周凌輝 黃 悅 張燕林

(廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院腎臟內(nèi)科,廈門361003)

Wnt-β-catenin信號分子在急性腎損傷大鼠腎組織中的表達(dá)及意義

周凌輝 黃 悅①張燕林

(廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院腎臟內(nèi)科,廈門361003)

目的：探討Wnt-β-catenin信號分子在急性腎損傷大鼠腎組織中的表達(dá)。方法：將48只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對照組(Control組)、假手術(shù)組(Sham組)和缺血再灌注組(IRI組)，每組16只；Control組正常喂養(yǎng)，IRI組建立大鼠缺血再灌注損傷模型，Sham組背側(cè)切開后直接將傷口關(guān)閉。分別于術(shù)后第1天、第3天、第5天、第7天處死4只大鼠，觀察三組大鼠腎臟組織病理學(xué)改變，并檢測三組大鼠血肌酐、尿素氮水平；采用免疫印跡法檢測三組大鼠腎臟組織Wnt4、β-catenin、Lrp6蛋白表達(dá)，實時定量RT-PCR檢測腎臟組織Wnt4、β-catenin、Lrp6 mRNA表達(dá)。結(jié)果：Control組、Sham組各時段腎臟損傷評分、血肌酐比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；IRI組術(shù)后第1天至第7天腎臟損傷評分、血肌酐、尿素氮先上升后逐漸降低，其中術(shù)后第3天腎臟損傷評分、肌酐、尿素氮最高；IRI組術(shù)后1、3、5、7 d腎臟損傷評分、血肌酐、尿素氮顯著高于Control組、Sham組(P<0.05)。Control組、Sham組各時段Wnt4、β-catenin、Lrp6蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；IRI group術(shù)后 Wnt4、β-catenin、Lrp6蛋白逐漸增加，至術(shù)后第5天達(dá)表達(dá)高峰，隨后逐漸降低；IRI組術(shù)后1、3、5、7 d Wnt4、β-catenin、Lrp6蛋白均顯著高于Control組、Sham組(P<0.05)；Control組、Sham組各時段Wnt4、β-catenin、Lrp6 mRNA表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；IRI group術(shù)后 Wnt4、β-catenin、Lrp6 mRNA顯著增加，至術(shù)后第3天達(dá)表達(dá)高峰，隨后逐漸降低；IRI組術(shù)后1、3、5、7 d Wnt4、β-catenin、Lrp6 mRNA均顯著高于Control組、Sham組(P<0.05)。結(jié)論：Wnt-β-catenin信號分子在急性腎損傷組織中表達(dá)顯著增加，激活的Wnt-β-catenin信號通路參與了腎臟組織的修復(fù)過程。

Wnt-β-catenin信號分子；急性腎損傷；再灌注損傷；信號通路

Wnt蛋白家族屬于信號蛋白，在組織的形成和修復(fù)中發(fā)揮著重要作用[1,2]。目前研究證實Wnt信號異常與多種疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[3]。Wnt蛋白能夠與跨膜受體相結(jié)合，穿過細(xì)胞質(zhì)膜并調(diào)節(jié)一系列下游信號分子，導(dǎo)致β-catenin去磷酸化[4]。去磷酸化的β-catenin趨于穩(wěn)定，當(dāng)進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)后可與TCF/LEF結(jié)合，并激活Wnt相應(yīng)靶基因的表達(dá)。在胚胎腎時期存在大量Wnt家族成員表達(dá)，包括Wnt4、6、7b、11等，然而Wnt4是腎臟前體細(xì)胞唯一表達(dá)的Wnt蛋白家族成員[5]，并參與調(diào)節(jié)腎臟的發(fā)育過程。Gnemmi等[6]報道稱，將急性腎損傷小鼠Wnt4基因敲除后，小鼠腎小管上皮細(xì)胞修復(fù)明顯延遲，提示W(wǎng)nt4可能參與了腎小管上皮細(xì)胞的再生修復(fù)。雖然既有研究已經(jīng)證實Wnt-β-catenin信號途徑與某些腎臟疾病發(fā)生有關(guān)，如腎臟腫瘤、免疫性腎炎等[7,8]，但是其是否參與了急性腎損傷的調(diào)節(jié)以及相關(guān)調(diào)節(jié)機(jī)制依然不清楚。鑒于此，本研究急性腎損傷大鼠腎臟組織Wnt-β-catenin信號分子及其主要受體低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6(Lrp6)表達(dá)水平，探討Wnt-β-catenin信號通路對急性腎損傷大鼠腎組織修復(fù)的機(jī)制，現(xiàn)將研究成果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物來源 48只SD級健康雄性大鼠均購自本院動物實驗中心(動物合格證號：SCXK-2015-108)，8～12周齡，體質(zhì)量200～240 g。大鼠飼養(yǎng)環(huán)境定期消毒，所有飼料、動物飲水以及相關(guān)器械定期滅菌消毒；控制環(huán)境室溫18～22℃，相對濕度20%。

1.1.2 實驗儀器與試劑 主要儀器：Allegra X-30高速冷凍離心機(jī)、AU5800全自動生化分析儀(貝克曼庫爾特公司)，電泳槽、電泳儀(北京六一儀器廠)，紫外分光光度計(上海美譜達(dá)儀器有限公司)，倒置顯微鏡(日本尼康公司)，GeneAmp 9700 PCR儀(美國ABI公司)，Odyssey成像系統(tǒng)及配套分析軟件(美國LI-COR公司)。

1.1.3 主要試劑 兔抗鼠Wnt4多克隆抗體、兔抗鼠Lrp6多克隆抗體、小鼠抗人β-catenin單克隆抗體、β-肌動蛋白(β-actin)抗體均購自武漢博士德生物工程有限公司，聚偏二氟乙烯膜(PVDF)、3,3′-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)、Trizol試劑盒購自美國Invitrogen公司，辣根過氧化物酶標(biāo)記抗兔二抗、RNA提取試劑Trizol、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、免疫組化試劑盒購自Sigma公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 分組 48只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對照組(Control組)、假手術(shù)組(Sham組)和缺血再灌注組(IRI組)，每組16只。Control組正常喂養(yǎng)，不做任何處理；IRI組參考Lin等[9]報道建立大鼠單側(cè)腎臟缺血再灌注動物模型：實驗大鼠于模型制作前24 h禁食，自由飲食；腹腔注射3%戊巴比妥鈉(1 ml/kg)麻醉大鼠，將麻醉后的大鼠固定于動物手術(shù)臺上，備皮、消毒、鋪巾，在完全無菌條件下于左背側(cè)行縱切口，切口長度約1.5～2 cm，打開腹腔后尋找腎臟組織；將左側(cè)腎蒂完全游離，采用無創(chuàng)動脈夾將腎動脈血管夾閉30 min，然后再將動脈夾放開；待腎臟重新恢復(fù)灌注后將腹腔關(guān)閉，建立大鼠IRI模型。Sham組：僅將大鼠左背側(cè)行縱切口，然后直接將傷口關(guān)閉。分別于術(shù)后第1天、第3天、第5天、第7天分別處死4只大鼠，收集大鼠主靜脈血，置于抗凝管中，-20℃保存待檢。再收集大鼠雙腎組織，將腎包膜完全剝離，矢狀縱行將腎臟剖開，其中一部分用丙酮固定，做冰凍切片，置于-80℃冰箱保存；另外一部分用5%多聚甲醛固定，液氮保存。

1.2.2 腎臟組織病理檢查 取多聚甲醛固定的腎臟組織，制成厚度約為2 μm的連續(xù)切片，再行過碘酸-Schiff染色(PAS)，以觀察腎臟組織病理變化。光學(xué)顯微鏡下對腎臟切片的外髓質(zhì)和皮質(zhì)進(jìn)行拍照(每組各10張)，按照Supavekin等[10]報道的方法，采用盲法對每組圖片進(jìn)行病理評分：將每張圖片分為256個小方格，計算上皮壞死細(xì)胞、脫落的碎屑、小管上皮扁平所占的方格數(shù)，20張照片所計算出的平均值即為腎臟損傷百分比。

1.2.3 血肌酐檢測 分別取三組大鼠各時段主靜脈血3 ml，置于離心管中，以12 000 r/min(離心半徑8 cm)離心10 min，抽取上清液10 μl置于全自動生化儀中檢查血肌酐、尿素氮水平。

1.2.4 免疫印跡法檢測腎臟組織Wnt4、β-catenin、Lrp6蛋白表達(dá) 將腎臟組織剪碎后置于冰上充分研磨，再加入蛋白裂解液冰浴中靜置30 min，再將產(chǎn)物于4℃、12 000 r/min離心15 min，取上清液置于冰浴上10 min，即獲得總蛋白；BCA法檢測蛋白濃度。取約50 μg總蛋白進(jìn)行SDS-PAGE電泳分離蛋白，半干法將電泳段轉(zhuǎn)移至PVDF膜上；電轉(zhuǎn)后取出PVDF膜，37℃下5%脫脂牛奶封閉2 h，PBS沖洗3次，分別加入1∶500稀釋的兔抗鼠Wnt4多克隆抗體、1∶1 000稀釋的兔抗鼠Lrp6多克隆抗體和1∶1 000稀釋的小鼠抗人β-catenin單克隆抗體，室溫孵育1 h，4℃過夜；PBS沖洗3次；再加入1∶5 000稀釋的辣根過氧化物酶標(biāo)記抗兔二抗，室溫下振搖1 h，PBS沖洗3次。Odyssey成像系統(tǒng)分析條帶灰度值，以目的條帶與β-actin條帶灰度值之比作為目的蛋白相對表對量。

1.2.5 實時定量RT-PCR檢測腎臟組織Wnt4、β-catenin、Lrp6 mRNA表達(dá) 按照Trizol試劑盒說明書提取腎臟組織總RNA，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)步驟逆轉(zhuǎn)錄成cDNA；將得到的cDNA采用實時定量RT-PCR進(jìn)行擴(kuò)增，引物委托上海Invitrogen公司設(shè)計合成，各引物序列見表1。PCR反應(yīng)體系：雙蒸水13 μl、緩沖液2.5 μl、dNTP 1 μl、上下游引物各0.5 μl，cDNA3 μl、Taq酶0.5 μl，總反應(yīng)體系21 μl；反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性2 min，95℃變性15 s，60℃退火30 s，72℃延伸1 min，40個循環(huán)后72℃ 5 min；每個基因設(shè)3個復(fù)孔，共計測量3次，取3次平均值；記錄目的基因CT值，以GAPDH為內(nèi)參照，計算Wnt4、β-catenin、Lrp6 mRNA相對表達(dá)量(2-ΔΔCT)；其中△Ct= Ct(檢測樣品mRNA)-Ct(GAPDH mRNA)。

2 結(jié)果

2.1 三組大鼠腎臟組織病理學(xué)改變 Control組、Sham組腎臟組織上皮細(xì)胞連接緊密，形態(tài)排列規(guī)則，邊緣完整，細(xì)胞間隙未見水腫和炎性浸潤；IRI組第1天可見大面積上皮細(xì)胞壞死，部分上皮細(xì)胞發(fā)生脫落，基底膜部分裸露，管腔內(nèi)存在大量脫落細(xì)胞及碎片；第3天、第5天上皮細(xì)胞壞死面積縮小，管腔內(nèi)脫落細(xì)胞數(shù)量減少；至第7天仍可見部分上皮細(xì)胞壞死脫落，但壞死面積較低1 d明顯縮小，見圖1。

2.2 三組大鼠腎臟損傷評分比較 Control組、Sham組各時段腎臟損傷評分比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；IRI組術(shù)后第1天～第7天腎臟損傷評分先上升后逐漸降低，其中術(shù)后第3天腎臟損傷評分最高；IRI組術(shù)后1、3、5、7 d腎臟損傷評分均顯著高于Control組、Sham組(P<0.05)，見表2。

圖1 三組大鼠病理學(xué)改變Fig.1 Renal morphology in three groups of ratsNote: A.Control group；B.Sham group;C.IRI group 1 d；D.IRI group 3 d；E.IRI group 5 d；F.IRI group 7 d(PAS,×200).

表1 引物序列

Tab.1 Sequences of primers

GenenamePrimersequenceProduct(bp)Wnt4Forward：5′?TCGCGAGCTTGCTTGGCGAC?3′201Reverse：5′?GCTGTCAGGCGCGCTGCGATA?3′β?cateninForward：5′?GTGACATAAGTTCGGACTGCG?3′216Reverse：5′?TTTCGATTACATCGCGGAGCT?3′Lrp6Forward：5′?GCTACAGCGTATATGGTGTGC?3′346Reverse：5′?GCTGGTTAGGATCATGGCAAGT?3′GAPDHForward：5′?CAGAGCTAGAACACGGCAGCG?3′136Reverse：5′?TGCGGCGATGGCTAGGCGTGA?3′

2.3 三組大鼠血肌酐水平比較 Control組、Sham組各時段血肌酐比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；IRI組術(shù)后第1天～第7天血肌酐含量先上升后逐漸降低，其中術(shù)后第3天血肌酐含量最高；IRI組術(shù)后1、3、5、7 d血肌酐均顯著高于Control組、Sham組(P<0.05)，見表3。

2.4 三組大鼠尿素氮水平比較 Control組、Sham組各時段尿素氮比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；IRI組術(shù)后第1天～第7天尿素氮含量先上升后逐漸降低，其中術(shù)后第3天尿素氮含量最高；IRI組術(shù)后1、3、5、7 d尿素氮均顯著高于Control組、Sham組(P<0.05)，見表4。

2.5 三組大鼠腎臟組織Wnt4、β-catenin、Lrp6蛋白表達(dá) Control組、Sham組各時段Wnt4、β-catenin、Lrp6蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；IRI group術(shù)后 Wnt4、β-catenin、Lrp6蛋白逐漸增加，至術(shù)后第5天達(dá)表達(dá)高峰，此后逐漸降低；IRI組術(shù)后1、3、5、7 d Wnt4、β-catenin、Lrp6蛋白均顯著高于Control組、Sham組(P<0.05)，見圖2、3。

GroupsnAfter1dAfter3dAfter5dAfter7dControlgroup4013±0051)015±0021)012±0031)013±0021)Shamgroup4016±0041)015±0011)016±0021)017±0031)IRIgroup41937±3392171±4311024±214763±105BetweengroupF=224791P=0000DifferenttimepointsF=112941P=0000Betweengroup×differenttimepointsF=115561P=0000

Note：1)P<0.05 vs IRI group.

GroupsnAfter1dAfter3dAfter5dAfter7dControlgroup4413±0311)429±0341)418±0281)430±0371)Shamgroup4441±0451)435±0411)432±0391)438±0421)IRIgroup4873±0791453±2141236±117984±091BetweengroupF=132403P=0000DifferenttimepointsF=48391P=0000Betweengroup×differenttimepointsF=41385P=0000

Note：1)P<0.05 vs IRI group.

GroupsnAfter1dAfter3dAfter5dAfter7dControlgroup4527±0381)519±0341)541±0391)537±0361)Shamgroup4558±0451)546±0381)529±0341)533±0431)IRIgroup4937±1031853±3941403±2211237±204BetweengroupF=47093P=0000DifferenttimepointsF=53881P=0000Betweengroup×differenttimepointsF=28381P=0000

Note：1)P<0.05 vs IRI group.

2.6 三組大鼠腎臟組織Wnt4、β-catenin、Lrp6 mRNA表達(dá) Control組、Sham組各時段Wnt4、β-catenin、Lrp6 mRNA表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；IRI group術(shù)后 Wnt4、β-catenin、Lrp6 mRNA顯著增加，至術(shù)后第3天達(dá)表達(dá)高峰，此后逐漸降低；IRI組術(shù)后1、3、5、7 d Wnt4、β-catenin、Lrp6 mRNA均顯著高于Control組、Sham組(P<0.05)，見圖4。

圖2 三組大鼠Wnt4、β-catenin、Lrp6蛋白表達(dá)水平(免疫印跡法)Fig.2 Wnt4,β-catenin,Lrp6 protein expression level in three groups of rats(Western blot)

圖3 三組大鼠Wnt4、β-catenin、Lrp6蛋白表達(dá)水平Fig.3 Wnt4,β-catenin,Lrp6 expression level in three groups of ratsNote: *.P<0.05 vs control group;#.P<0.05 vs control group.

圖4 三組大鼠Wnt4、β-catenin、Lrp6 mRNA水平Fig.4 Wnt4,β-catenin,Lrp6 mRNA expression level in three groups of ratsNote: *.P<0.05 vs control group；#.P<0.05 vs control group.

3 討論

急性腎功能損傷是由多種疾病所致的腎功能短時期間急性減退，嚴(yán)重時甚至發(fā)生腎功能衰竭。常見引起急性腎功能損傷的疾病有膿毒癥休克、極低血容量、外傷、嚴(yán)重感染等，而這些誘因的共同特點均是腎臟缺血缺氧[11-13]。國外研究[14]顯示，組織急性缺血后會誘導(dǎo)細(xì)胞增殖再生，而這一途徑亦是組織自我修復(fù)的主要方式。本研究對Control組、Sham組、IRI組不同時段腎臟組織病理學(xué)變化進(jìn)行觀察，結(jié)果顯示Control組、Sham組腎臟組織上皮完整，而IRI組第1天可見大面積上皮細(xì)胞壞死，第3天、5天、7天上皮細(xì)胞壞死面積逐漸縮小，說明腎臟急性損傷后會開始自我修復(fù)，證實了腎臟組織存在修復(fù)過程。晏現(xiàn)麗等[15]報道稱大鼠IRI后24～36 h腎臟損傷最為嚴(yán)重，而腎損傷后24 h腎臟修復(fù)開始，修復(fù)的部位主要集中于腎臟外層髓質(zhì)和皮質(zhì)。本研究腎臟損傷評分顯示，IRI組術(shù)后第3天腎臟損傷評分最高，IRI組術(shù)后第1天～第7天腎臟損傷評分先上升后逐漸降低，說明急性腎臟損傷后細(xì)胞開始修復(fù)，進(jìn)而促進(jìn)腎臟組織再生。

Wnt-β-catenin信號通路是生物界普遍存在的一種高度保守的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，主要參與了細(xì)胞的增殖、分化和抗凋亡等一系列生物學(xué)過程。目前認(rèn)為在成熟腎臟中，Wnt-β-catenin信號是沉默的[16]；而Wnt家族成員在腎臟中均有不同程度的表達(dá)，提示W(wǎng)nt在維持腎臟組織動態(tài)平衡可能發(fā)揮重要作用。Wnt4是唯一在腎臟前體細(xì)胞中表達(dá)的Wnt家族成員，Vivante等[17]證實Wnt4突變與腎臟發(fā)育不良密切相關(guān)，上皮祖細(xì)胞Wnt4參與了多種腎臟疾病的發(fā)病。β-catenin是整個Wnt-β-catenin信號通路調(diào)控的關(guān)鍵因子，當(dāng)Wnt信號通路尚未激活時，β-catenin在破壞復(fù)合體調(diào)控下發(fā)生磷酸化[18]。當(dāng)Wnt信號通路被激活后，破壞復(fù)合體發(fā)生解離，β-catenin磷酸化受阻而發(fā)生蓄積，大量蓄積的β-catenin進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)誘導(dǎo)Wnt靶基因的表達(dá)，從而抑制細(xì)胞凋亡、誘導(dǎo)細(xì)胞增殖等生物行為。Wnt-β-catenin信號通路處于活化狀態(tài)時，會與相應(yīng)的受體結(jié)合，并將信號轉(zhuǎn)導(dǎo)至下游靶細(xì)胞。目前研究較多的參與Wnt信號途徑的受體為低密度脂蛋白相關(guān)蛋白6(Lrp6)；Pfister等[19]證實，當(dāng)組織發(fā)生急性損傷后，Wnt蛋白能夠以旁分泌或自分泌的形式與細(xì)胞膜上受體Lrp6結(jié)合，并抑制Lrp6磷酸化，進(jìn)而啟動下游β-catenin信號通路。

本研究顯示，IRI group術(shù)后 Wnt4、β-catenin、Lrp6 mRNA顯著增加，至術(shù)后第3天達(dá)表達(dá)高峰，隨后逐漸降低。說明缺血再灌注損傷后，腎臟組織能激活Wnt-β-catenin信號通路，并進(jìn)行一系列下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，啟動腎臟組織的修復(fù)過程。Cruciat等[20]研究稱，缺血再灌注后會上調(diào)組織中Wnt家族蛋白表達(dá)，并通過下游β-catenin級聯(lián)放大，最終抑制細(xì)胞色素C和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性，達(dá)到對組織缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。免疫印跡法檢測亦證實IRI group術(shù)后 Wnt4、β-catenin、Lrp6蛋白逐漸增加，至術(shù)后第5天達(dá)表達(dá)高峰，此后逐漸降低。說明Wnt-β-catenin信號分子蛋白表達(dá)有一定滯后性，當(dāng)術(shù)后第3天腎臟損傷最嚴(yán)重時，腎臟組織修復(fù)機(jī)制也達(dá)到最活躍狀態(tài)，此后mRNA逐漸翻譯成分子蛋白，最終啟動腎臟組織的自我修復(fù)。

綜上所述，Wnt-β-catenin信號分子在急性腎損傷組織中表達(dá)顯著增加，激活的Wnt-β-catenin信號通路參與了腎臟組織的修復(fù)過程，這將為防治急性腎損傷提供了非常有價值的作用靶點。

[1] Kawakami M,Okuda H,Tatsumi K,etal.Inhibition of Wnt/β-catenin pathway by Dikkopf-1 affects midfacial morphogenesis in chick embryo[J].J Biosci Bioeng，2014，117(6):664-669.

[2] Ono M,Yin P,Navarro A,etal.Paracrine activation of WNT/β-catenin pathway in uterine leiomyoma stem cells promotes tumor growth[J].Proc Natl Acad Sci U S A，201，110(42):17053-17058.

[3] Lee SB,Park YI,Dong MS,etal.Identification of 2,3,6-trisubstituted quinoxaline derivatives as a Wnt2/β-catenin pathway inhibitor in non-small-cell lung cancer cell lines[J].Bioorg Med Chem Lett，2010，20(19):5900-5904.

[4] Wang H,He L,Ma F,etal.SOX9 regulates low density lipoprotein receptor-related protein 6 (LRP6) and T-cell factor 4 (TCF4) expression and Wnt/β-catenin activation in breast cancer[J].J Biol Chem，2013，288(9):6478-6487.

[5] Sabbagh Y,Graciolli FG,O′Brien S,etal.Repression of osteocyte Wnt/β-catenin signaling is an early event in the progression of renal osteodystrophy[J].J Bone Miner Res，2012，27(8):1757-1772.

[6] Gnemmi V,Bouillez A,Gaudelot K,etal.MUC1 drives epithelial-mesenchymal transition in renal carcinoma through Wnt/β-catenin pathway and interaction with SNAIL promoter[J].Cancer Lett，2014，346(2):225-236.

[7] Ueno K,Hirata H,Majid S,etal.IGFBP-4 activates the Wnt/beta-catenin signaling pathway and induces M-CAM expression in human renal cell carcinoma[J].Int J Cancer，2011，129(10):2360-2369.

[8] Grouls S,Iglesias DM,Wentzensen N,etal.Lineage specification of parietal epithelial cells requires beta-catenin/Wnt signaling[J].J Am Soc Nephrol，2012，23(1):63-72.

[9] Lin SL,Li B,Rao S,etal.Macrophage Wnt7b is critical for kidney repair and regeneration[J].Proc Natl Acad Sci U S A，2010，107(9):4194-4199.

[10] Supavekin S,Zhang W,Kucherlapati R,etal.Differential gene expression following early renal ischemia/reperfusion[J].Kidney Int，2003，63(5):1714-1724.

[11] Tanaka R,Tsutsui H,Ohkita M,etal.Sex differences in ischemia/reperfusion-induced acute kidney injury are dependent on the renal sympathetic nervous system[J].Eur J Pharmacol，2013，714(1-3):397-404.

[12] Tsutsui H,Tanaka R,Yamagata M,etal.Protective effect of ischemic preconditioning on ischemia/reperfusion-induced acute kidney injury through sympathetic nervous system in rats[J].Eur J Pharmacol，2013，718(1-3):206-212.

[13] Yates RB,Sheng H,Sakai H,etal.Lack of evidence for a remote effect of renal ischemia/reperfusion acute kidney injury on outcome from temporary focal cerebral ischemia in the rat[J].J Cardiothorac Vasc Anesth，2013，27(1):71-78.

[14] Tsutsui H,Sugiura T,Hayashi K,etal.Protective effect of moxonidine on ischemia/reperfusion-induced acute kidney injury through α2/imidazoline I1 receptor[J].Eur J Pharmacol，2013，718(1-3):173-180.

[15] 晏現(xiàn)麗,張 穎,鄭立運(yùn),等.C3a、C5a受體缺失減輕IgA腎病腎損傷[J].中國免疫學(xué)雜志,2015,31(9):1169-1172.

[16] Bhukhai K,Suksen K,Bhummaphan N,etal.A phytoestrogen diarylheptanoid mediates estrogen receptor/akt/glycogen synthase kinase 3β protein-dependent activation of the Wnt/β-catenin signaling pathway[J].J Biol Chem，2012，287(43):36168-36178.

[17] Vivante A,Mark-Danieli M,Davidovits M,etal.Renal hypodysplasia associates with a wnt4 variant that causes aberrant canonical wnt signaling[J].J Am Soc Nephrol，2013，24(4):550-558.

[18] Konsavage WM Jr,Kyler SL,Rennoll SA,etal.Wnt/β-catenin signaling regulates yes-associated protein (YAP) gene expression in colorectal carcinoma cells[J].J Biol Chem，2012，287(15):11730-11739.

[19] Pfister AS,Tanneberger K,Schambony A,etal.Amer2 protein is a novel negative regulator of Wnt/β-catenin signaling involved in neuroectodermal patterning[J].J Biol Chem，2012，287(3):1734-1741.

[20] Cruciat CM,Dolde C,de Groot RE,etal.RNA Helicase DDX3 is a regulatory subunit of casein kinase 1 in Wnt-β-catenin signaling[J].Science，2013，339(6126):1436-1441.

[收稿2016-06-12 修回2016-08-09]

(編輯 張曉舟)

Wnt-β-catenin signal molecule expression level in acute kidney injury rats renal tissue

ZHOULing-Hui,HUANGYue,ZHANGYan-Lin.

DepartmentofNephrology,theFirstAffiliatedHospitalofXiamenUniversity,Xiamen361003,China

Objective:To explore the Wnt-β-catenin signal molecule expression level in acute kidney injury rats renal tissue.Methods: A total of 48 rats accorded to the random number table method were divided into normal control group (Control group),sham operation group (Sham group) and ischemia reperfusion group (IRI group),each group with 16 rats,Control group was given normal fed,IRI group were established ischemia reperfusion injury rats model,Sham group opened dorsal skin and then wound was closed.4 rats were sacrificed respectively at 1,3,5,7 d after surgery,the pathological changes of kidney tissue were observed in the three groups,and the serum creatinine,urea level was detected in the three groups.Wnt4,β-catenin,Lrp6 protein expression was detected in three groups of rats by Western blot,Wnt4,β-catenin,Lrp6 mRNA in renal tissues were detected by Real-time quantitative RT-PCR.Results: There was no significant difference in renal injury score and serum creatinine between Control group and Sham group (P>0.05),IRI group kidney injury score and serum creatinine,urea first increased and then gradually decreased,which was the highest in 3 d after surgery,IRI group renal injury score and serum creatinine,urea were significantly higher than those in Control group and Sham group 1,3,5,7 d after surgery (P<0.05).There was no significant difference in Wnt4,β-catenin,Lrp6 protein between Control group and Sham group (P>0.05),IRI group Wnt4,β-catenin,Lrp6 protein gradually increased,which reached to peak at 5 d after surgery,and then gradually decreased,IRI group Wnt4,β-catenin,Lrp6 protein were significantly higher than those in Control group and Sham group 1,3,5,7 d after surgery(P<0.05).There was no significant difference in Wnt4,β-catenin,Lrp6 mRNA between Control group and Sham group (P>0.05),IRI group Wnt4,β-catenin,Lrp6 mRNA gradually increased,which reached to peak at 3 d after surgery,and then gradually decreased,IRI group Wnt4,β-catenin,Lrp6 mRNA were significantly higher than those in Control group and Sham group 1,3,5,7 d after surgery (P<0.05).Conclusion: The expression of Wnt-β-catenin signal molecule are significantly increase in acute kidney injury,and the activation of Wnt-β-catenin signal pathway is involved in the repair process of renal tissue.

Wnt-β-catenin signal molecule;Acute renal injury;Reperfusion injury;Signal pathway

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.02.022

周凌輝(1978年-)，男，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事急慢性腎功能衰竭、血液透析方面的研究。

及指導(dǎo)教師：張燕林(1959年-)，男，碩士，主任醫(yī)師，主要從事急慢性腎功能衰竭、血液透析腎功能方面的研究。

R363.2

A

1000-484X(2017)02-0268-07

①廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院皮膚科,廈門361003。