李佳杏 孫 蓉

昆明中藥廠有限公司，云南 昆明 650228

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健脾顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

李佳杏 孫 蓉*

昆明中藥廠有限公司，云南 昆明 650228

目的：建立控制健脾顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法:采用薄層色譜法對健脾顆粒中白術(shù)、橙皮苷進(jìn)行鑒別；用高效液相色譜法測定制劑中橙皮苷的含量，采用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(Agilent XDB C18柱；4.6mm×250mm，5μm)，流動相為乙腈-0.2%磷酸溶液(19∶81)，流速為1.0mL/min，柱溫為30℃，檢測波長：283nm。結(jié)果：定性鑒別方法能檢出白術(shù)、橙皮苷，且薄層色譜中陰性無干擾，專屬性強(qiáng)；橙皮苷的線性范圍為0.131～4.192mg，平均加樣回收率為100.26%，RSD為2.21%。結(jié)論：該方法簡便、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用作健脾顆粒的質(zhì)量控制。

健脾顆粒；橙皮苷；白術(shù)； HPLC

健脾顆粒的處方來源于部頒中藥成方制劑第二冊[1](標(biāo)準(zhǔn)號：WS3-B-0381-90)，由黨參、炒白術(shù)、陳皮等6味藥組成，具有健脾開胃的功效，臨床用于脾胃虛弱，脘腹脹滿，食少便溏。原標(biāo)準(zhǔn)中無含量測定項(xiàng)和薄層色譜鑒別項(xiàng)，為了能全面地控制其藥品質(zhì)量，本文通過對處方中的組分進(jìn)行薄層色譜鑒別試驗(yàn)研究，確定白術(shù)、橙皮苷的薄層色譜鑒別方法。同時對陳皮、枳實(shí)中橙皮苷進(jìn)行了含量測定試驗(yàn)。通過多次反復(fù)試驗(yàn)，確定該方法簡捷，效果好，可用于本品的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 B3200S-T超聲機(jī)(上海必能信超聲)；高效液相色譜儀(美國Agilent 1100液相色譜儀系統(tǒng))。1.2 材料 橙皮苷對照品(批號：110712-201010)、白術(shù)對照藥材(批號：120925-201109)等均購自中國藥品生物制品檢定所；健脾顆粒(昆明中藥廠有限公司提供，規(guī)格：5g/袋)；高效進(jìn)樣使用的乙腈、甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 白術(shù)的薄層色譜鑒別 取本品10g，研細(xì)，加40mL乙酸乙酯和5mL水，振搖2min，傾取上清液，殘?jiān)m(xù)加乙酸乙酯30mL，振搖1min，合并上清液，每次分別用20mL 3%碳酸鈉溶液振搖提取3次，取堿水液，用濃鹽酸調(diào)pH值至2～3，每次用20mL乙酸乙酯振搖提取3次，分取乙酸乙酯液，用水30mL洗滌，分取乙酸乙酯液，蒸至近干，加甲醇0.5mL制成供試品溶液[2]。另外取0.5g白術(shù)對照藥材，加30mL水置150mL燒杯中煮沸，保持微沸30 min，濾過后保留殘?jiān)^續(xù)加水20mL煮沸，保持微沸20min，用脫脂棉濾過煎液，合并剩余的煎液并濃縮至約1mL，放冷，加乙酸乙酯15mL混合，“自振搖2min”起，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2015年版四部通則0502)試驗(yàn)[3]，吸取上述供試品溶液15～20μL，白術(shù)對照藥材溶液10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(7∶3)為展開劑，展開，取出，晾干。噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加熱3～5 min，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。結(jié)果見圖1。

2.1.2 橙皮苷的鑒別 取適量本品研細(xì)，稱取2g，加20mL甲醇，超聲30min，用定性濾紙濾過，將濾液蒸至近干，加2mL甲醇溶解制成供試品溶液。另取橙皮苷對照品適量，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液[2]。照薄層色譜法(《中國藥典》2015年版四部通則0502)試驗(yàn)[3]，吸取供試品溶液2～4μL，對照品溶液4μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)為展開劑，展開至約3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20∶10∶1∶1)的上層溶液為展開劑，展至8cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。結(jié)果見圖2。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱)，流動相為乙腈-0.2%磷酸溶液(19∶81)，流速為1.0mL/min，柱溫為30℃，檢測波長：283nm。按橙皮苷峰的理論塔板數(shù)計(jì)算應(yīng)不應(yīng)低于2000。見圖3。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取橙皮苷對照品適量，加甲醇溶解，制成每1mL含524μg的溶液，即得[2]。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品適量，研細(xì)，取2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率160W，頻率50kHz)30min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 陰性對照溶液的制備 取處方中除陳皮、枳實(shí)外的其他藥材，按處方劑量及制法和工藝要求制備缺陳皮、枳實(shí)的空白樣品，照含量測定項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制成陰性對照樣品溶液，同法進(jìn)行測定，結(jié)果在與對照品橙皮苷相同的保留時間位置，無其他干擾峰出現(xiàn)，表明除陳皮、枳實(shí)外的其他藥材和輔料對橙皮苷測定無干擾。見圖3。

2.2.5 線性關(guān)系考察 精密取上述對照品溶液分別稀釋成13.1、26.2、52.4、104.8、209.6、419.2g/mL的對照品溶液，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積；以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，以橙皮苷進(jìn)樣量(mg)為橫坐標(biāo)作線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=1471.42326X-10.75587(r=0.99974)，結(jié)果表明，橙皮苷在0.131～4.192mg之間呈良好線性關(guān)系。

2.2.6 精密度試驗(yàn) 按照測定方法，制備同一橙皮苷對照品溶液，精密吸取10μL重復(fù)進(jìn)樣8次，測定其峰面積值。相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.03%。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取141106批同一供試品溶液，設(shè)定分別在0、2、4、6、8、10h進(jìn)樣10μL，按以上色譜條件進(jìn)行測定。測得其峰面積值，RSD=0.252%，結(jié)果表明，在10h內(nèi)供試品溶液中的橙皮苷穩(wěn)定。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取批號為141106(5g/袋，相當(dāng)于飲片4g)的健脾顆粒，供試品制備方法分別制備9份供試品溶液，測定橙皮苷含量，平均含量為1.1133mg/g，RSD為1.48%。

2.2.9 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的健脾顆粒樣品(批號：141106，橙皮苷含量：1.1133mg/g)，添加橙皮苷對照品，按正文中含量測定方法測定橙皮苷含量，計(jì)算回收率，表明法有良好的回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.10 樣品測定 取6批健脾顆粒樣品分別按上述含量測定方法測定橙皮苷含量。測定結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

研究以黨參對照藥材作為對照，參照中國藥典一部黨參項(xiàng)下相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行本品TLC試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果：斑點(diǎn)模糊，色譜通道顏色較深，特征斑點(diǎn)不易檢視。又多次試驗(yàn)其他提取方法和展開劑，結(jié)果：陰性有干擾。

在山楂的薄層鑒別中，參照藥典方法，以山楂對照藥材作對照，試用過多種提取方法和展開劑，進(jìn)行薄層色譜試驗(yàn)研究。結(jié)果：供試品色譜中均無明顯對應(yīng)斑點(diǎn)。

在麥芽薄層鑒別，以麥芽對照藥材作為對照，參照《中國藥典》一部麥芽項(xiàng)下相關(guān)方法進(jìn)行本品TLC試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果：供試品色譜在與麥芽對照藥材的色譜相對應(yīng)的位置上顯相同顏色熒光斑點(diǎn)，陰性供試品無相對應(yīng)的斑點(diǎn)，但供試品色譜中對應(yīng)斑點(diǎn)不明顯，增加取樣量后，斑點(diǎn)無明顯改善，故此方法未采用。

[1] 國家藥典委員會.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑(第九冊).WS3-B-0381-90.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(四部)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

(編輯：穆麗華)

20416-10-18

李佳杏(1990-)，女，助理工程師，主要從事中藥質(zhì)量控制研究。E-mail：2421094484@qq.com

孫蓉(1968-)，女，高級工程師，主要從事中藥工藝及質(zhì)量控制研究。E-mail：534223032@qq.com

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