顧文亞

【摘要】 目的：分析西雙版納地區(qū)熱帶雨林氣候對免疫組化結果的影響。方法：研究地點定在西雙版納地區(qū)，了解西雙版納地區(qū)的溫度、海拔、大氣壓、水沸點。研究材料分別為鼻咽鱗狀細胞癌、甲狀腺乳頭狀癌、胃神經內分泌癌、淋巴結反應性增生，按照規(guī)范的步驟進行操作。結果：修復時間20 min時（此時間為Dakota公司在其他地區(qū)用的傳統(tǒng)時間），組織著色，陽性結果不顯著，背景清晰；修復時間19 min時（比傳統(tǒng)時間少1 min）組織已經著色，陽性結果不肯定，背景清晰；修復時間21 min時（比傳統(tǒng)時間多1 min），組織著色，陽性結果顯著，背景清晰，而且組織無脫落，修復時間22 min時（比傳統(tǒng)時間多2 min），組織著色，陽性結果顯著，背景清晰，但組織已部分脫落。結論：高溫高壓修復法是一種比較實用的抗原修復方法，特別是對于標本數不是特別多的基層醫(yī)院。只是要根據本地區(qū)的海拔不同有所不同，要找到適合時間才能有好的效果。低海拔地區(qū)西雙版納州景洪市就只為21 min，可以推廣運用。

【關鍵詞】 西雙版納地區(qū)； 熱帶雨林氣候； 免疫組化； 影響

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.2.027 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2017）02-0053-02

病理診斷的金標準發(fā)展至今，其輔助手段也隨之得到了良好的發(fā)展，如免疫組化就是最好的輔助手段，但免疫組化很嬌嫩，對地域的要求因海拔的不同而有所改變，所以要根據不同的地域控制時間的長短，不斷提高其質量，使它更好地為診斷服務[1]。免疫組織化學技術的原理是對組織切片或細胞標本中的某些化學成分進行原位的定性、定位或定量研究的技術[2]。已有研究表明：修復液的溫度和作用時間對修復效果有決定性的作用，溫度越高修復時間越短，在昆明地區(qū)（海拔為1800 m左右）修復時間為30 min，但在低海拔地區(qū)西雙版納州景洪市就只為21 min[3]。

1 材料與方法

1.1 實驗地氣候

本實驗在海拔550 m、大氣壓為94.29 kPa、水沸點97 ℃～98 ℃、西雙版納景洪市進行。西雙版納位于北緯21°10'～22°40'，東經99°55'～101°50'，最高海拔2429.7 m，最低海拔477 m，相對高差1952.7 m。是世界上北回歸線附近保存最為完好、面積最大的熱帶雨林。景洪市屬于低海拔（約500 m），年平均氣溫（18 ℃～21 ℃）高，濕潤（年降雨1100～1900 mm）的地區(qū)，筆者率先在西雙版納州成功開展了第1例免疫組化，并通過筆者所在科2013年至今開展的200多例免疫組化結果對照，并與其他地區(qū)進行比較。

1.2 材料

10%中性甲醛固定，酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，組織分別為鼻咽鱗狀細胞癌、甲狀腺乳頭狀癌、胃神經內分泌癌、淋巴結反應性增生。各蠟塊分別切片5 μm，按照免疫組化步驟（Elivision法，試劑來源于Dakota公司）。

1.3 免疫組化操作過程

（1）石蠟涂片脫蠟和水化后，用PBS（PH714）沖洗3次，每次3 min。（2）根據每一種抗體的要求，對組織抗原進行相應的修復。（3）每張涂片加50 μl 3%過氧化氫溶液，室溫下孵育10 min，以阻斷內源性過氧化物酶的活性。PBS沖洗3次，每次3 min。（4）每張涂片根據需要加50 μl的第一抗體（如CD20、CD3、CD45RO、CD45RB、TdT，MPO、CD5、CD56、CD79a、CD43、CD5、CD10），室溫下孵育60 min。（5）除去PBS液，每張涂片加50 μl聚合物（polymer enhancer），室溫下孵育20 min，PBS沖洗3次，每次3 min。（6）除去PBS液，每張涂片加50 μl酶標抗鼠/兔聚合物（polymerized HRP-AntiMs/RbIgG），室溫下孵育30 min PBS沖洗3次，每次3 min。（7）除去PBS液，每張涂片加50 μl新鮮配制的DAB或AEC溶液，顯微鏡下觀察3～10 min。（8）自來水沖洗，蘇木紫復染，鹽酸分化，自來水沖洗，PBS返藍。（9）涂片經過梯度酒精脫水干燥，用DAE顯色，中性樹膠封固。

2 結果

修復時間20 min時（此時間為Dakota公司在其他地區(qū)用的傳統(tǒng)時間），組織著色，陽性結果不顯著，背景清晰；修復時間19 min時（比傳統(tǒng)時間少1 min）組織已經著色，陽性結果不肯定，背景清晰；修復時間21 min時（比傳統(tǒng)時間多1 min），組織著色，陽性結果顯著，背景清晰，而且組織無脫落，修復時間22 min時（比傳統(tǒng)時間多2 min），組織著色，陽性結果顯著，背景清晰，但組織已部分脫落，具體見表1。鏡下表現如下，

圖1：胃神經內分泌癌SYN免疫組化染色，pH 9.0，1 mmol/L EDTA中煮沸30 min，胞漿強陽性染色，部分區(qū)域組織脫落（×200）。圖2：

淋巴結反應性增生CD20免疫組化染色，pH 6.0，0.01 mmol/L在檸檬酸修復液中高壓煮沸20 min，胞膜強陽性染色，背景清晰（×200），圖3：鼻咽低分化鱗癌HCK免疫組化染色，pH 6.0，0.11 mmol/L檸檬酸修復液中煮沸20 min，胞漿強陽性染色，部分區(qū)域組織脫落（×200），圖4：甲狀腺乳頭狀癌免疫組化染色，pH 6.0，0.01 mmol/L在檸檬酸修復液中高壓煮沸20 min，胞膜強陽性染色，背景清晰（×200）。

3 討論

眾所周知，抗體與抗原之間的結合具有高度的特異性[4]。免疫組化正是利用這一特性，即先將組織或細胞中的某些化學物質提取出來，以其作為抗原或半抗原去免疫小鼠等實驗動物，制備特異性抗體，再用這種抗體（第一抗體）作為抗原去免疫動物制備第二抗體，并用某種酶（常用辣根過氧化物酶）或生物素等處理后再與前述抗原成分結合，將抗原放大，由于抗體與抗原結合后形成的免疫復合物是無色的，因此，還必須借助于組織化學方法將抗原抗體反應部位顯示出來（常用顯色劑DAB顯示為棕黃色顆粒）[5]。通過抗原抗體反應及呈色反應，顯示細胞或組織中的化學成分，在顯微鏡下可清晰看見細胞內發(fā)生的抗原抗體反應產物，從而能夠在細胞或組織原位確定某些化學成分的分布、含量[6]。組織或細胞中凡是能作抗原或半抗原的物質，如蛋白質、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用相應的特異性抗體進行檢測[7]?？乖男迯屯ǔＳ形锢硇迯图盎瘜W修復，目前的國內根據不同的抗體主要的修復方法有：高溫高壓.胰酶修復、胃蛋白酶修復、EDTA修復，免疫組化技術都要求在高溫高壓下進行的[8]。隨著精準醫(yī)療的理念，免疫組化也走進了大大小小的醫(yī)院，成為診斷的好朋友。目前市場上的試劑很多，選擇適合自己的很重要，也要根據自己地區(qū)的實際情況探索最佳方法。

本實驗結果顯示，高溫高壓修復法是一種比較實用的抗原修復方法，特別是對于標本數不是特別多的基層醫(yī)院。只是要根據本地區(qū)的海拔不同有所不同，要找到適合時間才能有好的效果。在低海拔地區(qū)西雙版納州景洪市就只為21 min，可以推廣運用。

參考文獻

[1]梁英杰，張芬芬.我國病理技術六十年發(fā)展的現狀和展望[J].中華病理學雜志，2015，44（7）：466-467.

[2]陳尚采，孫曼羅.臨床病理組織與免疫組化診斷學[M].上海：上海醫(yī)科大學出版社，1999：90-94.

[3]張富琴.淺談免疫組化染色中對照的設置[J].診斷病理學雜志，2013，20（7）：447.

[4]孫藝斐，楊忠毅，張勇平，等.F-FES在乳腺增生癥患者體內攝取與病理免疫組化的關系[J].中國癌癥雜志，2014，24（2）：128-134.

[5]張世杰，郎振為，王欣欣，等.聯合應用磷脂酰肌醇蛋白多糖-3（GPC-3）和細胞角蛋白-19（CK-19）免疫組化檢測在肝細胞肝癌診斷和鑒別診斷中的價值[J].首都醫(yī)科大學學報，2011，32（5）：653-657.

[6] Li-Fu Li，Zheng-Jie Wei，Hong Sun，et al.Abnormal β-catenin immunohistochemical expression as a prognostic factor in gastric cancer：A meta-analysis[J].World Journal of Gastroenterology，2014，20（34）：12313-12321.

[7] Danielle A Vieira-Lopes，Nadja L Pinheiro，Armando Sales，et al.Immunohistochemical study of the digestive tract of Oligosarcus hepsetus[J].World Journal of Gastroenterology，2013，19（12）：1919-1929.

[8] Raymond A Isidro，Myrella L Cruz，Caroline B Appleyard，et al.Immunohistochemical expression of SP-NK-1R-EGFR pathway and VDR in colonic inflammation and neoplasia[J].World Journal of Gastroenterology，2015，21（6）：1749-1758.

（收稿日期：2016-09-07）