王馭風，錢衛(wèi)，夏澍

(鹽城市第三人民醫(yī)院，江蘇鹽城224021)

HBV不同感染狀態(tài)者血清IL-21、IFN-γ水平變化及其臨床意義

王馭風，錢衛(wèi)，夏澍

(鹽城市第三人民醫(yī)院，江蘇鹽城224021)

目的 探討不同HBV感染狀態(tài)者血清IL-21、IFN-γ水平變化及其臨床意義。方法 選擇HBV感染者74例，根據(jù)感染狀態(tài)分為急性乙肝組15例、慢性HBV攜帶組17例、慢性乙肝組23例、非活動性HBsAg攜帶組19例，另選體檢健康者20例作為對照組。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測各組血清IL-21、IFN-γ。結(jié)果 急性乙肝組血清IL-21、IFN-γ水平明顯高于對照組、慢性HBV攜帶組、慢性乙肝組和非活動性HBsAg攜帶組(P均<0.05)；慢性乙肝組血清IL-21水平明顯高于慢性HBV攜帶組(P<0.05)，對照組、慢性HBV攜帶組、慢性乙肝組和非活動性HBsAg攜帶組血清IFN-γ水平組間比較均無統(tǒng)計學差異(P均>0.05)。對照組、急性乙肝組、慢性HBV攜帶組、非活動性HBsAg攜帶組血清IL-21與IFN-γ水平均呈正相關(guān)(r分別為0.896、0.734、0.693、0.701，P均<0.05)，慢性乙肝組血清IL-21與IFN-γ水平無相關(guān)性(r=0.359，P>0.05)。結(jié)論 血清IL-21和IFN-γ水平可反映HBV感染狀態(tài)，可作為判斷乙肝嚴重程度的指標。

乙型肝炎病毒感染；白介素21；γ干擾素；發(fā)病機制

HBV感染是一個嚴重的公共衛(wèi)生問題。據(jù)統(tǒng)計，全世界人口中約1/3曾感染HBV，每年約有100萬人死于HBV感染所致的疾病[1]。HBV感染慢性化是由病毒本身和宿主免疫狀態(tài)共同決定的，其中宿主免疫狀態(tài)是決定HBV感染轉(zhuǎn)歸的關(guān)鍵[2]。在急性自限性HBV感染者體內(nèi)，T細胞介導的免疫反應強烈，可控制和清除病毒，防止宿主再次發(fā)生感染；而慢性HBV感染者體內(nèi)相應T細胞反應缺失，T細胞數(shù)量和功能降低，是導致HBV感染慢性化的重要原因[3]。IL-21是由活化的CD4+T細胞分泌的細胞因子，可促進CD8+T細胞增殖并強化其細胞應答反應，而CD4+T細胞輔助CD8+T細胞在控制HBV感染慢性化過程中發(fā)揮重要作用[4]。2014年1月～2016年1月，我們觀察了HBV感染不同狀態(tài)者外周血IL-21、

IFN-γ水平及CD4+T細胞、CD8+T細胞在HBV感染慢性化過程中的變化?，F(xiàn)分析結(jié)果并探討其機制。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 同期選擇我院收治的HBV感染者74例，其中急性乙肝患者15例(急性乙肝組)，男9例、女6例，年齡(48.82±9.53)歲；慢性HBV攜帶者17例(慢性HBV攜帶組)，男12例、女5例，年齡(49.13±10.62)歲；慢性乙肝患者23例(慢性乙肝組)，男15例、女8例，年齡(47.91±8.64)歲；非活動性HBsAg攜帶者19例(非活動性HBsAg攜帶組)，男13例、女6例，年齡(48.78±8.39)歲。所有患者符合《慢性乙型肝炎防治指南》(2010年版)中的診斷標準[5]：急性乙肝：無乙肝病史，HBsAg陽性，血清HBcAg-IgM陽性，血清ALT、 總膽紅素升高或正常；慢性HBV攜帶：血清HBcAb、HBeAg、HBsAg和HBV-DNA陽性，肝功能檢測指標正常，肝臟B超未見異常；慢性乙肝：血清HBcAb、HBeAg、HBsAg和HBV-DNA陽性，ALT持續(xù)升高，乙肝病程超過半年；非活動性HBsAg攜帶[6，7]：血清HBsAg陽性、HBeAg陰性、抗HBe陽性或陰性，HBV DNA檢測不到(PCR法)或低于最低檢測限，1年內(nèi)連續(xù)隨訪3次以上，ALT均在正常范圍。排除標準：合并甲肝、丙肝、丁肝、戊肝者；有遺傳性肝病、膽汁淤積性肝病和自身免疫性肝炎者；入組前6個月接受過抗HBV和免疫調(diào)節(jié)治療者。選擇同期在我院體檢健康者20例(對照組)，男13例、女7例，年齡(46.8±9.2)歲。各組性別、年齡具有可比性。各組血清ALT、AST水平及乙肝五項檢測結(jié)果見表1、2。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準，患者均知情同意。

表1 各組血清ALT、AST水平比較

注：與對照組比較，*P<0.05；與急性乙肝組比較，#P<0.05；與慢性HBV攜帶組比較，△P<0.05；與慢性乙肝組比較，▲P<0.05。

表2 各組乙肝五項檢測結(jié)果(例)

1.2 血清IL-21、IFN-γ檢測 各組均采集晨起空腹靜脈血5 mL，3 500 r/min離心10 min，分離血清，-20 ℃冰箱保存。采用雙抗體夾心ELISA法檢測IL-21、IFN-γ。ELISA試劑盒購于上海恒遠生物有限公司，嚴格按照試劑盒說明操作[6]。分析不同HBV感染狀態(tài)者血清IL-21與IFN-γ的關(guān)系。

2 結(jié)果

急性乙肝組血清IL-21、IFN-γ水平顯著高于慢性HBV攜帶組、慢性乙肝組和非活動性HBV攜帶組(P均<0.05)；慢性HBV攜帶組和慢性乙肝組血清IL-2、IFN-γ水平顯著低于急性乙肝組；見表3。Pearson直線相關(guān)分析顯示，對照組、急性乙肝組、慢性HBV攜帶組、非活動性HBsAg攜帶組血清IL-21與IFN-γ水平均呈正相關(guān)(r分別為0.896、0.734、0.693、0.701，P均<0.05)；而慢性乙肝組血清IL-21與IFN-γ水平無相關(guān)性(r=0.359，P>0.05)。

表3 各組血清IL-21、IFN-γ水平比較

注：與對照組比較，*P<0.05；與急性乙肝組比較，#P<0.05；與慢性HBV攜帶組比較，△P<0.05。

3 討論

HBV感染的臨床表現(xiàn)呈多樣性。HBV感染是乙型肝炎疾病進展的始發(fā)因素，HBV感染后患者的免疫因素在病毒清除、持續(xù)感染及肝細胞損傷過程中有重要作用，但其免疫作用機制仍不十分明確。一般認為HBV感染機體后的免疫應答反應(主要是CD4+T細胞和CD8+T細胞參與的免疫機制引起肝細胞的損傷)可影響疾病的演進及轉(zhuǎn)歸過程[7，8]。

CD8+T細胞是HBV感染模型中清除病毒最主要的效應T細胞，感染早期由HBV刺激產(chǎn)生的特異性CD8+T細胞具有一定的抗病毒作用，且CD8+T細胞的生成需要活化的HBV相關(guān)CD4+T細胞輔助，而慢性HBV感染患者體內(nèi)往往出現(xiàn)CD4+T細胞功能耗竭[11]。有研究發(fā)現(xiàn)，HBV合并HCV感染者CD4+T細胞、CD8+T細胞相互作用共同起到清除病毒作用，故提高慢性HBV感染患者體內(nèi)CD4+T細胞和CD8+T細胞數(shù)量、恢復其功能以達到清除HBV是乙肝治療的理想終點[12]。

IL-21是2000年發(fā)現(xiàn)的一種細胞因子，由活化的CD4+T細胞分泌，在自身免疫性疾病、腫瘤性疾病及控制病毒感染過程中發(fā)揮重要作用。有研究證實，IL-21能夠促進CD3抗體活化的胸腺細胞，成熟外周血T細胞的增殖，可通過增強CD8+T細胞的活化、增殖促進功能耗竭的CD8+T細胞對病毒的控制，顯著提升CD8+T細胞功能，促進B細胞分泌抗體，繼而有效清除病毒[13～15]，IL-21水平與HBc18～27特異性的產(chǎn)IFN-γ的CD8+T細胞相關(guān)，IL-21可維持CD8+T細胞的抗病毒作用。另有研究發(fā)現(xiàn)，在一定程度上病情嚴重程度與Th17細胞是否處于功能活躍狀態(tài)呈正相關(guān)，Th17細胞是重要的IL-21分泌細胞，可通過IL-21產(chǎn)生相應的免疫效應，在HBV感染炎癥損傷嚴重的重度慢性乙肝的發(fā)病機制中起重要作用，在慢加急性肝功能衰竭中較高水平的IL-21可以活化T細胞或B細胞清除病毒感染或通過釋放炎性因子損傷肝細胞，也可通過活化肝星狀細胞影響HBV感染相關(guān)的肝損傷，因此中和IL-21可能是治療HBV感染相關(guān)肝損傷的有效措施。本研究急性乙肝組血清IL-21水平顯著高于慢性HBV攜帶組、慢性乙肝組、非活動性HBsAg攜帶組和對照組，表明IL-21在急性HBV感染患者體內(nèi)發(fā)揮了促進機體抗病毒免疫反應的作用。本研究HBV攜帶組(即免疫耐受期患者)血清IL-21水平顯著降低，提示IL-21表達降低在HBV感染慢性化中發(fā)揮重要作用，慢性乙肝患者體內(nèi)存在CD4+T細胞功能降低、數(shù)量減少，無法發(fā)揮其免疫增強功能，抗病毒能力受到抑制[16]。IFN-γ是重要的抗病毒免疫調(diào)節(jié)細胞因子，其除可通過調(diào)節(jié)機體免疫反應來抑制HBV的合成外，還可通過非溶細胞機制直接抑制HBV復制。在轉(zhuǎn)基因小鼠的試驗中，CD8+T細胞、Th細胞和NK細胞在識別HBV的病毒抗原后會通過分泌IFN-γ抑制肝臟中的HBV復制。Suri等[17]研究發(fā)現(xiàn)，IFN-γ除能通過調(diào)節(jié)機體免疫反應抑制HBV的轉(zhuǎn)錄和復制外，還能通過非細胞溶解/損傷機制直接抑制肝細胞內(nèi)HBV的復制[18]。本研究急性乙肝組血清IFN-γ水平明顯高于HBV攜帶組和非活動性HBsAg攜帶組，IFN-γ水平變化呈現(xiàn)急性乙肝組>慢性乙肝組>HBV攜帶組的趨勢，與以往研究報道相似。

本研究還發(fā)現(xiàn)，IL-21和IFN-γ在不同HBV感染者體內(nèi)具有良好的相關(guān)性，其原因可能為IL-21主要由CD4+T細胞分泌，能促進CD8+T細胞增殖并且強化CD8+T細胞抗病毒功能，而IFN-γ是CD8+T細胞功能活化的指標，可以反映CD8+T細胞功能，CD4+T細胞活化產(chǎn)生大量IL-21，從而促進了CD8+T細胞的抗病毒能力。

綜上所述，血清IL-21和IFN-γ水平可反映HBV感染狀態(tài)，可作為判斷乙肝病情嚴重程度的指標。

[1] 李彩東，陳錫蓮，李惠軍,等.慢性HBV感染者血清IL-15和IL-16水平與HBVDNA載量的關(guān)系及臨床意義探討[J].實用肝臟病雜志，2015，18(6):663-664.

[2] 梁艷，王皓，仲人前.T淋巴細胞和NK細胞在慢性乙型肝炎病毒感染中的作用[J].檢驗醫(yī)學，2014，29(1)：4-9.

[3] 成利偉，孔歌，李莉，等.慢性乙型肝炎患者PBMC中HBV特異性IL-21表達及其對CD8+T淋巴細胞功能的影響[J].肝臟，2014，19(4)：246-249.

[4] 楊晨辰，黃睿，劉勇,等.慢性HBV感染者不同免疫狀態(tài)下及抗病毒治療后外周血T細胞亞群比例和細胞因子水平特點[J].中華實驗和臨床感染病雜志電子版,2014，8(2):35-40.

[5] 李彩東，楊勇衛(wèi)，李惠軍,等.乙型肝炎病毒攜帶者外周血IFN-γ、IL-32和IL-6的變化及臨床相關(guān)性[J].國際檢驗醫(yī)學雜志，2015，36(18):2622-2624.

[6] 成利偉，孔歌，李莉，等.慢性乙型肝炎患者PBMC中HBV特異性IL-21表達及其對CD8+T淋巴細胞功能的影響[J].肝臟，2014，19(4):246-249.

[7] Ma SW, Huang X, Li YY, et al. High serum IL-21 levels after 12weeks of antiviral therapy predict HBeAg seroconversion in chronic hepatitis B[J]. J Hepatol, 2012,56(4):775-781.

[8] Yu S, Jia L, Zhang Y, et al. IL-12 induced the generation of IL-21-and IFN-γ-co-expressing poly-functional CD4+T cells from human naive CD4+T cells[J]. Cell Cycle, 2015,14(21):3362-3372.

[9] He D, Li M, Guo S, et al. Expression pattern of serum cytokines in hepatitis B virus infected patients with persistently normal alanine aminotransferase levels[J]. J Clin Immunol, 2013,33(7):1240-1249.

[10] Ren G, Esser S, Jochum C, et al. Interleukin 21 augments the hepatitis B virus-specific CD8+T-cell response in vitro in patients coinfected with HIV-1[J]. Aids, 2012,26(17):2145-2153.

[11] Zeng Z, Kong X, Li F, et al. IL-12-based vaccination therapy reverses liver-induced systemic tolerance in a mouse model of hepatitis B virus carrier[J]. J Immunol, 2013,191(8):4184-4193.

[12] Hsu CS, Hsu SJ, Liu WL, et al. IL-21R gene polymorphisms and serum IL-21 levels predict virological response to interferon-based therapy in Asian chronic hepatitis C patients[J]. Antiviral Therapy, 2013,18(4):599-606.

[13] Yang B, Wang Y, Zhao C, et al. Increased Th17 cells and interleukin-17 contribute to immune activation an4d disease aggravation in patients with chronic hepatitis B virus infection[J]. Immunol Lett, 2013,149(1-2):41-49.

[14] Wong GL, Chan HL, Chan HY, et al. Serum interferon-inducible protein 10 levels predict hepatitis Bs antigen seroclearance in patients with chronic hepatitis B[J]. Aliment Pharmacol Ther, 2016,43(1):145-153.

[15] Schmitz I, Schneider C, Fr?hlich A, et al. IL-21 restricts virus-driven Treg cell expansion in chronic LCMV infection[J]. PLoS One, 2013，9(5):e10033624.

[16] Liu Y, Zhao P, Qu Z, et al. Frequency of CD4+CXCR5+, TFH cells in patients with hepatitis b virus-associated membranous nephropathy[J]. Int Immunopharmacol, 2014,22(1):98-106.

[17] Suri H, Ren W, Ma W, et al. Interleukin-21 responses in patients with chronic hepatitis B[J]. J Interferon Cytokine Res, 2014,35(2):134-142.

[18] Li L, Jiang Y, Lao S, et al. Mycobacterium tuberculosis-specific IL-21+IFN-γ+CD4+T cells are regulated by IL-12[J]. PLoS One, 2016,11(1):e0147356.

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.04.024

R512.6

B

1002-266X(2017)04-0071-03

2016-06-24)