訾永宏, 姬 樂, 陳紅梅, 李艷東

(1延安大學(xué)附屬醫(yī)院普外科， 延安 716099； 2延安職業(yè)技術(shù)學(xué)院護(hù)理系； 3西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科)

Arl4c在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其臨床意義

訾永宏1, 姬 樂1, 陳紅梅2, 李艷東3

(1延安大學(xué)附屬醫(yī)院普外科， 延安 716099；2延安職業(yè)技術(shù)學(xué)院護(hù)理系；3西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科)

目的 探討ADP-核糖基化樣因子4C(ADP-ribosylation factor-like 4C，Arl4c)在結(jié)腸癌中的表達(dá)以及與臨床病理特征的關(guān)系。 方法 收集結(jié)腸癌組織標(biāo)本70例和正常結(jié)腸黏膜組織標(biāo)本70例，采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)結(jié)腸癌組織及正常結(jié)腸黏膜中Arl4c的表達(dá)情況，并對(duì)其表達(dá)進(jìn)行臨床病理特征分析。 結(jié)果 Arl4c在結(jié)腸癌組織中陽性表達(dá)率為55.7%，而在正常結(jié)腸黏膜中為11.4%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Arl4c在結(jié)腸癌中的表達(dá)在不同病理分化程度間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，在不同性別、不同年齡、不同臨床分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論 Arl4c在結(jié)腸癌中過表達(dá)，可能參與了結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展，將可能成為結(jié)腸癌診斷治療的新靶點(diǎn)。

Arl4c； 結(jié)腸癌； 靶向治療

ADP-核糖基化樣因子4C(ADP-ribosylation factor-like 4C，Arl4c) 是Arl家族的成員，是ADP-核糖基化因子(ADP-ribosylation factor，Arf)的亞家族成員之一[1]。Arl在細(xì)胞內(nèi)的囊泡運(yùn)輸和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中具有重要作用，但其在體內(nèi)的具體功能還沒有進(jìn)一步的深入研究，近來Arl的生物學(xué)功能成為研究的熱點(diǎn)[2,3]。研究顯示Arl4c在肺癌中過表達(dá)[2]，關(guān)于結(jié)腸癌中Arl4c的研究報(bào)道較少，本課題對(duì)Arl4c在結(jié)腸癌中的表達(dá)進(jìn)行研究，期望對(duì)結(jié)腸癌的診斷治療帶來新的思路，為對(duì)Arl4c的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 材料

收集延安大學(xué)附屬醫(yī)院2011-06～2014-03經(jīng)手術(shù)病理檢查的存蠟塊標(biāo)本，其中結(jié)腸腺癌組織標(biāo)本70例，癌旁正常結(jié)腸黏膜標(biāo)本70例。兔抗人Arl4c抗體購自英國Abcam公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)染色 將經(jīng)多聚甲醛固定、石蠟包埋的組織標(biāo)本連續(xù)切片， 脫蠟、抗原修復(fù)，進(jìn)行免疫組化檢測(cè)。免疫組化采用SP法，按照試劑說明書進(jìn)行，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，每組染色均用PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.2.2 免疫組化結(jié)果判定 Arl4c陽性產(chǎn)物呈棕黃色顆粒狀，定位于細(xì)胞質(zhì)，選取10個(gè)高倍視野，按照陽性細(xì)胞比例：陰性為0分，陽性細(xì)胞數(shù)<10%為1分，陽性細(xì)胞數(shù)10%-50%之間為2分，陽性細(xì)胞數(shù)50%-80%為3分，陽性細(xì)胞數(shù)>80%為4分；染色強(qiáng)度按著色程度分為：無染色為0分，黃色為弱陽性為1分，淺棕色為2分，棕褐色為3分，總分為2項(xiàng)評(píng)分之和，取總分≥4分為陽性表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用χ2檢驗(yàn)及Fisher確切概率法,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Arl4c在結(jié)腸腺癌中的表達(dá)

免疫組織化學(xué)染色顯示Arl4c主要表達(dá)于結(jié)腸癌細(xì)胞胞質(zhì)，70例結(jié)腸腺癌中Arl4c陽性表達(dá)為39例，陽性率為55.7%，而正常結(jié)腸黏膜僅8例表達(dá)，陽性率11.4%(見圖1，表1)。結(jié)果顯示Arl4c在結(jié)腸腺癌中的表達(dá)明顯高于正常結(jié)腸黏膜中的表達(dá)，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 結(jié)腸癌和正常結(jié)腸黏膜組織中Arl4c的表達(dá)情況 例(%)

Table 1 Expression of Arl4c in colon cancer and normal colon epithelium cases(%)

分組n陽性陰性χ2P結(jié)腸腺癌7039(55．7)?31(44．3)30．78<0．01正常結(jié)腸黏膜708(11．4)62(88．6)

與正常結(jié)腸黏膜相比，*P<0.05

圖1 Arl4c在結(jié)腸癌組織及正常結(jié)腸黏膜中免疫組織化學(xué)的表達(dá)Figure 1 Immunohistochemical expression of Arl4c in colon cancer and normal colon epithelium

2.2 結(jié)腸癌組織中Arl4c蛋白的表達(dá)水平與臨床病理因素的關(guān)系

Arl4c在結(jié)腸腺癌中的表達(dá)在不同性別、不同年齡、不同臨床分期及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，但在不同病理分化程度間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見表2)。

3 討論

Arl4c，也稱為Arl7，是含有192個(gè)氨基酸的屬于小GTP酶的蛋白[4]。Arl4c是Arf和Arl家族成員中的特殊成員，其特殊性在于其是唯一mRNA表達(dá)由肝臟X受體 - 類視黃醇X受體激動(dòng)劑或人巨噬細(xì)胞中的膽固醇負(fù)載誘導(dǎo)，Arl4c可能在AI(apoA-I)依賴性膽固醇分泌過程中起作用并且可以通過與微管的相互作用調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)囊泡運(yùn)輸[5]。Arl4c蛋白在其C-末端含有核定位信號(hào)，在細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)中都可以存在，其功能和定位取決于它們受控的GTP的結(jié)合和水解[6]。研究顯示Arl4c可能在膽固醇代謝紊亂中起著重要的角色[7]。

Arl4c與腫瘤的關(guān)系及其生物學(xué)功能仍然很大程度上未知，F(xiàn)ujii等[2]研究顯示Arl4c在肺癌中高表達(dá)，而在正常肺組織中未見表達(dá)，認(rèn)為Arl4c參與肺癌的發(fā)生，并且可能用于抑制肺癌細(xì)胞增殖和侵襲的新的靶向治療，同時(shí)認(rèn)為Arl4c表達(dá)的增加是由于APC、β-連環(huán)蛋白及Ras的遺傳改變，使得Wnt和EGF信號(hào)通路被活化，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。但是Su等[3]研究顯示高表達(dá)Arl4c可以抑制卵巢癌細(xì)胞的遷移，但是對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖沒有影響，并且高表達(dá)Arl4c mRNA的卵巢癌患者具有良好的預(yù)后。因此Arl4c在不同腫瘤中表達(dá)情況不同猶如其龐大的未知的生物學(xué)功能一樣值得探討。

表2 Arl4c的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系

Table 2 Relationship between Arl4c expression in colon cancer and clinicopathological characteristics

項(xiàng)目n陽性陰性χ2P性別0．035>0．05 男372116 女331815年齡0．875>0．05 ≤60歲341717 >60歲362214分化11．199<0．05 高分化26818 中分化332211 低分化1192臨床分期0．849>0．05 Ⅰ1367 Ⅱ311714 Ⅲ+Ⅳ261610淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移0．466>0．05 有21138 無492623

本研究顯示Arl4c在結(jié)腸癌中過表達(dá)，表達(dá)率為55.7%，而在正常結(jié)腸黏膜中表達(dá)率僅為11.4%。這一結(jié)果與Fujii等[2]的研究結(jié)果是基本一致的，其研究中正常黏膜不表達(dá)。Matsumoto等[8]報(bào)道Wnt和生長(zhǎng)因子信號(hào)傳導(dǎo)誘導(dǎo)Ar14c表達(dá)。 Arl4c在結(jié)腸癌與正常黏膜中表達(dá)的差異為以Arl4c為靶點(diǎn)的結(jié)腸癌的靶向治療帶來了期望。

結(jié)腸癌是胃腸道常見的腫瘤，嚴(yán)重危害著人類生命健康，隨著診斷技術(shù)及治療的進(jìn)步，5年生存率僅為50%。結(jié)腸癌的發(fā)生是多基因多階段的過程，現(xiàn)代靶向技術(shù)的不斷進(jìn)步，使得對(duì)結(jié)腸癌相關(guān)基因的探討變得更有意義。

本研究顯示Arl4c的表達(dá)在結(jié)腸癌不同性別、不同年齡、不同臨床分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而在不同病理分化的患者中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此Arl4c過表達(dá)可能在結(jié)腸癌的發(fā)生及早期發(fā)展中起到重要作用，提示其可能是有價(jià)值的腫瘤治療的新靶點(diǎn)。有研究認(rèn)為Ar14c是通過Wnt /β-連環(huán)蛋白通路參與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，這一轉(zhuǎn)化途徑是腫瘤發(fā)生的起始事件[9,10]。Arl4c有太多的未知需要我們?nèi)パ芯?，Arl4c在結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制，需要我們進(jìn)一步深入研究。

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Expression of Arl4c in colon cancer and its clinical pathological significance

ZI Yonghong1,JI Le1,CHEN Hongmei2,LI Yandong3

(1DepartmentofGeneralSurgery,AffiliatedHospitalofMedicalCollege,Yan’anUniversity,Yan’an716099,China;2DepartmentofNursing,Yan’anVocationalandTechnicalCollege;3DepartmentofPathology,FirstAffiliatedHospital,Xi’anMedicalUniversity)

ObjectiveTo explore the expression of Arl4c in colon cancer and its relationship with clinical pathological parameter of colon cancer.MethodsA total of 70 cases of colon cancer and 70 cases of normal colon epithelium were collected. The expression of Arl4c was measured by immnohistochemistry. The relationship between the expression of Arl4c and the clinical pathological parameter of colon cancer was analyzed.ResultsThe positive expression rate of Arl4c in colon cancer tissues was 55.7%, significantly higher than that in normal colon epithelium(P<0.05).Positive expression of Arl4c was correlated with the differentiation(P<0.05),but not correlated with gender, age, stage and lymph node metastasis(P>0.05).ConclusionArl4c is overexpressed in colon cancer,and it may be involved in colon cancer progression, and is considered as an attractive target for novel anticancer therapy.Key words: Arl4c； colon cancer； target therapy

陜西省教育廳科研計(jì)劃基金資助項(xiàng)目(12JK0765)

訾永宏, 男，1982-02生，本科，主治醫(yī)師，E-mail：ziyonghong2016@163.com

2016-10-25

R735.35

A

1007-6611(2017)01-0044-03

10.13753/j.issn.1007-6611.2017.01.010