠0.5 mL，其他同模型組。各組大鼠術(shù)后常規(guī)飼養(yǎng)4周后取材(術(shù)后前3 d注射0.2%青霉素2 mL/d)，取出各組的頸動脈段，放在裝有生理鹽水的培養(yǎng)皿中進行沖洗，沖洗干凈后，取約1 cm 用于病理形態(tài)學觀察，其余部分制備蛋白提取液。

3.4 病理形態(tài)學的觀察 取頸動脈1 cm左右置冷PBS中洗凈殘留血液，放入4%多聚甲醛/PBS中固定至少24 h，乙醇梯度脫水，低溫石蠟垂直定向包埋、切片，常規(guī)HE染色。于光鏡下觀察、照相、進行圖像學分析，計算內(nèi)膜厚度、中膜厚度和內(nèi)膜/中膜厚度之比(I/M)。

3.5 蛋白提取液的制備 取損傷部位血管，用生理鹽水洗凈后，按100 mg組織加入1 mL提取液(150 mmol/L NaC1，50 mmol/L Tris-HCl，pH 7.8，0.1% NP-40，0.5%脫氧膽酸鈉，0.1% SDS)勻漿。冰浴反應(yīng)30 min；4 ℃、8 000 r/min離心10 min，取上清用改良酚試劑法測定提取液的蛋白含量。

3.6 Western blot實驗 按照3.5的方法提取血管壁細胞總蛋白，用改良的Lowry法測定蛋白濃度。各組取等量蛋白提取液與5×SDS上樣緩沖液混勻后，100 ℃沸水浴中加熱5 min， 自然冷卻后在120 V恒壓條件下，進行SDS-PAGE，電轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，隨后與相應(yīng)的Ⅰ抗及Ⅱ抗反應(yīng)，用化學發(fā)光法檢測抗原抗體結(jié)合區(qū)帶。用數(shù)碼成像分析系統(tǒng)軟件對電泳條帶進行密度掃描，以GAPDH為內(nèi)參照進行定量分析。

4 統(tǒng)計學處理

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(mean±SD)表示，組間資料應(yīng)用單因素方差分析(one-way ANOVA)，組間兩兩比較采用LSD法，各項統(tǒng)計均用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行處理。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié) 果

1 病理形態(tài)學的改變

對照組大鼠主動脈壁各層結(jié)構(gòu)完整，內(nèi)膜光滑，中膜血管平滑肌細胞排列整齊。模型組內(nèi)膜呈彌漫性增厚，管腔變小，增厚的內(nèi)膜中以細胞成分為主，有炎癥細胞浸潤，中膜細胞排列完整。給予roscovitine 治療后，血管內(nèi)膜增生明顯被抑制，炎癥細胞減少。形態(tài)測量分析表明，模型組與對照組相比，模型組的血管內(nèi)膜增生明顯，血管內(nèi)膜厚度顯著升高，內(nèi)膜/中膜面積(I/M)比值升高了0.81倍，roscovitine 治療組的上述指標均有不同程度的降低，與模型組比較I/M比值降低了0.35倍，差異具有統(tǒng)計學顯著性(P<0.05)，見圖1。

Figure 1.Inhibitory effect of roscovitine on intimal hyperplasia in rat carotid artery after trypsin digestion iniury. A: HE staining of the rat carotid artery; B: the ratio of intimal to medial (I/M) area. Mean±SD.n=20.*P<0.05vscontrol;#P<0.05vsmodel.

圖1 Roscovitine 抑制胰蛋白酶消化損傷造成的大鼠頸動脈內(nèi)膜增生

2 NF-κB下游環(huán)氧合酶2(cyclooxygenase-2，COX-2)、血管細胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白細胞介素6(interleukin-6,IL-6)的表達變化

為了觀察roscovitine抑制胰蛋白酶損傷后的早期血管炎癥反應(yīng)，本實驗檢測了炎性標志物COX-2、VCAM-1、TNF-α和IL-6在血管壁中的表達。Western blot實驗結(jié)果顯示，對照組中可檢測到少量的COX-2、VCAM-1、TNF-α和IL-6 蛋白；模型組的COX-2、VCAM-1、TNF-α和IL-6蛋白水平明顯升高，約是對照組的2.25、2.13、2.04和2.19倍，說明炎性增生模型復(fù)制成功；roscovitine可明顯抑制 COX-2、VCAM-1、TNF-α和IL-6的表達，COX-2、VCAM-1、TNF-α和IL-6的蛋白水平顯著降低，較模型組分別減少了34.8 %、28.9%、41.1%和38.7%，差異有統(tǒng)計學顯著性(P<0.05)，見圖2。

Figure 2.The effect of roscovitine on the expression of COX-2, VCAM-1, TNF-α and IL-6 in rat carotid artery after trypsin digestion injury. Mean±SD.n=20.*P<0.05vscontrol;#P<0.05vsmodel.

圖2 Roscovitine 對胰蛋白酶消化損傷后大鼠頸動脈COX-2、VCAM-1、TNF-α和IL-6表達的影響

3 NF-κB表達水平及磷酸化活化的變化

Western blot實驗結(jié)果顯示，對照組、模型組及治療組的NF-κB總量無差別，而磷酸化的NF-κB (p-NF-κB-p65)有明顯差別，對照組中可檢測到少量的p-NF-κB 蛋白；模型組的p-NF-κB水平明顯升高，較對照組升高了57.1%。Roscovitine可明顯抑制 p-NF-κB的蛋白水平，p-NF-κB的蛋白水平顯著降低，較模型組減少了29.6%，差異有統(tǒng)計學顯著性(P<0.05)，見圖3。

Figure 3.The effect of roscovitine on the expression of NF-κB in rat carotid artery after trypsin digestion injury. Mean±SD.n=20.*P<0.05vscontrol;#P<0.05vsmodel.

圖3 Roscovitine 對胰蛋白酶消化損傷后大鼠頸動脈NF-κB表達的影響

4 IκB表達水平的變化及磷酸化降解

Western blot實驗結(jié)果顯示，對照組、模型組及治療組IκB的總量無差別，而磷酸化IκB的水平有明顯差別，對照組中可檢測到少量的p-IκB 蛋白；模型組的p-IκB水平明顯升高，較對照組升高了43.9%；治療組roscovitine可明顯抑制 p-IκB，p-IκB的蛋白水平幾乎恢復(fù)到了對照組的水平，較模型組下降約23.1%，差異有統(tǒng)計學顯著性(P<0.05)。

討 論

動脈粥樣硬化和血管再狹窄是一種慢性血管炎癥性疾病，經(jīng)皮冠狀動脈腔內(nèi)成形術(shù)(percutaneous transluminal coronary angioplasty，PTCA)作為治療冠心病的有效手段現(xiàn)已得到廣泛的應(yīng)用，但介入性治療后3～6個月約35%～50%的患者出現(xiàn)血管再狹窄，嚴重限制了PTCA 的遠期療效。目前認為造成PTCA術(shù)后再狹窄的主要病理基礎(chǔ)是，血管內(nèi)膜受到刺激后，炎細胞浸潤、內(nèi)皮細胞增生導(dǎo)致血管平滑肌細胞表型改變，從收縮型轉(zhuǎn)變?yōu)樵鲋承?，血管平滑肌細胞遷移活性發(fā)生改變，從血管中膜遷移至內(nèi)膜，進而分裂增殖，血管壁內(nèi)皮細胞、血管平滑肌細胞增生及其產(chǎn)生的基質(zhì)等形成新生內(nèi)膜，導(dǎo)致管壁增厚，管腔變窄[5,10]。因此，如何抑制細胞的異常增殖，防止再狹窄的發(fā)生，就成為心血管疾病研究的一個重要問題。

核因子NF-κB作為一種多向性轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，其結(jié)合序列存在于多種促炎基因和促增殖基因的啟動子和增強子中，通過激活靶基因表達廣泛參與機體的免疫炎癥反應(yīng)、細胞增殖分化與凋亡等生物行為[5,9-12]。NF-κB蛋白是一個轉(zhuǎn)錄因子家族，所有成員都含有Rel同源區(qū)域，介導(dǎo)二聚體形成，其蛋白質(zhì)以同源/異源二聚體形式形成復(fù)合體，P65/P50是最常見的二聚體形式。靜息狀態(tài)NF-κB二聚體與抑制蛋白IκB相結(jié)合以非活性形式存在于胞漿中。NF-κB途徑可以被一系列的細胞外刺激所激活，通過各自的細胞膜受體將炎癥信號傳導(dǎo)至細胞內(nèi)，激活I(lǐng)κB激酶(IKK)復(fù)合體，活化的IKK進而催化IκB磷酸化，后者隨即被泛素化，而后降解，使NF-κB-p65得以游離釋放，并發(fā)生磷酸化，而后轉(zhuǎn)位入核，與靶基因啟動子區(qū)域基序GGGRNNYYCC結(jié)合，激活靶基因轉(zhuǎn)錄。NF-κB 是血管炎癥發(fā)生和發(fā)展的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，通過基因調(diào)控序列同源性比對，分析后發(fā)現(xiàn)，致炎因子誘導(dǎo)的異?；虮磉_大多受NF-κB的反式激活[13-17]，因此，通過抑制NF-κB 活化進行的抗炎治療已成為防治增殖性心血管疾病的新策略。

Figure 4.The effect of roscovitine on the expression of IκB after trypsin digestion injury in the rat carotid artery. Mean±SD.n=6.*P<0.05vscontrol;#P<0.05vsmodel.

圖4 Roscovitine 對大鼠頸動脈胰蛋白酶消化損傷后IκB表達的影響

Roscovitine是一種小分子抑制細胞增殖藥物，roscovitine作為新型的抗腫瘤藥物具有低毒高效的特點[7]，有廣泛的生物學效應(yīng)，尤其是抗炎性增殖作用明顯，該作用通過抑制NF-κB的活化抑制腫瘤細胞增殖和降低Mcl-1表達誘導(dǎo)炎癥細胞凋亡。研究表明，roscovitine是一種低毒高效的抑制細胞增殖的抗腫瘤藥物，它可顯著抑制多種腫瘤細胞的增殖，而對正常細胞幾乎無影響，這是目前開發(fā)此類藥物的意義所在[8]。我們的預(yù)實驗表明，roscovitine對正常血管壁細胞(內(nèi)壁細胞、平滑肌細胞等)無影響，而對損傷的血管壁細胞具有抑制作用。正常血管，平滑肌細胞、內(nèi)皮細胞等處于相對靜止狀態(tài)，roscovitine對其無影響，而當血管受損時，構(gòu)成血管壁的細胞增殖活躍，這時它既可抑制平滑肌細胞，也可抑制其他細胞的增殖。而以動脈粥樣硬化、高血壓為代表的心血管疾病，血管壁細胞的炎性增殖是其病理基礎(chǔ)，roscovitine能否通過影響NF-κB信號途徑而抑制血管內(nèi)膜炎性增生是本研究的興趣點。

本課題采用胰蛋白酶消化法造成頸動脈損傷模型，應(yīng)用新型藥物緩釋技術(shù)進行干預(yù)治療，觀察roscovitine抑制血管壁損傷導(dǎo)致的內(nèi)膜增生，探討其抑制血管壁增生的分子機制。胰蛋白酶消化法大鼠頸動脈炎性增生模型造模成功的標準是：內(nèi)膜粗糙，呈彌漫性增厚，管腔變小，增厚的內(nèi)膜中主要有細胞外基質(zhì)細胞成分構(gòu)成，有炎細胞浸潤，中膜平滑肌細胞排列紊亂，I/M比值較正常對照組升高0.5倍以上，同時損傷局部血管炎性因子表達增加。本研究圖1實驗結(jié)果顯示形態(tài)學變化符合上述標準，且模型組I/M比值較正常對照組升高了0.81倍；圖2結(jié)果顯示，模型組的炎性因子COX-2、VCAM-1、TNF-α和IL-6較正常對照組表達水平明顯升高，約是對照組的2.25、2.13、2.04和2.19倍，上述數(shù)據(jù)表明大鼠血管壁炎性增生模型造模成功，可用于實驗研究。

本實驗采用新型藥物緩釋技術(shù)——“緩釋凝膠”給藥，該方法已在臨床中應(yīng)用，例如治療血管狹窄性疾病時所應(yīng)用的藥物涂層支架，其藥物涂層常采用“緩釋凝膠”給藥的方法。臨床上在動脈中置入支架治療血管狹窄性疾病，約有30%～50%的病人會因局部血管增生出現(xiàn)再狹窄，目前預(yù)防再狹窄的有效措施之一便是采用藥物涂層支架，采用該給藥方式是為下一步開發(fā)roscovitine藥物涂層支架做準備。

HE染色形態(tài)學結(jié)果顯示，模型組與對照組相比，模型組的血管內(nèi)膜增生明顯，血管內(nèi)膜厚度顯著升高，I/M比值升高0.81倍，roscovitine 治療組的上述指標均有不同程度的降低，I/M比值較模型組降低了0.35倍，差異具有統(tǒng)計學顯著性(P<0.05)。以上統(tǒng)計結(jié)果表明roscovitine能夠明顯抑制胰蛋白酶消化造成的大鼠血管內(nèi)皮剝脫誘導(dǎo)的新生內(nèi)膜增生。

為了觀察roscovitine抑制胰蛋白酶損傷后的血管炎癥增殖反應(yīng)，本實驗檢測了炎性標志物COX-2、VCAM-1、TNF-α和IL-6在血管壁中的表達。Western blot實驗的結(jié)果顯示，對照組中可檢測到少量的COX-2、VCAM-1、TNF-α和IL-6蛋白；模型組的COX-2、VCAM-1、TNF-α和IL-6水平明顯升高，約是對照組的2.25、2.13、2.04和2.19倍。治療組Roscovitine可明顯抑制 COX-2、VCAM-1、TNF-α和IL-6的表達，使COX-2、VCAM-1、 TNF-α和IL-6的蛋白水平顯著降低，較模型組分別減少了34.8 %、28.9%、41.1%和38.7%。該結(jié)果表明，roscovitine可抑制受損血管致炎基因的表達，通過抑制炎癥反應(yīng)抑制血管增生。

以往研究表明，NF-κB 是血管炎癥發(fā)生和發(fā)展的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，因此，課題組觀察了胰蛋白酶損傷后roscovitine對NF-κB活化的影響，進一步探討其抑制血管內(nèi)膜增生的分子機制。實驗結(jié)果表明roscovitine不影響NF-κB的表達，可明顯抑制 NF-κB-p65的磷酸化，治療組較模型組減少了29.6%。Roscovitine可明顯抑制 IκB 的磷酸化水平，治療組p-IκB 幾乎恢復(fù)到了對照組的水平，較模型組下降約23.1%，而roscovitine不影響IκB 蛋白的表達水平。上述結(jié)果說明roscovitine對NF-κB活化的抑制作用與其減少 IκB 磷酸化降解有關(guān)，而關(guān)于 IκB 磷酸化的機制有待于下一步深入研究。

綜上所述，采用藥物緩釋技術(shù)，在血管外給藥，一次性涂抹roscovitine緩釋凝膠具有明顯的抑制血管內(nèi)膜增生作用。Roscovitine通過抑制胰蛋白酶損傷誘導(dǎo)的IκB磷酸化降解，阻斷NF-κB-p65的磷酸化，下調(diào)炎性因子COX-2、VCAM-1、TNF-α和IL-6的表達，從而發(fā)揮抑制損傷血管的炎性增生作用，本研究為治療血管增生性疾病提供了新的思路和實驗依據(jù)。

[1] Zhao JS, Niu HL, Li AY, et al. Acetylbritannilactone modulates vascular endothelial growth factor signaling and regulates angiogenesis in endothelial cells[J]. PLoS One, 2016, 11(4):e0148968.

[2] Mitchell S, Vargas J, Hoffmann A. Signaling via the NFκB system[J]. Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med, 2016, 8(3):227-241.

[3] Welt FG, Rogers C. Inflammation and restenosis in the stent era[J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2002, 22(11):1769-1776．

[4] Christian F, Smith EL, Carmody RJ.The regulation of NF-κB subunits by phosphorylation[J].Cells, 2016, 5(1):E12.

[5] MaruYama T. The nuclear IκB family of proteins controls gene regulation and immune homeostasis[J]. Int Immunopharmacol, 2015, 28(2):836-840.

[6] 趙京山, 方明星, 郭淺妤, 等. 羥基紅花黃色素A通過影響PCNA表達和MEK-ERK1/2信號通路抑制大鼠血管平滑肌細胞增殖[J]. 中國藥理學通報, 2015, 31(7):984-988.

[7] Meijer L, Borgne A, Mulner O, et al. Biochemical and cellular effects of roscovitine, a potent and selective inhi-bitor of the cyclin-dependent kinases cdc2, cdk2 and cdk5[J]. Eur J Biochem, 1997, 243(1-2):527-536.

[8] Cicenas J, Kalyan K,Sorokinas A, et al. Roscovitine in cancer and other diseases[J]. Ann Transl Med, 2015, 3(10):135-147.

[9] Gilmore TD. Introduction to NF-κB: players, pathways, perspectives[J]. Oncogene, 2006, 25(3):6680-6684.

[10]Escoubet-Lozach L, Benner C, Kaikkonen MU, et al. Mechanisms establishing TLR4-responsive activation states of inflammatory response genes[J]. PLoS Genet, 2011, 7(12):e1002401.

[11]張 鳳, 張玲玲, 魏 偉. B細胞活化因子及其受體介導(dǎo)的信號通路參與類風濕關(guān)節(jié)炎病理機制研究進展[J]. 中國免疫學雜志, 2016, 3(2):258-260.

[12]張 剛. NF-κB 及其相關(guān)分子研究進展[J]. 國外醫(yī)學:臨床生物化學與檢驗學分冊, 2002, 23(5):258-261.

[13]吳亞楠, 趙鵬翔, 馬雪梅. NF-κB 研究進展及其與炎癥的關(guān)系[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學， 2012, 40(34):16533-16538.

[14]張勁松, 王興宇, 單佑安, 等. 轉(zhuǎn)錄因子NF-κB 的研究進展[J]. 科學通報， 2002, 47(5):322-328.

[15]趙京山, 方明星, 郭淺妤, 等. 羥基紅花黃色素A抑制PDGF促大鼠血管平滑肌細胞增殖的作用[J]. 中國細胞生物學學報, 2015, 7(6):827-831.

[16]趙京山, 郭淺妤, 賴少鴻, 等. 羥基紅花黃色素A可抑制血管平滑肌細胞增殖[J]. 中華心血管病雜志, 2015, 43(8):728-731.

[17]梁偉杰, 陳美姬, 何潔儀, 等. ATP敏感性鉀通道的開放通過抑制TLR4/NF-κB通路對抗高糖引起的H9c2心肌細胞損傷和炎癥[J]. 中國病理生理雜志， 2016， 32(7):1153-1160.

(責任編輯： 林白霜， 羅 森)

Roscovitine inhibits inflammatory hyperplasia of carotid artery intima in rats via suppressing nuclear factor-κB activation

ZHAO Jing-shan1, 2, SUN Jia-huan1, YU Kun1, 2, LIU Yu1, 2, WANG Chao3, LI Ai-ying1, 2

(1TheDepartmentofBiochemistryandBiology,BasicMedicalCollege,HebeiUniversityofChineseMedicine,2HebeiKeyLaboratoryofChineseMedicineResearchonCardiocerebrovascularDisease,Shijiazhuang050200,China;3HebeiGeneralHospital,Shijiazhuang050051,China.E-mail:lay1963@126.com;zjs10@sina.com)

AIM: To study the effect of roscovitine on the inflammatory hyperplasia of carotid artery intima in rats and the related mechanisms. METHODS: SD rats (n=60) were randomly divided into 3 groups including control group, model group and treatment group. The rat model was established by trypsin digestion injury. The rats in control group were given sham operation. The rats in treatment group were administered with 0.5 mL roscovitine (2 g/L) slow-releasing gelatin. The rats in each group were fed normally for 4 weeks, then killed to take out carotid arteries for further observations. The effects of roscovitine on the inflammatory hyperplasia of carotid artery intima and the related mechanism via nuclear factor-κB (NF-κB) in the rats were detected by Western blot. RESUITS: Roscovitine inhibited the activation of NF-κB and the expression of inflammatory factors cyclooxygenase-2 (COX-2), vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1),TNF-α and IL-6 via blocking the phosphorylation activation of NF-κB and inhibiting the degradation of IκB-α. CONCLUSION: Roscovitine inhibits inflammatory hyperplasia of carotid artery intima in the rats via suppressing NF-κB activation.

Roscovitine; Nuclear factor-κB; Carotid artery intima; Inflammatory hyperplasia

1000- 4718(2017)02- 0233- 06

2016- 07- 04

2016- 11- 01

國家自然科學基金資助項目(No. 31271466； No. 81573698)；河北省科技支撐計劃(No.13277739D)；河北省教育廳科技類重點項目(No. ZD2014005)；河北省自然科學基金資助項目(No. 2009001053)

R543.5; R363

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2017.02.007

雜志網(wǎng)址： http://www.cjpp.net

△通訊作者 李愛英 Tel: 0311-89926235； E-mail: lay1963@126.com； 趙京山 Tel: 0311-89926236； E-mail: zjs10@sina.com