馮苗苗，劉素曉，王小曉，崔琳，謝世陽，沈思，朱明軍，王幼平

（1.河南中醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合臨床學(xué)科，河南鄭州450008；2.河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，河南鄭州450000）

論著

線粒體介導(dǎo)產(chǎn)生的活性氧在血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的腎臟損害中的作用*

馮苗苗1，劉素曉2，王小曉2，崔琳2，謝世陽2，沈思2，朱明軍2，王幼平2

（1.河南中醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合臨床學(xué)科，河南鄭州450008；2.河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，河南鄭州450000）

目的利用特異性的線粒體活性氧清除劑mitoTEMPO，探討線粒體介導(dǎo)產(chǎn)生的活性氧（ROS）在血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）誘發(fā)的腎臟損害中的作用。方法通過miniosmotic pump對小鼠皮下灌注AngⅡ復(fù)制AngⅡ依賴型高血壓模型，而對照組小鼠僅皮下灌注生理鹽水。AngⅡ依賴型高血壓小鼠分為AngⅡ組和AngⅡ+mitoTEMPO組，分別于皮下注射溶媒和mitoTEMPO。實(shí)驗(yàn)處理4周后，分別檢測小鼠尾動脈收縮壓、尿8-異構(gòu)前列腺素及24 h白蛋白排泄量、肌酐清除率和腎臟中線粒體所產(chǎn)生ROS含量的變化，并同時(shí)對腎臟組織病理學(xué)的改變進(jìn)行分析。結(jié)果與對照組比較，AngⅡ組小鼠血壓升高、尿8-異構(gòu)前列腺素和白蛋白排泄量增加、肌酐清除率下降，腎臟中腎小球硬化指數(shù)、腎小管間質(zhì)損害程度均增加，并伴有線粒體介導(dǎo)產(chǎn)生ROS水平的升高（P＜0.05）。除血壓外，mitoTEMPO能抑制上述病理性變化，從而減輕AngⅡ所誘發(fā)的腎臟損害（P＜0.05）。結(jié)論在AngⅡ誘發(fā)的高血壓過程中，特異性的線粒體活性氧清除劑mitoTEMPO抑制該過程誘發(fā)的腎臟損害，并同時(shí)伴有腎臟線粒體ROS產(chǎn)生的下降。因此，上述研究結(jié)果提示線粒體介導(dǎo)產(chǎn)生的ROS能夠促進(jìn)AngⅡ誘發(fā)的腎臟損害。

血管緊張素Ⅱ；高血壓；腎臟損害；線粒體；活性氧

高血壓是除糖尿病外導(dǎo)致慢性腎臟病（chronic kidney disease）的主要原因之一[1-2]。大量臨床觀察及動物實(shí)驗(yàn)顯示，線粒體功能與慢性腎臟病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)[3]。線粒體除主要通過氧化磷酸化合成產(chǎn)生ATP外，其功能還涉及細(xì)胞增殖和活性氧（reactive oxygen species，ROS）的產(chǎn)生等多種生理及病理過程[3]。因此，當(dāng)線粒體功能下降時(shí)，除ATP合成減少外，通常表現(xiàn)為ROS產(chǎn)生增多，從而造成組織器官的損害。大量研究已發(fā)現(xiàn)和證實(shí)，NADPH氧化酶介導(dǎo)產(chǎn)生的ROS促進(jìn)高血壓誘發(fā)的腎臟損害[4-5]。本研究擬通過血管緊張素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）誘導(dǎo)的高血壓小鼠模型探討特異性的線粒體ROS清除劑mitoTEMPO對腎臟功能以及形態(tài)學(xué)發(fā)生損傷時(shí)的影響，從而闡明線粒體介導(dǎo)產(chǎn)生的ROS對AngⅡ誘發(fā)的腎臟功能損害的影響作用。

1 材料與方法

1.1 動物

8～9周齡的SPF級雄性C57BL/6小鼠購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物有限公司。動物許可證號為：SCXK（京）2015-0011。

1.2 試劑

線粒體ROS清除劑mitoTEMPO購自美國EnzoLife Sciences公司，AngⅡ購自美國Sigma公司，ELISA尿蛋白檢測試劑盒購自美國Exocell公司，改良的Jaffe肌酐檢測試劑盒購自美國BioAssay System公司，尿8-異構(gòu)前列腺素檢測試劑盒購自美國Cayman Chemical公司。

1.3 造模及分組

經(jīng)1周的適應(yīng)性飼養(yǎng)以后，對小鼠行皮下注射甲苯噻嗪（4 mg/kg）和氯胺酮（80 mg/kg）混合麻醉劑進(jìn)行麻醉，于小鼠頸背部皮下包埋miniosmotic pump（Alzetmodel 1004，Durect Corp，Cupertino，CA，美國），分別皮下連續(xù)灌注生理鹽水或AngⅡ[1μg/（kg·min）]，持續(xù)4周。本實(shí)驗(yàn)小鼠分為以下3組：對照組，經(jīng)miniosmotic pump皮下灌注生理鹽水；AngⅡ組；AngⅡ+mitoTEMPO組。第2和第3組小鼠，則經(jīng)miniosmotic pump皮下灌注Ang II誘發(fā)高血壓及腎臟損害。另外，針對第2和第3組小鼠，于皮下包埋含AngⅡ的miniosmotic pump時(shí)，包埋另1個(gè)miniosmotic pump，經(jīng)該miniosmotic pump皮下注射mitoTEMPO的溶媒或mitoTEMPO[0.7 mg/（kg·d）]。mitoTEMPO溶于生理鹽水。手術(shù)后，連續(xù)3 d對所有小鼠注射青霉素鈉鹽。本實(shí)驗(yàn)對各組小鼠的觀察周期為4周。

1.4 動脈收縮壓的測定

本實(shí)驗(yàn)依據(jù)Tail-cuff體積描記法的原理測定小鼠清醒狀態(tài)時(shí)的尾動脈收縮壓。手術(shù)前及手術(shù)后各周，取各組小鼠，于30℃溫箱中加熱10 min，用固定器對其固定，等待小鼠安靜后，利用血壓測定儀（購自美國Visitech System公司，型號為BP-2000）對尾動脈收縮壓連續(xù)測定5次，取5次的平均值作為小鼠的動脈收縮壓值。本實(shí)驗(yàn)安排上午10：00～12：00為測定時(shí)間。

1.5 尿液及血漿分析

實(shí)驗(yàn)處理后第26天，分別取各組小鼠放于代謝籠中，待其穩(wěn)定后，收集24 h尿液，并稱小鼠體重。經(jīng)皮下注射甲苯噻嗪（4 mg/kg）和氯胺酮（80 mg/kg）麻醉小鼠后，于腹主動脈采集血樣，4℃、10 000 r/min條件下離心10 min，然后收集血漿置于-80℃冰箱保存。分別利用ELISA試劑盒檢測尿白蛋白，特異性的8-異構(gòu)前列腺素試劑盒檢測尿8-異構(gòu)前列腺素，改良的Jaffe肌酐檢測試劑盒測定尿液以及血漿中的肌酐濃度。

1.6 腎臟組織病理學(xué)分析

摘取小鼠右腎，稱重后，用4％的多聚甲醛進(jìn)行固定，石蠟包埋組織切片。采用過碘酸-雪夫反應(yīng)（PAS）與Masson三色法對4μm厚的組織切片進(jìn)行染色。為確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的客觀性，由一位不知道實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)安排的病理學(xué)技術(shù)人員，根據(jù)筆者已經(jīng)發(fā)表的相關(guān)方法[6-7]，對染色后的切片進(jìn)行腎小球硬化程度以及腎小管間質(zhì)損傷程度的分析評估。依據(jù)腎小球產(chǎn)生纖維樣硬化的范圍和腎小管的肥厚、擴(kuò)張與間質(zhì)纖維化程度以及炎癥細(xì)胞的浸潤程度等來對結(jié)果進(jìn)行半定量分析。

1.7 免疫組織化學(xué)染色

F4/80作為單核/巨噬細(xì)胞的標(biāo)記物，本實(shí)驗(yàn)利用卵白素-生物素-酶復(fù)合物（ABC）染色法對其進(jìn)行染色。常規(guī)方法處理石蠟包埋的組織切片，然后加入一抗F4/80單克隆抗體（大鼠抗小鼠），于4℃孵育12 h，清洗切片后，加入生物素化二抗即抗大鼠IgG（稀釋比例為1∶400），于室溫孵育1 h，然后加入ABC復(fù)合物，繼續(xù)于室溫下孵育45 min，最后添加二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色液顯色，于顯微鏡下觀察染色結(jié)果。采用加入正常大鼠血清或者不加一抗的方法作為本實(shí)驗(yàn)的陰性對照。依據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[8]，于×400倍鏡下對F4/80呈陽性細(xì)胞的數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，每張切片隨機(jī)觀察15個(gè)視野，最后取其平均值來表示單核/巨噬細(xì)胞的數(shù)目。

1.8 腎組織線粒體ROS測定

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，收取新鮮腎組織，按說明利用試劑盒進(jìn)行線粒體分離，并通過Bradford法進(jìn)行蛋白定量。然后，將分離獲得的線粒體重新懸浮于HEPES緩沖液（10mmol/L HEPES，140 mmol/L氯化鈉NaCl，5 mmol/L氯化鉀KCl，1.2 mmol/L磷酸一氫鈉Na2HPO4，5 mmol/L碳酸氫鈉NaHCO3，6 mmol/L葡萄糖，1 mmol/L氯化鎂MgCl2，2 mmol/L氯化鈣CaCl2，pH 7.4）中，取10μl樣本溶液加入96孔培養(yǎng)板中，同時(shí)加入2'-，7'-dichlorfluoresceindiacetate（DCFHDA，最終濃度為10μmol/L），然后在37℃條件下避光孵育30 min，最后，通過多功能酶標(biāo)儀于激發(fā)波長485 nm和吸收波長520 nm的條件下，進(jìn)行熒光強(qiáng)度的測定。數(shù)據(jù)以每毫克蛋白所具有的熒光強(qiáng)度表示。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用Prism 5.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。本實(shí)驗(yàn)各組小鼠血壓間的比較用兩因素方差分析法（Two-way ANOVA，Bonferroni檢驗(yàn)）。除血壓外，其他指標(biāo)多組間比較用單因素方差分析（One-way ANOVA，Bonferroni檢驗(yàn)）。所有分析均用雙側(cè)檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠血壓的變化

如圖1所示，手術(shù)前各組小鼠間的基礎(chǔ)血壓差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。手術(shù)后各周，對照組小鼠的血壓平穩(wěn)，沒有出現(xiàn)明顯改變。然而，AngⅡ組和AngⅡ+ mitoTEMPO組小鼠于手術(shù)后第1周開始較對照組小鼠血壓升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（130±9）mmHg vs（103±6）mmHg，（t=7.136，P=0.011）；（137±7）mmHg vs（103±6）mmHg，（t=8.987，P=0.009），且到手術(shù)后3、4周時(shí)達(dá)到高峰，但是，AngⅡ組和AngⅡ+mito TEMPO組小鼠血壓之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[術(shù)后4周：（156±9）mmHg vs（150±11）mmHg，t=1.535，P=0.726]。

圖1 各組小鼠血壓比較

2.2 各組小鼠尿白蛋白、8-異構(gòu)前列腺素排泄量及肌酐清除率的變化

如圖2所示，與對照組比較，AngⅡ組小鼠24 h尿白蛋白排泄量[（4.19±2.01）μg/24 h vs（54.63± 8.39）μg/24 h，t=12.970，P=0.006]，以及尿8-異構(gòu)前列腺素的排泄量均增加[（0.3±0.09）ng/24 h vs（2.59±0.31）ng/24 h，t=6.455，P=0.012]，但肌酐清除率表現(xiàn)出下降的現(xiàn)象[（352.10±51.21）ml/24 h vs（102.90±26.45）ml/24 h，t=10.900，P=0.007]。特異性的線粒體ROS清除劑mitoTEMPO能夠抑制AngⅡ所誘發(fā)的上述變化，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。尿白蛋白排泄量：[（54.63±8.39）μg/24 h vs（26.06± 9.19）μg/24 h，t=7.347，P=0.011]；肌酐清除率：[（102.90±26.45）ml/24 h vs（210.30±46.60）ml/24 h，t=4.697，P=0.017]；尿8-異構(gòu)前列腺素的排泄量：[（2.59±0.31）ng/24h vs（1.17±0.29）ng/24 h，t=4.015，P=0.020]。

2.3 各組小鼠腎臟組織病理學(xué)的變化

如圖3所示，AngⅡ組小鼠腎臟中腎小球出現(xiàn)纖維樣硬化現(xiàn)象，與對照組比較，其纖維樣硬化指數(shù)增高（0.08±0.06 vs 1.78±0.30，t=5.748，P=0.013），而經(jīng)過mitoTEMPO處理后，纖維樣硬化現(xiàn)象受到抑制，從而減輕AngⅡ誘發(fā)的腎小球纖維化（1.78±0.30 vs 0.72±0.20，t=3.584，P=0.022）。另外，如圖4所示，與對照組比較，AngⅡ組小鼠出現(xiàn)明顯的腎小管間質(zhì)纖維化、炎癥細(xì)胞的侵潤以及腎小管的肥厚與擴(kuò)張等現(xiàn)象，腎小管的間質(zhì)損傷程度增高（0.18± 0.06 vs 3.20±0.37，t=8.169，P=0.009）。而經(jīng)過mitoTEMPO處理后，上述變化受到抑制，從而減輕AngⅡ誘導(dǎo)的腎小管間質(zhì)損傷現(xiàn)象（3.20±0.37 vs 1.46±0.25，t=4.707，P=0.021）。

圖2 各組小鼠尿白蛋白排泄量（A）、肌酐清除率（B）及尿8-異構(gòu)前列腺素排泄量（C）的變化

圖3 各組小鼠腎臟腎小球硬化程度

圖4 各組小鼠腎臟腎小管間質(zhì)損害程度

2.4 各組小鼠腎臟免疫組織化學(xué)染色的變化

如圖5所示，與對照組比較，在AngⅡ組小鼠的腎臟中F4/80呈陽性的單核/巨噬細(xì)胞數(shù)量增加[（7.80±2.29）個(gè)/mm2vs（68.80±10.34）個(gè)/mm2，t= 6.391，P=0.012]，說明以單核/巨噬細(xì)胞的浸潤為主要特征的腎臟炎癥反應(yīng)加重，而經(jīng)過mitoTEMPO處理后，上述病理變化受到抑制，從而減輕和緩解AngⅡ所誘發(fā)的腎臟炎癥反應(yīng)[（68.80±10.34）個(gè)/mm2vs（29.40±4.95）個(gè)/mm2，t=4.128，P=0.023]。

2.5 各組小鼠腎臟線粒體介導(dǎo)所產(chǎn)生ROS的變化

如圖6所示，與對照組比較，在AngⅡ組小鼠腎臟，線粒體介導(dǎo)所產(chǎn)生的ROS增加[（20.67±4.76）灰度/mg蛋白vs（55.83±9.45）灰度/mg蛋白，t= 8.350，P=0.009]，mitoTEMPO處理抑制該病理變化，從而阻止在AngⅡ刺激下線粒體介導(dǎo)產(chǎn)生ROS [（55.83±9.45）灰度/mg蛋白vs（26.00±6.89）灰度/mg蛋白，t=7.084，P=0.011]。

圖5 各組小鼠腎臟F4/80呈陽性的單核/巨噬細(xì)胞的數(shù)量比較

圖6 各組小鼠腎臟線粒體介導(dǎo)所產(chǎn)生活性氧的變化

3 討論

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，通過皮下注射AngⅡ誘發(fā)的高血壓能夠造成腎臟功能及病理學(xué)損傷，而該損傷主要表現(xiàn)在8-異構(gòu)前列腺素與尿白蛋白排泄量的增加、肌酐清除率的下降、腎組織線粒體ROS產(chǎn)生的增多，以及包括腎小管肥厚、擴(kuò)張?jiān)趦?nèi)的腎小管間質(zhì)損傷與腎小球硬化等方面。而由AngⅡ誘發(fā)的上述所有腎臟損害均被特異性的線粒體ROS清除劑mitoTEMPO抑制，該研究結(jié)果表明線粒體介導(dǎo)產(chǎn)生的ROS能夠促進(jìn)AngⅡ所誘發(fā)的腎臟損害。

造成腎臟功能損傷的機(jī)制之一是由于高血壓發(fā)生及發(fā)展過程中的血壓升高[9]。通過對小鼠尾動脈收縮壓的測定分析結(jié)果說明在小鼠中通過皮下注射AngⅡ可誘發(fā)高血壓，而特異性的線粒體ROS清除劑mitoTEMPO可以緩解和抑制高血壓誘發(fā)的腎臟損害，然而，線粒體ROS清除劑mitoTEMPO并不影響皮下注射AngⅡ誘發(fā)的高血壓。因此，筆者推測，在由高血壓引起的腎臟損傷過程中，特異性的線粒體ROS清除劑mitoTEMPO介導(dǎo)的腎臟保護(hù)作用，主要是通過mitoTEMPO對線粒體所產(chǎn)生ROS的清除作用而不是對血壓的影響作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在皮下注射AngⅡ誘發(fā)的高血壓過程中，線粒體ROS清除劑mitoTEMPO表現(xiàn)出的腎臟保護(hù)作用并不是通過降低血壓來實(shí)現(xiàn)的。

在正常生理狀態(tài)下，線粒體的主要功能為通過氧化磷酸化產(chǎn)生能量，從而參與細(xì)胞的能量代謝，同時(shí)線粒體還參與對氧自由基和鈣離子介導(dǎo)的信息傳遞，以及對細(xì)胞衰老的調(diào)控作用，其中包括對細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)作用[3，10]。當(dāng)線粒體功能下降時(shí)，通常表現(xiàn)為ROS增多，從而造成組織器官的損害。因此，在病理狀態(tài)下，除NADPH氧化酶、黃嘌呤氧化酶和非耦聯(lián)的一氧化氮合成酶外，線粒體是ROS的重要來源，并且大量研究證實(shí)mitoTEMPO是特異性的線粒體產(chǎn)生的ROS清除劑[11-12]。近年來，除線粒體外，其他ROS產(chǎn)生酶即NADPH氧化酶和非耦聯(lián)的一氧化氮合成酶在促進(jìn)高血壓及其并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展中的作用受到了廣泛深入的研究[13]。目前，隨著對高血壓發(fā)病機(jī)制研究的進(jìn)展，有關(guān)線粒體功能及其所產(chǎn)生的ROS在該疾病中的作用逐漸受到人們的關(guān)注和研究。

目前，人們還沒有完全明確由高血壓而引起的腎臟功能損傷的具體機(jī)制。但是，已有相關(guān)報(bào)道證實(shí)氧化應(yīng)激反應(yīng)在該過程中發(fā)揮促進(jìn)作用[4-5]。在病理狀態(tài)下，大量的ROS可氧化包括細(xì)胞膜和DNA在內(nèi)的多種細(xì)胞成分，從而造成機(jī)體組織器官的損傷。8-異構(gòu)前列腺素作為氧化應(yīng)激產(chǎn)物之一，目前通常被用來作為測定對象來確定氧化應(yīng)激程度，以測定結(jié)果來反映組織器官內(nèi)ROS的水平。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過皮下注射AngⅡ誘發(fā)腎臟損害時(shí)，尿8-異構(gòu)前列腺素的排泄量增加，從而間接反映出腎臟內(nèi)氧自由基水平的增高。另外，筆者進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)和證實(shí)在AngⅡ誘發(fā)的高血壓過程中，腎臟組織內(nèi)線粒體介導(dǎo)產(chǎn)生的ROS增加。然而，經(jīng)過特異性的線粒體ROS清除劑mitoTEMPO處理后，AngⅡ?qū)е碌哪I臟損害受到抑制。因此，根據(jù)本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果，在AngⅡ誘發(fā)的高血壓過程中，線粒體介導(dǎo)產(chǎn)生的ROS對其誘導(dǎo)的腎臟損害具有促進(jìn)作用。

本研究證實(shí)AngⅡ可以誘發(fā)腎臟損害，而在此過程中線粒體介導(dǎo)產(chǎn)生的ROS發(fā)揮著非常重要的作用。在AngⅡ所致高血壓過程中，特異性的線粒體ROS清除劑mitoTEMPO通過抑制線粒體產(chǎn)生的氧自由基及其所介導(dǎo)的組織器官損害而實(shí)現(xiàn)其腎臟保護(hù)的作用。因此，在臨床中，通過一些藥理學(xué)方法改善線粒體功能，從而減少線粒體ROS的產(chǎn)生，或許可以作為防治高血壓，以及由高血壓造成的腎臟損傷的途徑之一。

[1]JHA V,GARCIA-GARCIA G,ISEKI K,et al.Chronic kidney disease:global dimension and perspectives[J].Lancet,2013,382 (9888):260-272.

[2]ROSTAND S G,KIRK K A,RUTSKY E A,et al.Racial differences in the incidence of treatment for end stage renal disease[J]. N Engl J Med,1982,306(21):1276-1279.

[3]CHE R,YUAN Y,HUANG S,et al.Mitochondrial dysfunction in the pathophysiology of renal disease[J].Am J Physiol,2014, 306(4):F367-F378.

[4]JENNINGS B L,ANDERSON L J,ESTES A M,et al.Involvement of cytochrome P-450 1B1 in renal dysfunction,injury,and inflammation associated with angiotensin II-induced hypertension in rats[J].Am J Physiol,2012,302(4):F408-F420.

[5]MATTACERASO G,SIMEOLI R,RUSSO R,et al.N-Palmitoylethanolamide protects the kidney from hypertensive injury in spontaneously hypertensive rats via inhibition of oxidative stress[J]. Pharmacol Res,2013,76:67-76.

[6]WANG Y,WANG D H.Aggravated renal inflammatory responses in TRPV1 gene knockout mice subjected to DOAC-salt hypertension[J].Am J Physiol,2009,297(6):F1550-F1559.

[7]WANGY,ZHUM,XUH,etal.Roleofthemonocyte chemoattractantprotein-1/C-Cchemokinereceptor2signaling pathway in transient receptor potential vanilloid type 1 ablation-induced renal injury in salt-sensitive hypertension[J].ExpBiol Med,2015,240(9):1223-1234.

[8]WANG Y,WANG D H.Role of substance P in renal injury during DOCA-salt hypertension[J].Endocrinology,2012,153(12): 5972-5979.

[9]POLICHNOWSKI A J,LU L,COWLEY A W.Renal injury in angiotensinⅡ+L-NAME-induced hypertensive rats is independent of elevated blood pressure[J].Am J Physiol,2011,300(4): F1008-F1016.

[10]WALLACE D C.Mitochondrial diseases in man and mouse[J]. Science,1999,283(5407):1482-1488.

[11]JAFFER O A,CARTER A B,SANDERS P N,et al.Mitochondrial-targeted antioxidant therapy decreases transforming growth factor-β-mediatedcollagenproductioninamurineasthma model[J].Am J Respir Cell Mol Biol,2015,52(1):106-115.

[12]SIMS C R,MACMILLAN-CROW L A,MAYEUX P R.Targeting mitochondrialoxidants may facilitate recovery of renal function during infant sepsis[J].Clin Pharmacol Ther,2014,96(6):662-664.

[13]WESELER A R,BAST A.Oxidative stress and vascular function:implications for pharmacologic treatments[J].CurrHypertens Rep,2010,12(3):154-161.

（張蕾 編輯）

Role of mitochondrial reactive oxygen species in angiotensinⅡ-induced renal injury*

Miao-miao Feng1,Su-xiao Liu2,Xiao-xiao Wang2,Lin Cui2,Shi-yang Xie2, Si Shen2,Ming-jun Zhu2,You-ping Wang2
(1.Clinical Department of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine,Henan University of Traditional Chinese Medicine,Zhengzhou,Henan 450008,China;2.The First Affiliated Hospital, Henan University of Traditional Chinese Medicine,Zhengzhou,Henan 450000,China)

ObjectiveTo clarify the role of mitochondrial reactive oxygen species(ROS)in angiotensinⅡ(AngⅡ)-induced renal injury by use of a specific scavenger of mitochondrial ROS,mitoTEMPO.MethodsThe mouse model of AngⅡ-dependent hypertension was induced with infusion of AngⅡvia subcutaneous miniosmotic pump, and the sham mice were given with normal saline.The AngⅡ-dependent hypertensive mice were divided into control(AngⅡ)group and experimental(AngⅡ+mitoTEMPO)group,which were subcutaneously administered with solvent and mitoTEMPO,respectively.Tail-cuff systolic blood pressure,and urinary excretion of 8-isoprostane and albumin,creatinine clearance,and the levels of mitochondrial ROS in the kidneys were assayed,and pathological changes of renal tissues were analyzed after 4 weeks of treatment.ResultsCompared with the shammice,AngⅡinfusion led to increased systolic blood pressure and urinary excretion of 8-isoprostane and albumin, decreased creatinine clearance,and enhanced glomerulosclerosis index and renal tubulointerstitial injury(P＜0.05). The results were accompanied by the enhanced mitochondrial ROS production in the kidneys(P＜0.05).However,the treatment with mitoTEMPO alleviated all the above changes except for blood pressure,leading to renal protection(P＜0.05).ConclusionsTreatment with a specific scavenger of mitochondrial ROS,mitoTEMPO,can inhibit renal injury during AngⅡ-dependent hypertension,which is associated with the decreased mitochondrial ROS production in the kidneys.Thus,the results suggest that mitochondrial ROS can promote AngⅡ-induced renal injury.

angiotensin II;hypertension;renal injury;mitochondria;reactive oxygen species

R544.1

：A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.02.002

1005-8982（2017）02-0013-06

2016-06-08

國家自然科學(xué)基金（No：81170243）；河南省科技創(chuàng)新杰出人才項(xiàng)目（No：124200510007）；河南省科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目（No：162102410048）

王幼平，Tel：0371-66248345；E-mail：wangyp8@163.com