楊 曦，黃偉偉，李裕和

染色體易位是最常見的人類染色體結(jié)構(gòu)異常。染色體易位根據(jù)遺傳物質(zhì)是否丟失可分為平衡易位和非平衡易位。染色體平衡易位，包括羅氏易位和相互易位，由于未造成重要遺傳物質(zhì)的丟失和增加，一般不會引起遺傳效應(yīng)，通常表型和智力正常[1]。但是可通過配子遺傳給下一代，可能導致染色體不平衡易位，引發(fā)復發(fā)性流產(chǎn)、胎兒畸形、患兒智力障礙、發(fā)育遲緩等癥狀。準確診斷不平衡易位對預后及評估再生育風險及產(chǎn)前診斷具有重要意義[2]。

染色體核型分析是細胞遺傳學最常用的診斷方法，但只能檢測出5～10 Mb以上的染色體異常。隨著技術(shù)的進步，染色體微陣列分析(chromosome microarray analysis，CMA)逐漸用于臨床檢測，可以檢測染色體微小不平衡發(fā)生的缺失和重復，但不能檢測出平衡易位、倒位等染色體拷貝數(shù)沒有發(fā)生變化的異常。本文對1例產(chǎn)前超聲檢測結(jié)果異常的患者，應(yīng)用CMA和傳統(tǒng)的染色體分析技術(shù)對患者臍血進行檢測，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料孕婦35歲，G1P0A0，非近親結(jié)婚。宮內(nèi)妊娠，單活胎。胎兒唇裂合并腭裂聲像(圖1)。胎兒心臟發(fā)育異常，臍動脈血流頻譜正常范圍。無胎兒畸形家族史，無家族病史。胎兒母親染色體正常，父親染色體平衡易位:46,XY,t(4;8)(p16;p23)。

圖1 胎兒唇腭裂

1.2實驗方法

1.2.1G顯帶分析對患者臍血標本采用改良同步化染色體培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)[3]，增加了阻斷、釋放和加秋水仙素時間，按常規(guī)方法制片、G顯帶分析要求達到500～550條帶。顯微鏡下計數(shù)20個核型，分析5個核型[3]，根據(jù)人類細胞遺傳學國際命名規(guī)則(ISCN)描述染色體異常核型。

1.2.2染色體微陣列分析(CMA) 征得患者同意并簽署知情同意書。經(jīng)腹臍靜脈穿刺術(shù)采集臍血，EDTA抗凝。臍血基因組DNA提取使用QIAGEN公司生產(chǎn)的QIAamp DNA Blood Mini Kit，用美國昂飛公司生產(chǎn)的cyto750k SNP基因芯片進行CMA檢測，實驗過程為：取5 μL全基因組DNA(250 ng)限制性內(nèi)切酶消化，將消化后產(chǎn)物末端連接接頭，PCR全基因組擴增連接產(chǎn)物，磁珠法純化PCR產(chǎn)物，將產(chǎn)物片段化、標記后，與雜交液預雜交，然后加入到芯片中，置于雜交儀50 ℃ 60 r·min-1雜交16～18 h，將雜交后芯片用工作站洗滌、芯片掃描儀掃描芯片。使用chromosome Analysis Suite(ChAS；version2.1)軟件對芯片掃描的數(shù)據(jù)進行分析，參照DECIPHER、ClinGen、OMIM、DGV等數(shù)據(jù)庫進行致病性分析。

2 結(jié)果

臍血染色體G顯帶結(jié)果正常。應(yīng)用ChAS軟件CMA分析發(fā)現(xiàn)4p16.3p16.1位置發(fā)生8.65 Mb缺失(arr[hg19] 4p16.3p16.1 (68 345～8 721 580)×1) (圖2)，該區(qū)域位置包含113個基因，其中64個為OMIM基因。8p23.3p23.1位置發(fā)生6.76 Mb重復(arr[hg19]8p23.3p23.1(158 048～6 922 052)×3)(圖3)，該區(qū)域位置包含31個基因,其中15個OMIM基因。

圖2 ChAS軟件分析4號染色體CMA結(jié)果圖

圖3 ChAS軟件分析8號染色體CMA結(jié)果圖

3 討論

本例患者胎兒臍血CMA檢測發(fā)現(xiàn)染色體4p16.3p16.1發(fā)生了微缺失，8p23.3p23.1發(fā)生了微重復，而胎兒父親為t(4;8)(p16;p23)平衡易位攜帶者，導致胎兒染色體4p16.3p16.1與8p23.3p23.1之間發(fā)生了不平衡易位。4p16.3p16.1缺失會導致WHS 綜合征(Wolf-Hirschhorn sydrome,WHS)，其發(fā)病率為 1/50 000，男女比例1∶2[4]。臨床表現(xiàn)為精神發(fā)育遲滯、癲癇、小頭畸型、心臟及骨骼異常、顱面異常等，其中“希臘頭盔”外貌及智力低下是其兩大特征。WHS表型輕重程度與丟失基因有關(guān)，缺失片段越大臨床表型越嚴重，其中WHSC1、WHSC2、LETM1、MSX1 基因認為與WHS密切相關(guān)[5-6]。WHS患者中25%有尿道畸形，33%出現(xiàn)大腦結(jié)構(gòu)異常，40%聽力障礙及唇腭裂，50%表現(xiàn)先天性心臟病，60%～70%骨骼異常，50%～100%有癲癇[7]。8p23.3p23.1重復會導致“8p23重復綜合征”，該綜合征國內(nèi)較少報道，臨床表現(xiàn)為語言發(fā)育遲緩、學習困難、肌張力低下、心臟異常等[8]。

染色體不平衡易位會導致染色體遺傳物質(zhì)發(fā)生缺失或重復[9]，核型分析能檢測出較大片段缺失或者重復的染色體不平衡易位，但由于核型分析只能檢測出5～10 Mb以上的染色體變異，對較小片段的不平衡易位不能檢測出。CMA分辨率較高(50～100 KB)，CMA能檢測出微小的缺失或重復，對染色體核型分析顯示正?；蛘咂胶庖孜坏幕颊?，進一步行CMA技術(shù)檢測可以確定是否發(fā)生微缺失、微重復、非平衡易位。本研究使用CMA中的SNP array基因芯片進行檢測，無需對標本進行培養(yǎng)，除了能夠檢出染色體拷貝數(shù)變異外，還能檢出單親二體、雜合性缺失和三倍體等[10]，但不能檢測出平衡易位等染色體拷貝數(shù)未發(fā)生改變的染色體異常。另外CMA能明確染色體異常的具體位置，以及判斷染色體增多或減少片段的來源。對超聲結(jié)果異常，而核型分析正常或平衡易位的胎兒，再進行CMA檢測，可以明確是否真正的正?；蛘咂胶庖孜唬瑢⒂欣谔岣呷旧w異常檢出率[11]，從而為臨床醫(yī)生提供有用的再發(fā)風險評估信息。

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