何春歡 李紅 李嘉* 姜平川

1.廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022；2.廣西中藥質量標準研究重點實驗室，廣西 南寧 530022

壯藥華鳳仙質量標準研究

何春歡1,2李紅1,2李嘉1,2*姜平川1,2

1.廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022；2.廣西中藥質量標準研究重點實驗室，廣西 南寧 530022

目的:建立廣西壯藥華鳳仙的質量標準研究。方法:對華鳳仙的顯微鑒別、薄層色譜鑒別、水分、總灰分、浸出物等項目進行系統(tǒng)研究。結果:華鳳仙的薄層色譜鑒別特征明顯，專屬性強，制定了顯微鑒別、水分、總灰分和浸出物的控制指標。結論:華鳳仙建立顯微鑒別與薄層色譜鑒別項，水分不得過15.0%，總灰分不得過23.0%，浸出物不得少于8.5%。這些數(shù)據(jù)為華鳳仙的質量標準制定提供參考，對于保證其質量和臨床療效具有重要意義。

華鳳仙；質量標準；顯微鑒別；薄層鑒別

華鳳仙，別名水邊指甲花、象鼻花，為鳳仙花科植物華鳳仙ImpatienschinensisLinn.的全草，其味微苦、辛，具有清熱解毒、活血化瘀、消腫拔膿的功效，用于治療發(fā)熱、咳嗽、咳痰、肺結核、跌打損傷和瘀血疼痛，外用治蛇頭指瘡、癰瘡腫毒等病癥，為廣西民間常用中草藥[1-3]。據(jù)報道華鳳仙含有揮發(fā)油和黃酮成分，其中揮發(fā)油主要成分為正二十六烷和正十六烷酸乙酯[4-5]。 藥理研究表明，華鳳仙總黃酮提取物對大鼠心肌缺血再灌注損傷有明顯的保護作用[6]。本實驗主要對華鳳仙藥材性狀、顯微鑒別，薄層鑒別、水分、灰分等進行研究，為系統(tǒng)評價廣西華鳳仙質量提供科學依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LY-HPCCD 萬能視頻成像裝置(成都勵揚精密機電有限公司)，DFY-500高速萬能粉碎機(溫林市林大機械有限公司)，SXz-2.5-10馬弗爐(沈陽市節(jié)能電爐廠)，XS-205分析天平(梅特勤托利多儀器有限公司)。

1.2 試藥 華鳳仙樣品采自廣西各地(見表1)，經(jīng)本所黃云峰副研究員鑒定為鳳仙花科華鳳仙ImpatienschinensisLinn.的全草。對照藥材(自制，編號HFX-1，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學韋松基教授和廣西中醫(yī)藥研究院賴茂祥研究員鑒定為鳳仙花科華鳳仙ImpatienschinensisLinn.)。所用試劑均為分析純。

表1 樣品來源

2 方法與結果

2.1 鑒別

2.1.1 顯微鑒別 根據(jù)采集到的藥材樣品，分別制成顯微組織片和粉末片后觀察擬定，顯微組織片的制備以藥材經(jīng)固定液固定后按石蠟切片法制片染色，粉末片以藥材經(jīng)粉碎過四號篩后按粉末制片法制片，每個樣品均觀察不同產(chǎn)地不同批號藥材10張片以上。組織結構和粉末圖在顯微鏡下經(jīng)LY-HPCCD萬能視頻成像裝置拍攝成像(圖1～3)。不同批號的華鳳仙藥材性狀及顯微鑒別結果見表2。

表2 不同批號華鳳仙藥材性狀及顯微鑒別結果

2.1.1.1 莖的橫切面 表皮細胞1列，長橢圓形，排列整齊。皮層由數(shù)列類圓形薄壁細胞組成，排列疏松，有的細胞含有大量針晶或針晶束。皮層最內(nèi)1～2層細胞稍小，排列緊密整齊。中柱維管束6個環(huán)狀排列，外韌型，多4大2小；韌皮部所占面積較窄，由篩管、韌皮薄壁細胞組成；木質部由導管、木薄壁細胞等組成；髓射線較寬。髓部明顯。見圖1。

2.1.1.2 葉的橫切面 上、下表皮細胞各1列，但前者細胞長圓形或類圓形，較大，偶見氣孔與非腺毛，非腺毛細胞3～8個；后者細胞類方形，較小，其上可見氣孔。柵欄組織一列，類長柱形，不通過中脈，含葉綠體。海綿組織細胞排列疏松，內(nèi)有針晶束。中脈維管束1個，木質部位于上方，由薄壁細胞、導管等組成；韌皮部位于木質部的下方，所占面積較少，細胞小而排列緊密。葉下表皮主脈顯著突起。見圖2。

2.1.1.3 粉末 粉末黃綠色。纖維單個散在或成束，長梭形，先端鈍或平截，細胞壁多光滑，直徑18～25μm ?？梢娨恍┏书L方形、排列整齊的細胞，有的其中含有針晶束。草酸鈣針晶、柱晶多見，大小不一，散在或存在薄壁細胞內(nèi)。非腺毛多散在，稍彎曲或平直，竹節(jié)或牛角狀，由 2～8個細胞組成，直徑21～32μm，長62 ～133μm。葉上表皮細胞不規(guī)則多邊形，垂周壁稍平直。下表皮細胞多邊形，垂周壁多深波狀彎曲，氣孔較多，多為不定式 。導管多為梯紋、螺紋導管。見圖3。

2.1.2 薄層層析鑒別 取本品粉末1g，加95%乙醇10mL，超聲提取20min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。另取華鳳仙對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2015年版四部通則0502薄層色譜法)試驗，吸取上述二種溶液各5～10μL，分別點于同一羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G板上，以環(huán)己烷-丙酮(4：3)為展開劑，展開，取出，晾干，在365nm熒光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色斑點。見圖4。

2.2 檢查 在制定本品檢查指標限度時，筆者根據(jù)本品的特點，主要考察每種方法對所測本品的適用性，重點考察了水分、總灰分和浸出物三項指標。

2.2.1 水分 照水分測定法(《中國藥典》2015年版四部通則0832水分測定法 第四法(甲苯法))測定。共考察測定了7批樣品的水分含量，測定兩次取平均值。7批華鳳仙藥材水分含量試驗結果，最高水分含量為14.2%，最低水分含量為9.3%，因此，水分含量擬定不超過15.0%。測定結果見表3。

表3 華鳳仙樣品水分含量測定結果一覽表

2.2.2 總灰分 照灰分測定法(《中國藥典》2015年版四部通則2302灰分測定法)測定，共考察測定了7批華鳳仙藥材樣品的總灰分含量。7批華鳳仙樣品總灰分含量試驗結果為：最高總灰分為21.8%，最低總灰分含量為14.5%，因此，將本品總灰分擬定為不得超過23.0%。測定結果見表4。

表4 華鳳仙樣品總灰分測定結果一覽表

2.2.3 浸出物 照醇溶性浸出物測定法(《中國藥典》2015年版四部通則2201浸出物測定法)項下的熱浸法，共測定了7批華鳳仙藥材樣品的浸出物含量。最高含量為17.3%，最低含量為9.1%，故擬定華鳳仙藥材醇溶性浸出物含量不得少于8.5%。實驗結果見表5。

表5 華鳳仙樣品醇溶性浸出物(熱浸法)測定結果一覽表

3 討論

研究表明華鳳仙在性狀和顯微方面有明顯的特征，性狀方面如葉對生，邊緣有稀疏的鈍鋸齒；花腋生，萼片向內(nèi)彎曲成鉤狀；旗瓣圓形，翼瓣半邊倒卵形，基部一側有耳。顯微鑒別方面莖橫切面中柱維管束6個環(huán)狀排列，多4大2小，髓部明顯；粉末中纖維細胞壁光滑，非腺毛竹節(jié)或牛角狀，葉下表皮細胞垂周壁多深波狀彎曲。

筆者分別用乙酸乙酯、丙酮、95%乙醇、甲醇、水等溶劑對華鳳仙藥材進行超聲提取，過濾，濃縮后得到樣品液。點板后比較發(fā)現(xiàn)，95%乙醇提取物斑點信息較多，斑點清晰，故采用了乙醇作為溶劑；以不同比例的石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮、氯仿-甲醇、甲苯-丙酮、環(huán)己烷-丙酮等多種展開劑進行展開，結果以環(huán)己烷-丙酮(4：3)為展開劑分離效果較好；顯色方面，在365nm熒光下檢視效果較好。本文采用的TLC鑒別法色譜清晰，分離度好，可作為華鳳仙藥材質量控制的方法。

華鳳仙中的主要化學成分有揮發(fā)油和黃酮類等化合物，多為醇溶性成分，綜合考慮后選用醇浸出物作為指標。

[1]江蘇新醫(yī)學院.中藥大辭典(上冊) [M].上海:上?？茖W技術出版社, 1985: 917-918.

[2]中國科學院中國植物志編輯委員會(主編).中國植物志第47卷(2) [M].北京: 科學出版社, 2002: 28-29.

[3]梁啟成, 鐘鳴.中國壯藥學[M].南寧: 廣西民族出版社, 2005: 390.

[4]宋偉峰, 羅淑媛, 鐘鳴.超臨界CO2流體萃取華鳳仙揮發(fā)油成分分析研究[J].中國醫(yī)藥導報, 2012, 9(17): 142-143.

[5]彭定基, 李兵, 陳曉麗.華鳳仙總黃酮的含量測定[J].廣西中醫(yī)學院學報, 2010, 13(1): 54-55.

[6]宋飛, 曾瑜.華鳳仙總黃酮對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用及其機制探討[J].中國醫(yī)院藥學雜志, 2014, 34(7): 515-520.

(編輯：陶希睿)

2016-10-28

廣西科技廳重大專項計劃課題(桂科重1355001-4-6)；廣西科技廳重大專項計劃課題(桂科重1598005-10)；廣西衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科技專項(GZZY13-28)。

何春歡(1985-)，男，壯族，碩士，助理研究員，從事質量標準研究及天然產(chǎn)物活性研究。E-mail: hechunhuan0@163.com

李嘉(1969-)，女，漢族，碩士，副主任藥師，從事質量標準研究。E-mail: 1343157882@qq.com

R283

A

1007-8517(2017)02-0032-03