王迎舉

（河南省食品藥品審評(píng)查驗(yàn)中心，鄭州450004）

HPLC法測(cè)定瘀痹平片中丹參酮ⅡA的含量

王迎舉

（河南省食品藥品審評(píng)查驗(yàn)中心，鄭州450004）

目的建立HPLC法測(cè)定瘀痹平片中丹參酮ⅡA含量的方法。方法采用Ultimate-C18色譜柱，甲醇-水（80∶20）為流動(dòng)相；流速0.8 ml·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm。結(jié)果丹參酮ⅡA的線性范圍為32.06～320.6 μg，相關(guān)系數(shù)r=0.9998，平均回收率為97.80%，RSD=1.09%（n=6）。結(jié)論本方法高效、便捷、專屬性強(qiáng)，定量準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可以為瘀痹平片的質(zhì)量控制提供參考。

丹參酮ⅡA；高效液相色譜法；瘀痹平片；含量測(cè)定

瘀痹平片是醫(yī)院制劑，由丹參、當(dāng)歸、北劉寄奴、雞血藤、紅花、乳香等藥材加工而成，具有祛邪通，絡(luò)活血化瘀之功效，用于瘀血型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等頑痹。丹參是常用中藥，臨床應(yīng)用歷史悠久，是該處方中的君藥，中藥材往往含有多種、多類化學(xué)成分，構(gòu)成了一個(gè)非常復(fù)雜的系統(tǒng)，對(duì)于中藥制劑來說，為保證藥物的安全和有效，其所含化學(xué)成分的穩(wěn)定性至關(guān)重要。丹參的主要化學(xué)成分包括丹參酮Ⅰ、ⅡA、ⅡB等，其中丹參酮ⅡA是丹參的主要脂溶性活性成分[1、2]，為保證制劑質(zhì)量，本文采用高效液相色譜測(cè)定法，測(cè)定制劑中丹參酮ⅡA的含量，從復(fù)方制劑的君藥成分著手，建立了控制藥品質(zhì)量的方法。

1 試驗(yàn)材料

1.1 儀器Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司）；AUW-220D電子分析天平（日本島津公司）；5210DT超聲處理器，隔膜真空泵（天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。

1.2 試藥丹參酮ⅡA對(duì)照品（批號(hào):110766-200619，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所）；瘀痹平片(由河南風(fēng)濕病醫(yī)院提供，批號(hào)20141112、20150206、20150810)；甲醇為色譜純（德國(guó)Merck公司），水為自制超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 提取條件復(fù)方制作的成分復(fù)雜，直接測(cè)定供試品雜質(zhì)對(duì)主成分的干擾較大，因此，供試品需要經(jīng)過適當(dāng)?shù)奶幚砗笤贉y(cè)定。比較了回流、超聲、索式提取等不同提取方法及不同的超聲提取時(shí)間制劑中丹參酮ⅡA的含量，結(jié)果見表1～2：

表1 不同提取方法測(cè)定供試品中丹參酮ⅡA的含量（mg/g）

表2 不同的超聲提取時(shí)間測(cè)定供試品中丹參酮ⅡA的含量（mg/g）

上述結(jié)果表明，采用超聲處理30分鐘，供試品中的丹參酮ⅡA已提取完全，故供試品處理方法采用超聲處理30分鐘。

2.1.2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇用紫外分光光度計(jì)對(duì)供試品溶液在200 nm～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果丹參酮ⅡA在270 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選擇270 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

表3 不同波長(zhǎng)丹參酮ⅡA的吸光度（nm）

考察不同的流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)，以甲醇-水、甲醇-0.5%醋酸溶液為流動(dòng)相，并比較了甲醇-水（60∶40）、甲醇-水（70∶30）、甲醇-水（80∶20）為流動(dòng)相的試驗(yàn)結(jié)果，色譜圖見圖1。

圖1 不同流動(dòng)相高效液相色譜圖

圖2 干擾試驗(yàn)高效液相色譜圖

通過上述一系列試驗(yàn)，最終選定的色譜條件為：采用Ultimate-C18(250×4.6 mm，5 um)為色譜柱，以甲醇-水（80∶20）為流動(dòng)相[4]，流速為0.8 ml·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm，柱溫：20℃，進(jìn)樣體積10 μl，實(shí)驗(yàn)室相對(duì)濕度：50%。

2.2 線性關(guān)系考察精密稱取丹參酮ⅡA對(duì)照品約16mg，置50 ml棕色量瓶中，加甲醇適量使溶解后，定容，搖勻。精密量取5 ml，轉(zhuǎn)移至100 ml棕色量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。按照“2.1”項(xiàng)色譜條件，分別進(jìn)樣2、4、6、8、10、15、18、20 μl，進(jìn)行測(cè)定，以丹參酮ⅡA峰面積（Y）對(duì)對(duì)照品進(jìn)樣量（X）進(jìn)行回歸，計(jì)算，得標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=3.7869X+0.2211，r=0.9998。結(jié)果顯示，丹參酮ⅡA在32.06～320.6 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3 對(duì)照品溶液的制備取丹參酮ⅡA對(duì)照品約16 mg，精密稱定，置50 ml棕色量瓶中，加甲醇適量使溶解后，定容，搖勻。精密量取5 ml，轉(zhuǎn)移至100 ml棕色量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.4 供試品溶液及陰性對(duì)照溶液的制備取瘀痹平片細(xì)粉約2.0 g，精密稱定，置50 ml棕色量瓶中，加甲醇35 ml，超聲30 min，放冷至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，以0.45 um微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取按處方比例及生產(chǎn)工藝制備缺丹參陰性制劑，按供試品溶液的制備方法，制成陰性對(duì)照溶液。

2.5 干擾試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10 μl，注入液相色譜儀，色譜見圖2。由圖1可知，在與對(duì)照品色譜峰相應(yīng)的位置上，供試品具有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性樣品無干擾。

2.6 精密度試驗(yàn)精密吸取同一對(duì)照品溶液10 μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積，記錄色譜圖，RSD=0.80%(n= 5)，結(jié)果表明儀器的精密度較好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一對(duì)照品溶液，分別在0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣10 μl，測(cè)定峰面積，記錄色譜圖。結(jié)果RSD=0.96%，表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)精密稱取已知含量為0.1266 mg/g的瘀痹平片6份（每份約1.5 g），置50 ml棕色量瓶中，分別精密加入丹參酮ⅡA對(duì)照品溶液2 ml，按照“2.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別精密吸取10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見表4。

表4 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品含量測(cè)定取瘀痹平片3批，分別按“2.4”項(xiàng)下方法制備供試液，精密吸取10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計(jì)算丹參酮ⅡA的含量，見表5。

表5 3批瘀痹平片中丹參酮ⅡA的含量

3 討論

參考有關(guān)文獻(xiàn)[3-5]，考察了樣品提取條件，比較了不同提取條件回流、超聲、索式提取等，結(jié)果表明超聲處理提取完全。比較超聲處理10分鐘，20分鐘，30分鐘，40分鐘，60分鐘，結(jié)果超聲處理30分鐘已提取完全，所以選用超聲處理30分鐘為提取條件。

測(cè)定波長(zhǎng)的選擇用紫外分光光度計(jì)對(duì)供試品溶液在200 nm～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果丹參酮ⅡA在270 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選擇270 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。文獻(xiàn)[6-9]中有采用甲醇-水（75∶25）、甲醇-水（70∶30）、甲醇-0.5%醋酸水等為流動(dòng)相，本文經(jīng)過實(shí)驗(yàn)比較甲醇-水（60∶40）、甲醇-水（70∶30）、甲醇-水（80∶20）為流動(dòng)相，結(jié)果以甲醇-水（80∶20）為流動(dòng)相，峰形較好，分離度高，故采用甲醇-水（80∶20）為流動(dòng)相。

丹參酮ⅡA的穩(wěn)定性主要受溫度和光照的影響，為了保證其含量應(yīng)盡量避免其降解，應(yīng)考慮在制劑制備和檢驗(yàn)過程中適當(dāng)降低提取、濃縮、干燥等過程中的溫度，并在制劑儲(chǔ)存過程中避光，以防丹參酮ⅡA降解。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（2010年版）一部[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：70-71.

[2]程立方，崔秀君.山東不同產(chǎn)地丹參飲片中丹參酮ⅡA含量分析[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2010，30（3）：264-265.

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[9]羅丹冬，丘振文.HPLC法測(cè)定丹七合提物中丹參素和丹參酮ⅡA的含量[J].中國(guó)保健營(yíng)養(yǎng)，2014，7（中）：4588.

Content Determination of TanshinoneⅡA in Yubiping Tablets by HPLC

WANG Yingju
(Henan Province Drug Approval Certification Center,Zhengzhou 450004,China)

Objective To establish a HPLC method to determination of TanshinoneⅡA in Yubiping tablets.Methods Ultimate-C18 chromatographic column was used methanol-waters(80:20)as mobile phase,at a flow rate of 1.0ml·min-1.The detection wavelength was at 270 nm.Results The TanshinoneⅡA showed a good linear relationship over the range of 32.06～320.6μg,r=0.9998. The average recovery was 97.80%,RSD=1.09%(n=6).Conolusion The method is efficient,convenient,specific,accurate quantitative and repeatability.It can provide the reference for quality control of Yubiping tablets.

TanshinoneⅡA;HPLC;Yubiping tablets;content determination

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.02.063

1672-2779（2017）-02-0139-03

：李海燕本文校對(duì)：高勇

2016-09-05）