李，周紅昕，于新海

（吉林省生物研究所，吉林長春130000）

紅色耐寒月季“MoHaЛNЗa”的快繁技術(shù)

（吉林省生物研究所，吉林長春130000）

紅色耐寒月季“MoHaЛNЗa”，是吉林省生物研究所從俄羅斯引進(jìn)的一個全新的耐寒月季品種。本實(shí)驗以“MoHaЛNЗa”莖段為外植體，通過植物組織培養(yǎng)手段建立快速繁殖。該試驗獲得成功，豐富了東北地區(qū)耐寒花卉品種。

俄羅斯耐寒月季“MoHaЛNЗa”；組織培養(yǎng)；紅色耐寒月季；快速繁殖

相較于我國南方，北方城市綠化景觀水平相對較低，草花品種單一，壽命短，園林負(fù)擔(dān)沉重。針對此情況，可以借鑒俄羅斯等高緯度地區(qū)城市綠化的成功經(jīng)驗，在寒溫帶城市地區(qū)綠化中引入可連續(xù)開花耐寒月季作為多年生小灌木花卉，不但觀賞性高，并且抗低溫效果好，因此應(yīng)用前景非常廣闊。

1 材料與方法

1.1 外植體建立

材料為馴化2年的紅色耐寒月季“MoHaЛNЗa”。選取帶芽莖段的最好時期是5月末。材料選取當(dāng)年生半木質(zhì)化枝條中飽滿而未萌發(fā)的側(cè)芽。首先，將選好的枝條去葉，用牙刷蘸洗衣粉水輕輕刷洗后放入裝有多菌靈的三角瓶中震蕩清洗5分鐘。再用流水沖洗1~2小時，剪成6~8厘米左右?guī)б秆康那o段。超凈臺上，將莖段先用70%酒精溶液浸泡1分鐘，再置于0.1%的升汞溶液中消毒12分鐘,然后用無菌水沖洗4次，濾紙吸干后接種。

1.2 離體芽誘導(dǎo)培養(yǎng)

將無菌莖段分別接種于不同配方培養(yǎng)基上誘導(dǎo)萌芽。誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MS為基本培養(yǎng)基，加入不同濃度的細(xì)胞分裂素和生長素。后用正交法添加不同劑量的6-BA與不同濃度的NAA進(jìn)行配比試驗。組成4種培養(yǎng)基：第一種MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10mg/L、第二種MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.20mg/L、第三種MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.10mg/L、第四種MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.20mg/L。每種培養(yǎng)基均接種2到3個無菌莖段，培養(yǎng)2周后統(tǒng)計離體芽誘導(dǎo)率。

1.3 叢生芽繼代增殖培養(yǎng)

將誘導(dǎo)培養(yǎng)基上已萌發(fā)的“MoHaЛNЗa”嫩芽切下轉(zhuǎn)接到4種不同濃度的細(xì)胞分裂素和生長素的繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)。繼代培養(yǎng)基為：第五種MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10mg/L、第六種 MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.10mg/L、第七種 MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.20mg/L、第七種MS+6-BA1.00mg/L+NAA.20mg/L。每種培養(yǎng)基接入3～5株嫩芽，接種時單芽莖段長1厘米至2厘米左右，培養(yǎng)4周后統(tǒng)計叢生芽的數(shù)量以及高于1厘米的芽數(shù)。

1.4 試管苗壯苗培養(yǎng)

將生長旺盛的叢生苗切成單株接入到2種不同配方的壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)，每瓶接10～15株。4周后統(tǒng)計試管苗的生長情況。組成2種壯苗培養(yǎng)基為：第九種MS+NAA0.10mg/L、第十種MS+NAA0.20mg/L。

1.5 試管苗生根培養(yǎng)

將生長鍵壯，高度為5厘米左右的試管苗接入到生根培養(yǎng)基中。

每種培養(yǎng)基接入5~10個單株，接種15天后統(tǒng)計生根情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 離體牙的誘導(dǎo)結(jié)果

離體芽的誘導(dǎo)很快，接種7天后離體芽開始萌動，芽萌動后培養(yǎng)3周后，結(jié)果顯示：第一種的培養(yǎng)基離體芽少，出芽率為75%；第二種的出芽率為100%，離體芽生長細(xì)弱；第四種的離體芽萌動后產(chǎn)生愈傷組織；第三種出芽率為100%，且生長健壯。

反復(fù)試驗，結(jié)果表明：適合離體芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為：第三種。

2.2 叢生芽繼代增殖結(jié)果

耐寒月季“MoHaЛNЗa”在4種繼代增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)4周后，芽的增殖倍數(shù)和大于2厘米芽的比率存在著差異。其中第六種和第八種兩種培養(yǎng)基，增殖的叢生芽數(shù)量多，且生長健壯，芽的增殖倍數(shù)分別為2.16倍和3.3倍，高于2厘米的芽占75.%和71.7%，明顯高于其他培養(yǎng)基。

第五種的培養(yǎng)基中，叢生芽生長細(xì)弱，高于2厘米的芽僅占18.25%；第七種的培養(yǎng)基中，繼代芽產(chǎn)生愈傷組織。

反復(fù)試驗，結(jié)果表明：適合“MoHaЛNЗa”繼代增殖的培養(yǎng)基為第六種。

2.3 試管苗壯苗培養(yǎng)

將生長旺盛的叢生苗切單株接入2種培養(yǎng)基培養(yǎng)4周后統(tǒng)計試管苗的生長情況。結(jié)果顯示：第九種培養(yǎng)基中試管苗有70%生長健壯，30%有分化情況；第十種培養(yǎng)基中試管苗100%生長鍵壯。

反復(fù)試驗，結(jié)果表明：適合“MoHaЛNЗa”試管苗壯苗培養(yǎng)基為第十種。

2.4 試管苗的生根培養(yǎng)結(jié)果

將生長粗壯的耐寒月季接入到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)10天后開始長出白色的根，根系發(fā)達(dá)，粗壯，葉片深綠，長勢良好，生根率達(dá)為95%，平均根長位1.5厘米和2.5厘米。

3 結(jié)論

經(jīng)過兩年的試驗，建立了俄羅斯耐寒月季“MoHaЛNЗa”的組培快繁體系，組培苗能夠在長春地區(qū)露地安全越冬，其越冬成活率在80%以上。該研究的結(jié)果給規(guī)模化繁殖提供了可行性，極大地保存和豐富了東北地區(qū)耐寒花卉品種。

[1]王軍娥.牡丹組織培養(yǎng)技術(shù)的研究[D].西北農(nóng)林科技大學(xué).2008

[2]C. Leifert,Helen Camotta,W. M. Waites.Effect of combinations of antibiotics on micropropagated Clematis, Delphinium,Hosta, Iris and Photinia [J]1992,Plant Cell, Tissue and OrganCulture(02):153-160.

S685.12

A

10.14025/j.cnki.jlny.2017.22.023

李，碩士，助理研究員，研究方向：生物工程。