陳嚇俤+謝淑芳+鄭小珍+鄭婉萍+林雅玲+鄭秋虹

摘要：以金線蓮（Anoectochilus roxburghii）為研究對象，采用超聲波法提取，用高效液相色譜法測定了金線蓮中槲皮素的含量。在單因素試驗基礎(chǔ)上，對乙醇體積分數(shù)、料液比、超聲時間、超聲功率4個因素進行了4因素3水平的正交試驗。結(jié)果表明，槲皮素在0.000 5～0.010 0 mg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，加樣回收率為84.61%～85.90%。金線蓮中槲皮素的最佳提取工藝條件為乙醇體積分數(shù)80%、料液比1∶25 （g∶mL）、超聲功率420 W、超聲時間30 min。在此工藝條件下，金線蓮中槲皮素的提取率為0.011 0%。試驗對金線蓮中有效成分含量的測定具有參考價值。

關(guān)鍵詞：金線蓮（Anoectochilus roxburghii）；超聲提取；槲皮素；高效液相色譜法

中圖分類號：S567.23+9；R284.2 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）20-5324-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.20.039

Abstract： Quercetin in Anoectochilus roxburghii was ultrasonically extracted and detected by HPLC. On the basis of single-factor experiment， an orthogonal test designed for the four factors including ethanol concentration， material-liquid ratio， ultrasonic time， ultrasonic power， and three levels was carried out. Results showed that the calibration curve of quercetin was well linear in the range of 0.000 5～0.010 0 mg/mL. The recovery was from 84.61% to 85.90%. The optimum extraction was carried out in 80%（V/V） ethanol for 30 min with the ultrasonic power of 420 W，and the material-liquid ratio of 1∶25（g∶mL）. Under the technical conditions， the extraction yield of quercetin in Anoectochilus roxburghii was 0.011 0%. The experiment could provide valuable reference for the content determination of effective components in Anoectochilus roxburghii.

Key words： Anoectochilus roxburghii； ultrasonic extraction； quercetin； HPLC

金線蓮（Anoectochilus roxburghii）是蘭科開唇蘭屬（Anoectochilus）的一種多年生草本植物，國家二級保護植物[1-3]。金線蓮的主要成分為甾醇、萜類、生物堿、多糖、黃酮類等，具有清熱解毒、消炎止痛、鎮(zhèn)咳和治糖尿病等功效[4，5]。槲皮素是黃酮類化合物中的一種，具有抗炎、抗氧化、抗過敏、抗菌、抗病毒、抗癌等作用。中草藥中槲皮素的測定方法主要有高效液相色譜法、毛細管電泳法、示波極譜法、熒光光度法、紫外分光光度法、薄層掃描光度法、伏安法等方法測定[6-9]。

本試驗以金線蓮為原料，采用超聲波輔助提取法提取金線蓮中的槲皮素，以乙醇體積分數(shù)、料液比、超聲時間、超聲功率為因素，通過單因素和正交試驗確定最佳提取工藝，旨在為金線蓮的進一步開發(fā)利用提供理論支撐和技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

金線蓮購自福建省金草生物科技有限公司。

1.2 儀器與試劑

高效液相色譜儀（美國安捷倫有限公司）；植物粉碎機（浙江武義屹立工具有限公司）；循環(huán)水式真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器公司）。

槲皮素、乙腈、乙醇均為分析純，購于國藥集團化學試劑有限公司；甲醇、石油醚均為分析純，購于溫州市華僑化學試劑有限公司。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件 C18色譜柱（Agilent ZORBAX SB-C-18，5 μm，4.6 mm×150 mm），流動相為水-乙腈（70∶30～10∶90，V∶V），梯度淋洗，初始流動相為70∶30運行5 min，20 min內(nèi)升至10∶90，并平衡5 min，流速為1.0 mL/min，柱溫25 ℃，進樣量20 μL。

1.3.2 繪制標準曲線 配制槲皮素1 mg/mL標準溶液，再配成0.005、0.020、0.040、0.060、0.080、0.100 mg/mL濃度梯度溶液，稀釋10倍后，過0.45 μm濾膜，進液相測峰面積。以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制槲皮素的標準曲線。

1.3.3 金線蓮中槲皮素的提取 稱取1 g脫脂金線蓮粉末，料液比（1∶10～1∶30）（g∶mL，下同）加入50%～90%乙醇溶液，超聲功率設為240～480 W，超聲10～30 min后，參照“1.3.2”，篩選出最優(yōu)的單因素。

1.3.4 正交試驗 在“1.3.3”的基礎(chǔ)上，對乙醇體積分數(shù)、料液比、超聲時間、超聲功率4因素作L9（34）正交設計，因素與水平見表1。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜分析

標準品和樣品提取液中槲皮素色譜如圖1和圖2。在該條件下，槲皮素分離度良好。

2.2 單因素試驗結(jié)果

單因素試驗結(jié)果見圖3至圖6。由圖3可知，乙醇體積分數(shù)為80%時，提取率最大，隨著體積分數(shù)地增大，提取率反而呈下降趨勢。由圖4可知，料液比為1∶20時，槲皮素的提取率最大，隨著溶劑逐漸增加，提取率反而有下降趨勢。由圖5可知，隨著超聲時間的增加，槲皮素提取率也逐漸提高；超聲時間30 min時，槲皮素的提取率最大；隨著超聲時間逐漸增加，提取率反而有下降趨勢。由圖6可知，隨著超聲功率地增加，槲皮素提取率也逐漸提高；超聲功率為360 W時，槲皮素的提取率最大；隨著超聲功率逐漸增大，提取率反而下降。

2.3 正交試驗結(jié)果

在單因素試驗的基礎(chǔ)上，設計乙醇體積分數(shù)、料液比、超聲時間、超聲功率的4因素3水平正交試驗，正交試驗結(jié)果見表2。由表2可知，最佳提取工藝為A2B3C2D3，即乙醇體積分數(shù)80%，料液比1∶25，超聲功率420 W，超聲時間30 min。在此條件下金線蓮中的槲皮素提取率為0.011 0%。

2.4 方法評價

1）精密度。取標準品槲皮素溶液20 μL，重復進樣6次，其峰面積RSD為0.32%

2）穩(wěn)定性。分別于0、1、2、3、4、5 h后精密吸取20 μL標準品槲皮素溶液，進HPLC分析。測得槲皮素峰面積RSD為1.09%。

3）重復性。平行制備6份金線蓮溶液，依次進液相分析，測得槲皮素峰面積RSD為1.25%。

4）回收率。取已知濃度的金線蓮溶液0.5 mL，加入0.5 mg/mL的槲皮素標準溶液0.5 mL，超聲混勻，進樣20 μL，平行測定6次，測得平均回收率為85.21%，RSD為0.70%

3 結(jié)論

金線蓮中槲皮素在0.000 5～0.010 0 mg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，該法儀器精密度良好，穩(wěn)定性良好，重復性較好，加樣平均回收率為85.21%，RSD為0.70%<5%，說明該方法準確度較好。從正交試驗結(jié)果可得出，最優(yōu)工藝條件為乙醇體積分數(shù)80%、料液比1∶25、超聲功率420 W、超聲時間30 min。該組合下槲皮素的提取率為0.011 0%。該法可為金線蓮中有效成分的測定及藥材真?zhèn)伪鎰e提供參考。

參考文獻：

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