聶 明，邢 靜，畢彥芬，林凡忠

(1.山東省濟(jì)寧市任城區(qū)第一婦幼保健院病理科，山東 濟(jì)寧 272000；2.山東省濟(jì)寧市市直機(jī)關(guān)醫(yī)院，山東 濟(jì)寧 272019；3. 濟(jì)寧市婦女兒童醫(yī)院，山東 濟(jì)寧 272125；4.山東省濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院病理科，山東 濟(jì)寧272011)

Leptin及OB-R在宮頸癌中的表達(dá)及與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

聶 明1，邢 靜2，畢彥芬3，林凡忠4

(1.山東省濟(jì)寧市任城區(qū)第一婦幼保健院病理科，山東 濟(jì)寧 272000；2.山東省濟(jì)寧市市直機(jī)關(guān)醫(yī)院，山東 濟(jì)寧 272019；3. 濟(jì)寧市婦女兒童醫(yī)院，山東 濟(jì)寧 272125；4.山東省濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院病理科，山東 濟(jì)寧272011)

目的 探討瘦素(Leptin)及其受體(OB-R)在宮頸癌中的表達(dá)及與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。方法 選取2014年1月至2015年12月濟(jì)寧市任城區(qū)第一婦幼保健院病理科宮頸癌石蠟包埋組織31例，慢性宮頸炎組織標(biāo)本22例和宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變20例，采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)各組織Leptin及OB-R表達(dá)。結(jié)果 宮頸癌組織中Leptin及OB-R陽性表達(dá)率為80.65%和77.42%，明顯高于慢性宮頸炎和宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變，差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為26.36、18.23、20.95、16.19，均P<0.05)；慢性宮頸炎和宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變Leptin及OB-R陽性表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為0.32、0.02，均P>0.05)；Leptin表達(dá)與宮頸癌浸潤(rùn)深度和分化程度有關(guān)(χ2值分別為10.78、4.08，均P<0.05)，OB-R表達(dá)與宮頸癌浸潤(rùn)深度有關(guān)(χ2=5.28，P<0.05)。結(jié)論 Leptin及OB-R可能在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中起著促進(jìn)作用，值得進(jìn)一步研究。

瘦素；瘦素受體；宮頸癌；免疫組織化學(xué)

宮頸癌是臨床上發(fā)病率最高的婦科生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，雖然細(xì)胞學(xué)、宮頸高危型人乳頭瘤病毒等可以提高早期診斷水平，但仍然存在15%～25%的宮頸癌患者臨床確診時(shí)已處于中晚期，遠(yuǎn)期預(yù)后不佳[1-2]。 對(duì)于宮頸癌發(fā)生發(fā)展過程中相關(guān)生物學(xué)機(jī)制的探討，可以為改善患者的遠(yuǎn)期生存預(yù)后提供理論參考。瘦素(Leptin)及其受體(Leptin receptor，OB-R)可以通過影響細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)通路如PI3K/AKT、NOTCH/CYC等，抑制細(xì)胞凋亡、增強(qiáng)細(xì)胞增殖活性[3-4]。已經(jīng)證實(shí)Leptin及OB-R在卵巢癌、乳腺癌等惡性腫瘤中異常表達(dá)，并與疾病的生存預(yù)后具有一定的關(guān)系[5-6]，但在宮頸癌中的研究不足。本研究通過選取2014年1月至2015年山東省濟(jì)寧市任城區(qū)第一婦幼保健院收治的宮頸癌患者術(shù)后標(biāo)本，采用免疫組化分析，探討Leptin及OB-R在宮頸癌中的陽性率表達(dá)水平以及并初步探討了其與患者臨床病理特征間的關(guān)系。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2014年1月至2015年12月在濟(jì)寧市任城區(qū)第一婦幼保健院病理科保存的宮頸癌石蠟包埋組織31例，年齡46～61歲，平均年齡51.46±6.68歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理學(xué)證實(shí)；②臨床資料保存完整；③術(shù)前均未接受放療、化療及免疫治療；④患者知情同意并簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：臨床資料欠缺。

同時(shí)選取慢性宮頸炎組織標(biāo)本22例，年齡44～63歲，平均年齡52.20±5.87歲；宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變20例，年齡43～66歲，平均50.73±6.02歲,作為對(duì)照組。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

采用石蠟切片脫蠟至水，切片厚度3mm，3%雙氧水室溫孵育 5min，采用去離子水沖洗3次，每次3min，采用濃度為10% 牛奶蛋白(1g蛋白加入100mL純水)封閉，室溫孵育 5min，加入Leptin及OB-R抗體(鼠來源，南京碧云天生物科技有限公司)，37℃ 孵育2h，磷酸緩沖鹽溶液(phosphate buffer saline,PBS)沖洗3次，每次5min，滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗(兔來源，購(gòu)自羅氏檢測(cè)公司)，37 ℃ 孵育30min，PBS沖洗3次，每次5min，加入 堿性磷酸酯酶顯色試劑盒(Alkaline Phosphatase Color Development Kit，BCIP/NBT)色劑顯色5min，復(fù)染，脫水，透明，封片，鏡下觀察。Stemi 508OLIPICS電子顯微鏡顯微鏡購(gòu)自上海精密儀器有限公司，配套試劑購(gòu)自南京泰康生物科技有限公司。

1.3結(jié)果判斷

Leptin、OB-R陽性細(xì)胞為細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色或黃色顆粒細(xì)胞，>50%細(xì)胞著棕黃色或黃色、<50%細(xì)胞著棕黃色為陽性；<50%細(xì)胞著黃色或淡黃色或不著色為陰性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)整理分析采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料比較使用卡方檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1免疫組織化學(xué)染色

慢性宮頸炎、宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變組織Leptin及OB-R陽性表達(dá)分布在鱗狀上皮層，染色呈黃色或淡黃色；宮頸癌組織中Leptin及OB-R陽性表達(dá)位于腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)、胞核和部分癌巢周圍血管的內(nèi)皮和基層，見圖1。

2.2 瘦素及OB-R在不同宮頸組織中表達(dá)

宮頸癌組織中Leptin及OB-R陽性表達(dá)率為80.65%和77.42%，明顯高于慢性宮頸炎和宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變，差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為26.36、18.23、20.95、16.19，均P<0.05)；慢性宮頸炎和宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變Leptin及OB-R陽性表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為0.32、0.02，均P>0.05)，見表1。

2.3 瘦素及OB-R表達(dá)與宮頸癌臨床病理參數(shù)關(guān)系

Leptin表達(dá)與宮頸癌浸潤(rùn)深度和分化程度有關(guān)(均P<0.05)，OB-R表達(dá)與宮頸癌浸潤(rùn)深度有關(guān)(P<0.05)，見表2。

表1 Leptin及OB-R在不同宮頸組織中表達(dá)[n(%)]

Table 1 Expressions of Leptin and OB-R in different cervical tissues [n(%)]

表2 Leptin及OB-R表達(dá)與宮頸癌臨床病理參數(shù)關(guān)系[n(%)]

3討論

3.1宮頸癌背景分析

宮頸癌是我國(guó)現(xiàn)階段發(fā)病率和死亡率較高的生殖系統(tǒng)疾病，相關(guān)研究顯示在我國(guó)農(nóng)村地區(qū)，宮頸癌的發(fā)病率可達(dá)0.05%以上，特別是在年齡介于35～55歲的人群中，發(fā)病率更高[7]。宮頸癌患者容易早期發(fā)生髂內(nèi)淋巴結(jié)、閉孔淋巴結(jié)等的轉(zhuǎn)移，宮旁組織的浸潤(rùn)程度較高?；颊叩倪h(yuǎn)期生存指標(biāo)較差，無瘤生存期及疾病的無進(jìn)展生存期較短，中位生存時(shí)間不足32個(gè)月[8-9]。迄今為止臨床上仍然缺乏有效的宮頸癌患者遠(yuǎn)期評(píng)估指標(biāo)，宮頸HPV或者細(xì)胞學(xué)檢查雖然可以提高早期診斷水平，但預(yù)測(cè)疾病遠(yuǎn)期預(yù)后的靈敏度不足35%，具有明顯的局限性[10]。對(duì)于宮頸癌組織中Leptin及其受體的研究，可以為食管癌的綜合性治療提供新的生物學(xué)靶向治療靶點(diǎn)，且可以為患者的遠(yuǎn)期預(yù)后提供生存評(píng)估指標(biāo)。

3.2瘦素與宮頸癌發(fā)病關(guān)系研究

Leptin主要存在于脂肪細(xì)胞中，同時(shí)在上皮細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等中也存在少量的表達(dá)，Leptin結(jié)構(gòu)上包含了4個(gè)重復(fù)的脯氨酸結(jié)合區(qū)域，其羧基末端含有多個(gè)磷酸化的巰基結(jié)構(gòu)，可以通過結(jié)合靶細(xì)胞膜上的糖蛋白受體OB-R，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的第二信使如鈣離子、環(huán)磷酸腺苷等的含量。Leptin結(jié)合配體OB-R后，可以上調(diào)PI3K/AKT、STATA、JAK等信號(hào)通路下游效應(yīng)分子，促進(jìn)細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)不良細(xì)胞分化結(jié)局[11-13]。在卵巢癌、乳腺癌等組織中，Leptin的表達(dá)可平均上升25%以上，并與患者的細(xì)胞分化、臨床分期等病理類型密切相關(guān)。本研究的創(chuàng)新性在于探討了慢性宮頸炎、宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌這一連續(xù)性病理變化過程中的Leptin及其受體的表達(dá)，從而更有利于揭示Leptin在宮頸癌發(fā)病過程中的作用。

本研究采用免疫組化分析了Leptin及OB-R在宮頸病變組織中的異常表達(dá)，染色分析可以發(fā)現(xiàn)Leptin及OB-R主要表達(dá)于宮頸鱗狀上皮層，且在細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)等部位的富集較為明顯，Leptin及OB-R可能主要通過影響細(xì)胞內(nèi)的相關(guān)效應(yīng)分子的含量，從而影響到細(xì)胞增殖和分化。陽性率分析可見Leptin及OB-R在宮頸癌中的存在明顯的高表達(dá)表現(xiàn)，陽性率可達(dá)80%左右，表明Leptin及其受體可能在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮了重要的作用。Leptin及OB-R的結(jié)合，在抑制細(xì)胞凋亡蛋白(B-apoptosis protein BAX)、B淋巴細(xì)胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2，BCL-2)等表達(dá)的同時(shí)，可以促進(jìn)腫瘤血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)，促進(jìn)新生血管形成，促進(jìn)腫瘤病變的發(fā)展。

Yuan等[14]研究者通過回顧性分析了46例宮頸鱗狀細(xì)胞癌術(shù)后標(biāo)本的免疫組化資料，發(fā)現(xiàn)Leptin的平均陽性表達(dá)率接近75%，這與本研究的結(jié)論較為一致，且認(rèn)為L(zhǎng)eptin在宮頸癌組織中的表達(dá)明顯強(qiáng)于宮旁組織。但本研究并未發(fā)現(xiàn)慢性宮頸炎組織及宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤變組織中的Leptin表達(dá)差異，這與Yuan等的研究結(jié)論并不完全一致，Yuan等認(rèn)為鱗狀上皮內(nèi)瘤變的患者，其Leptin陽性率可較宮頸炎組上升15%左右，研究結(jié)論的差異考慮與樣本量的不足、檢測(cè)方法的不統(tǒng)一及上皮內(nèi)瘤變的級(jí)別差異等有關(guān)。本研究總采用的浸潤(rùn)深度的分組根據(jù)Yuan等[14]研究者的臨床薈萃分析結(jié)果提示進(jìn)行，更能夠提供宮頸癌的臨床進(jìn)展情況，臨床病理特征分析可以發(fā)現(xiàn)，Leptin表達(dá)與宮頸癌浸潤(rùn)深度和分化程度有關(guān)，OB-R表達(dá)與宮頸癌浸潤(rùn)深度有關(guān)，Leptin及其受體的激活，可以促進(jìn)表皮生長(zhǎng)因子受體、絡(luò)氨酸激酶受體等的表達(dá)，促進(jìn)宮頸癌組織的浸潤(rùn)，導(dǎo)致細(xì)胞分化不良。Leptin及其受體與宮頸癌的臨床特征的關(guān)系，提示其在疾病的預(yù)后或者臨床轉(zhuǎn)歸的評(píng)價(jià)中可能發(fā)揮了重要作用。

綜上所述，Leptin及OB-R在宮頸癌組織中異常高表達(dá)，并與宮頸癌患者的疾病浸潤(rùn)深度、細(xì)胞分化程度等密切相關(guān)，臨床上可以通過隨訪宮頸癌患者術(shù)后的免疫組化結(jié)果，進(jìn)而評(píng)估患者的遠(yuǎn)期預(yù)后。本研究的局限性在于對(duì)Leptin及OB-R的靈敏度、特異度等診斷學(xué)指標(biāo)的分析不足，Leptin預(yù)測(cè)遠(yuǎn)期生存風(fēng)險(xiǎn)的價(jià)值仍然需要深入探討。

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[專業(yè)責(zé)任編輯：張冠軍]

Expressions of Leptin and OB-R in cervical carcinoma and their relationship with clinical pathological parameters

NIE Ming1, XING Jing2, BI Yan-fen3, LIN Fan-zhong4

(1.PathologyDepartment,FirstMaternalandChildHealthCareHospitalofRenchengDistrictinJiningCity,ShandongJining272000,China; 2.JiningMunicipalHospitalofShandongProvince,ShandongJining272019,China;3.JingningMaternalandChildren’sHospital,ShandongJining272125,China;4.PathologyDepartment,FirstPeople’sHospitalofJiningCity,ShandongJining272011,China)

Objective To investigate the expression of leptin (Leptin) and its receptor (OB-R) in cervical carcinoma and its relationship with clinical pathological parameters. Methods Altogether 31 specimens of paraffin embedded tissue of cervical cancer, 22 specimens of chronic cervicitis tissue and 20 specimens of cervical intraepithelial neoplasia in pathology department of First Maternal and Child Health Care Hospital of Rencheng District in Jining City from January 2014 to December 2015 were selected. Expression of Leptin and OB-R in different tissues was detected by immunohistochemistry technique. Results Positive expression rate of Leptin and OB-R in cervical cancer tissue was 80.65% and 77.42%, which was significantly higher than that in chronic cervicitis and CIN, and the differences were statistically significant (χ2value was 26.36, 18.23, 20.95 and 16.19, respectively, allP<0.05). There was no significant difference in expression of Leptin and OB-R between chronic cervicitis and CIN (χ2value was 0.32 and 0.02, respectively, bothP>0.05). Expression of Leptin was correlated with the invasive depth and differentiation degree of cervical cancer (χ2value was 10.78 and 4.08, respectively, bothP<0.05), and expression of OB-R was correlated with invasion depth of cervical cancer (χ2=5.28,P<0.05). Conclusion Leptin and OB-R may play a promoting role in development of cervical cancer, and it is worth further study.

Leptin; Leptin receptor (OB-R); cervical cancer; immunohistochemistry

2016-08-23

聶 明(1977-)，男，主治醫(yī)師，主要從事瘦素受體在宮頸癌中表達(dá)的研究。

林凡忠，副主任醫(yī)師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.01.019

R711.74

A

1673-5293(2017)01-0054-03